体外诊断试剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及试剂技术领域，尤其是涉及一种体外诊断试剂。
【背景技术】
[0002] 我国诊断试剂市场规模为30亿-40亿元，约占全球市场的1. 14%，年增长速度为 15% -20%。其中，体外诊断所用的试剂在临床检验应用中已普遍使用，且随着科学技术的 发展，体外诊断试剂的种类越来越多，用途也越来越广泛。在体外诊断试剂相关研发过程中 除了需要关注其准确性和重复性外，研发人员同样需要保证产品在保质期内的品质，因此 防腐剂的选择至关重要。
[0003] 防腐剂是能够杀灭或抑制微生物，特别是细菌和真菌生长的化学物质。但是，防腐 剂不是杀菌剂，没有很强的即时杀灭效果，只有在足够浓度并与微生物直接接触的情况下 才能发挥作用。
[0004] 优良的防腐剂应具备以下特性：①加入防腐剂应能有效抑制在试剂制备、保存和 使用过程中最有可能污染的一种或多种微生物的生长，防腐剂应对大多数细菌、真菌及酵 母有较强的抑制作用；②防腐剂在试剂中应有足够的溶解度，以保证其在两相或多相体系 中有足够的溶解度，从而保证其在两相或多相体系的试剂中具有足够浓度；③在试剂的有 效期内，防腐剂应非常稳定，不会因化学降解或挥发而降低浓度，防腐剂本身的理化性质和 抗微生物性质应稳定，不易受热和样品PH值的影响，在长期贮存时不分解失效、不挥发、不 与包装材料起作用；④防腐剂应不与试剂中的任何成分发生反应，不会影响试剂的检测效 果或防腐剂的效果；⑤使用成本低，容易获得。
[0005] 目前，国内的体外诊断所用试剂中大都采用化学剂作为防腐剂。最常用的防腐剂 有叠氮钠、抗生素类药物以及苯甲酸钠。叠氮钠作为防腐剂，虽然能对试剂起防腐作用，但 同时对反应也具有一定的抑制作用，使得反应速度缓慢，反应不能充分进行，导致试剂灵敏 度低。抗生素类药物根据其化学结构有着不同的抗菌谱，但是抗菌谱最广的也仅仅限于大 部分的原核微生物，无法对全部微生物起效。因此，不能起到完全防腐作用。苯甲酸及其盐 类的防腐机理是：苯甲酸钠亲油性大，易穿透细胞膜进入细胞体内，干扰细胞膜的通透性， 抑制细胞膜对氨基酸的吸收，并抑制细胞的呼吸酶系的活性，从而达到防腐的目的。其防腐 最佳PH为2. 5-4. 0,而免疫反应的反应体系范围为7. 2-7. 6,故杀菌效果不是很理想。所以， 寻找一种既能起防腐作用又能够对反应底物不起抑制作用的防腐剂十分必要。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种体外诊断试剂，它具有既能起防腐作用又不会对反应底 物起抑制作用的特点。
[0007] 本发明所采用的技术方案是：体外诊断试剂，包括：
[0008] 试剂R1，该试剂R1包含：pH值为7. 0-9. 0的20-100mM缓冲液、0? 01-2. Og/L表面 活性剂、〇. 1-20. 〇g/L稳定剂、防腐剂；
[0009] 试剂R2,该试剂R2包含：pH值为7. 0-9. 0的20-80mM缓冲液、可接受含量的包被 有抗体的胶乳颗粒、〇. 1-20.Og/L稳定剂、防腐剂；
[0010] 所述防腐剂为大蒜辣素，其浓度为0. 8-2.Og/L。
[0011] 所述包被有抗体的胶乳颗粒为包被有羊抗人P2-mIgG的胶乳颗粒、包被有抗胱 抑素C的胶乳颗粒、羊抗人视黄醇结合蛋白抗血清中的一种。
[0012] 所述抗体为多克隆抗体。
[0013] 所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、PIPES缓冲液中的一种。 [0014] 所述体外诊断试剂为免疫比浊法所用试剂。
