一种测定西红花多糖中的单糖组成的分析方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种利用离子色谱法测定西红花多糖中的单糖组成的分析方法，属于色谱分析技术领域。
【背景技术】
[0002]西红花又名番红花、藏红花，为鸾尾科植物番红花的干燥柱头，原产西班牙、伊朗和印度等国，经印度引入西藏，称为藏红花，习用至今。西红花是一种非常昂贵的药材，具有非常高的经济价值。西红花中主要含有黄酮、木脂素、多炔等类化合物，多糖也是西红花中主要有效成分之一。多糖是由10个以上的单糖基通过苷键连接而成的大分子化合物。传统的观念认为多糖生理活性不强，在中草药提取制备过程中通常将多糖作为杂质除去。自20世纪70年代以来陆续发现多糖及多糖复合物参与细胞生命的代谢和调节，具有增强免疫功能、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、保护消化系统等的生物学效应，还有抗菌、抗病毒、降血糖、降血脂、抗辐射、抗凝血等作用。因此，开发西红花多糖具有重要的现实意义。
[0003]目前多糖的测定方法主要有比色法、滴定法、高效液相色谱法、气相色谱法和高效毛细管电泳。比色法使用历史悠久，已广泛应用于多糖含量测定，特别是苯酚-硫酸法和蕙酮-硫酸法应用最广。菲林滴定法是一种还原滴定法，早已应用于多糖的定性反应，后发展用于多糖含量测定。国外自20世纪70年代以来开始应用凝胶排斥色谱测定蛋白质等高分子有机化合物，随着耐高压填料的出现，高效凝胶排斥色谱法已逐步应用在多糖含量测定上。与其它方法比较，高效液相色谱法具有分析速度快，分离效能、选择性、灵敏度高等方面的优点，是一种值得推广采用的方法。气相色谱法测定多糖可通过衍生法增加其挥发性，一般将多糖酸水解物或甲醇醇解转化为硅烷化产物或乙酞化产物。高效毛细管电泳法是近十几年来发展的一种快速、高效、简便、高分辨率及样品和溶剂消耗少，分离和分析生物活性物质的方法。本法原主要应用于蛋白质、多肽、核酸等大分子物质的分析，而在糖类分析中应用较少。
[0004]离子色谱作为高效液相色谱的一种，主要用于分析离子型物质，已经广泛应用于环境、电力、食品、半导体、药物化工等领域。近些年来，随着阴离子交换色谱-脉冲安培检测法的发展和不断完善，为糖的分析提供了强有力的技术支持。新型的有机高聚物阴离子交换固定相在PH0?14范围内稳定；糖类化合物具有弱酸性及亲水性，在比较强的碱性溶液中以阴离子形态存在；因此可用强碱性溶液做流动相进行阴离子交换分离。而糖类化合物的还原性为直接进行安培检测提供可能。阴离子交换色谱-脉冲安培法分析糖的方法已经广泛应用于生化、医药卫生、食品、饮料等方面。1995年以来，已经有多项采用离子色谱-脉冲安培法测定食品中糖类化合物的方法被美国分析家协会(A0AC)批准为国际标准方法。迄今为止，未见直接以离子色谱法测定西红花多糖中单糖组成的分析方法。
【发明内容】
[0005]本发明正是针对现有技术的改进，提供一种离子色谱-脉冲安培检测法直接测定西红花多糖的单糖组成的方法。本发明的具体技术方案如下:
[0006]本发明是一种离子色谱-脉冲安培检测法测定西红花多糖的单糖组成的方法，利用水提醇沉法提取西红花中的多糖，多糖经过水解后成单糖后，利用糖的弱酸性、亲水性和还原性，直接利用离子色谱仪-脉冲安培法检测，从而测定单糖的种类和含量。
[0007]本发明所述的离子色谱-脉冲安培检测法测定西红花多糖的单糖组成的方法，不需要经过衍生化等复杂操作，方法简单快速，且电化学检测方法灵敏度和选择性高。
[0008]本发明所述的离子色谱-脉冲安培检测法测定西红花多糖的单糖组成的方法可以用于一系列中草药中多糖的单糖组成成分分析。
[0009]本发明具有如下优点和效果:
[0010]1.本发明利用糖类化合物具有弱酸性及亲水性，在比较强的碱性溶液中以阴离子形态存在，因此可用强碱性溶液做流动相进行阴离子交换分离；而糖类化合物的还原性为直接进行安培检测提供可能。该方法解决了比色法、滴定法和凝胶色谱法不能分离测定某些特定单糖的缺点，同时也不需要进行气相色谱和毛细管电泳所需的衍生化操作，直接采用离子色谱-脉冲安培法检测西红花多糖组成，方法简便高效。
[0011]2.本发明采用脉冲安培法测定糖类化合物，该检测方法灵敏度高、选择性好，适用于中药复杂体系糖类化合物的测定。
【附图说明】
[0012]图1为7种单糖的标准色谱图；
[0013]图2为西红花多糖经水解后，样品单糖组成的色谱图；
[0014]图1中标记为:
[0015]1-岩藻糖，2-鼠李糖，3-阿拉伯糖，4-甘露糖，5-葡萄糖，6_半乳糖，7_果糖
[0016]图2中标记为:
[0017]1-岩藻糖，2-鼠李糖，3-阿拉伯糖，4-甘露糖，5-葡萄糖，6_半乳糖，7_果糖具体实施方案
[0018]下面结合说明书附图对本发明作进一步具体的说明:
[0019]称取西红花5.0g，粉碎后，用8倍95%乙醇浸提过夜脱脂，过滤，残渣置阴凉通风处风干。滤渣加15倍体积蒸馏水，沸水提取2h，过滤，提取两次，合并得到的提取液浓缩至20mL,离心，去除沉淀，在搅拌下缓缓加入95 %乙醇，至乙醇浓度达65%，静止过夜，离心，得到西红花粗多糖。取10mg粗多糖于25ml容量瓶中加5ml2mol/L硫酸溶液,在沸水浴中水解2h。将水解液中加入碳酸钡中和至中性，离心过滤去除沉淀，得到水解液，稀释50倍后过滤膜进离子色谱分析。配制浓度均为lmg/L的岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、果糖7种单糖的混合标准溶液，进离子色谱分析。离子色谱条件:色谱柱:Carb0PacPA10 (4 X 250mm)分离柱+CarboPac ΡΑΙΟ (4 X 50mm)保护柱；淋洗液组成:15mMNa0H ;进样体积:25 μ L ;柱温:30°C。检测方式:脉冲安培检测法(金电极)。
[0020]图1为上述色谱和检测条件下，7种单糖的标准色谱图(lmg/L)。
[0021]图2为西红花多糖经过提取，纯化和水解后，在上述色谱和检测条件下，样品西红花多糖的单糖组成色谱图。
【主权项】
1.一种测定西红花多糖中的单糖组成的分析方法，其特征在于利用糖类化合物具有弱酸性及亲水性，在比较强的碱性溶液中以阴离子形态存在，因此可用强碱性溶液做流动相进行阴离子交换分离；而糖类化合物的还原性为直接进行安培检测提供可能。该方法解决了比色法、滴定法和凝胶色谱法不能分离测定某些特定单糖的缺点，同时也不需要进行气相色谱和毛细管电泳所需的衍生化操作，直接采用离子色谱-脉冲安培法检测西红花多糖组成，方法简便高效。2.根据权利要求1所述的测定西红花多糖中的单糖组成的分析方法，其特征在于采用脉冲安培法测定糖类化合物，该检测方法灵敏度高、选择性好，适用于中药复杂体系糖类化合物的测定。
【专利摘要】本发明涉及一种利用离子色谱法测定西红花多糖中的单糖组成的分析方法，属于色谱分析技术领域。利用糖类化合物具有弱酸性及亲水性，在比较强的碱性溶液中以阴离子形态存在，因此可用强碱性溶液做流动相进行阴离子交换分离；而糖类化合物的还原性为直接进行安培检测提供可能。该方法解决了比色法、滴定法和凝胶色谱法不能分离测定某些特定单糖的缺点，同时也不需要进行气相色谱和毛细管电泳所需的衍生化操作，直接采用离子色谱-脉冲安培法检测西红花多糖组成，方法简便高效。本发明采用脉冲安培法测定糖类化合物，该检测方法灵敏度高、选择性好，适用于中药复杂体系糖类化合物的测定。
【IPC分类】G01N30/64
【公开号】CN105319307
【申请号】CN201410270426
【发明人】饶君凤, 吕伟德, 章卓梁, 朱作艺
【申请人】饶君凤
【公开日】2016年2月10日
【申请日】2014年6月12日