[0015] 所述免疫比浊法为胶乳增强免疫比浊法。
[0016] 所述体外诊断试剂为胱抑素C测定试剂、0 2-微球蛋白测定试剂或视黄醇结合蛋 白试剂。
[0017] 本发明的优点是：既能起防腐作用又不会对反应底物起抑制作用。本发明的体外 诊断试剂中的防腐剂采用大蒜辣素（2-propene-1-sulfinothioic acid)，其来自于蒜汁。 众所周知，蒜汁富含丰富的氨基酸，而氨基酸是常用的蛋白保护剂，抗体本身就是免疫球蛋 白。所以，蒜汁除了具有良好的防腐功能以外，还对免疫比浊试剂中的抗体具有保护作用， 能够保持抗体原来的活性，使抗体与抗原能够更快的反应形成抗原抗体复合物，从而提高 试剂的灵敏度。通过实验，筛选得到蒜汁所含的大蒜辣素不仅具有良好的防腐效果，而且对 抗原、抗体的反应物无抑制作用。同时，大蒜辣素是一种具有抗念球菌属菌、隐球菌属菌和 须发癣菌等抗菌作用，是一种杀菌效果很理想的广谱杀菌剂。作用原理为：大蒜辣素中的二 烯丙基硫醚具有独特的生物活性。丙烯基是共辄结构基团，它的电负性较高，可部分的给毗 邻的硫原子提供电子，使硫的缺电子性减小，活性增大，且能产生一定量的具生物活性的含 硫基团，而许多含硫基团是已知的有效杀菌剂，能破坏细菌的蛋白质合成等生理过程。主要 特点就是抗菌广谱，抑菌力强，且对革兰氏阳性菌和阴性菌、霉菌都具有极强的杀灭作用， 可有效地抑制细菌的生长。
【附图说明】
[0018] 下面结合附图和实施例对本发明进一步说明：
[0019] 图1是本发明的大蒜辣素的结构式；
[0020] 图2是本发明的检测过程示意图。
【具体实施方式】
[0021] 实施例1
[0022] 结合图1和图2所示，本实施例的操作步骤：在全自动生化分析仪上，使用大蒜辣 素作为02-微球蛋白测定试剂的防腐剂，与添加叠氮钠的02-微球蛋白测定试剂进行灵 敏度比对，并对储存在2_8°C的添加大蒜辣素的0 2-微球蛋白测定试剂的性能进行考评 价，确定添加大蒜辣素是否达到防腐的效果。
[0023] 实验组0 2-微球蛋白测定试剂主要组成：
[0024] R1 TRIS缓冲液 20mmol/L 大蒜辣素 0.8g/L 表面活性剂 适量 R2： 包被有羊抗人3 2-mIgG的胶乳颗粒 适量 大蒜辣素 0.8g/L
[0025] 对照组0 2-微球蛋白测定试剂主要组成：
[0026] MiTRIS缓冲液 20mmol/L 叠氮钠 〇.95g/L 表面活性剂 同实验组 R2 包被有羊抗人P2-mIgG的胶乳颗粒 同实验组 叠氮钠 0.95g/L
[0027] 使用日立7180全自动生化仪，实验参数为：主波长546nm，样本3yl，R1试剂 240 y 1，R2试剂60 y 1，反应温度为37°C。
[0028] 用单位浓度的吸光度差值（A A)表达试剂的分析灵敏度：用已知浓度的样品测试 试剂，记录在试剂规定的参数下产生的吸光度改变，换算为lmg/L的吸光度差值（A A)，两 组对照结果见表1 :
[0029] 表1:0 2-微球蛋白测定试剂灵敏度结果比较
[0030]
[0031] 从实验结果可以看出，使用同等数量的包被有羊抗人0 2-m IgG的胶乳颗粒，以大 蒜辣素作为防腐剂的试剂灵敏度高于使用叠氮钠作为防腐剂的试剂。
[0032] 稳定性实验：在2_8°C贮存条件下，分别在0月，6月，12月，18月，21月对同一血 清样本进行测定，每个样本测定10次，取均值，结果见表2 :
[0033] 表2:添加大蒜辣素的0 2-