专利名称：鲍鱼多糖的制备工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种贝类的多糖提取领域。
背景技术：
多糖是一类重要的生物活性物质，参与了细胞的各种生命现象的调节，可作为免 疫促进剂，能控制细胞的分裂和分化，调节细胞的生长和衰老。对肿瘤细胞起抑制作用，同 时对正常细胞无毒害作用。目前，关于鲍鱼多糖提取的研究尚鲜见报道。国内大连工业大学 的朱蓓薇采用酶法成功地从鲍鱼中提取了多糖，并通过动物实验表明鲍鱼多糖具有抗炎、 抗氧化、抗疲劳等功效。酶法提取虽然可以使后续的浓缩和脱蛋白工艺更简易、省时，但主 要还是用于多糖的提取，且提取条件不易控制、得率偏低。海产类提取物时常含有一定量的重金属，考虑到食品安全的需要，通常采用离子 交换树脂的方法脱除重金属，进行纯化。但与此同时，树脂活化和再生时强酸强碱的使用会 造成环境污染。采用电渗析技术去除重金属，仅需使用少量电能，无需强酸强碱，进而杜绝 了环境污染，并且节约人力物力。
发明内容
本发明提供了一种鲍鱼多糖的制备工艺。对鲍鱼多糖的制备旨在提高鲍鱼附加值。本发明的技术方案是它包括以下步骤
A)将新鲜鲍鱼肉或脏器洗净后，加入鲍鱼肉或脏器重量的1-5倍的水后，打浆得到鲍 鱼肉或脏器预处理液，进行B步骤；
B)低温或常温下将预处理液通过高压脉冲电场处理后，得到PEF处理液，进行C步骤；
C)将经过高压脉冲电场处理的处理液通过离心或过滤进行固液分离，去除沉淀物，得 清液，进行E步骤；
D)将离心或过滤后所得清液进行电渗析处理，以除去重金属，通过每膜对的电压为 0. 6-1. 0V，取淡相，进行E步骤；
E)将经过C步骤所得清液或经过D步骤所得淡相浓缩至可溶性固形物含量3%-10%，加 入浓缩液体积2. 5-4倍的乙醇，室温下静置8-12h，离心分离，沉淀物即为鲍鱼多糖。与现有技术相比，本发明的突出优点是
本发明利用了高压脉冲电场(PEF)提取技术，能够最大限度地去除蛋白质等非多糖成 分，原料的利用率达到最大值；在保证高得率的同时操作均在低温或常温下进行，并有效缩 短了鲍鱼多糖的提取时间，从而能充分保持多糖的生物活性，并提高生产效率，减少废物对 环境的污染。利用电渗析技术去除重金属，简单、高效、减少环境污染，提高产品质量。
具体实施例方式本发明的鲍鱼多糖的制备工艺主要分为原料处理、提取、纯化和醇沉四个步骤。具体步骤如下
A)原料处理在0-30°C的常温或低温下，将新鲜鲍鱼取肉或内脏冲洗干净，去除结缔 组织，按照料液重量比1:1-1:5加入蒸馏水，打浆、过20-40目筛、搅勻，制备成鲍鱼预处理液。B)提取(可采用以下四种方法中的任意一种方法)
①在常温或低温下，将鲍鱼预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度15-35kV/cm、频 率200-3170Hz、脉宽1. 5μ s-17y s的高压脉冲电场进行处理，处理时间300-1500 μ s，得 PEF处理液。C)步骤10000-20000g离心，去沉淀，取上清液。②在常温或低温下，将鲍鱼预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度 15-35kV/cm、频率200-3170Hz、脉宽1. 5 μ s_17 μ s的高压脉冲电场进行处理，处理时间 300-1500 μ S0将PEF处理液10000-20000g离心，去沉淀，取上清液。将HAc溶液环境下配 制的浓度为2%-5%的壳聚糖胶体溶液与上清液按照体积比1 10-1 20加入，30-50°C水浴， 搅拌10-30min，絮凝蛋白质，充分吸附蛋白质，进行粗蛋白的分离。C)步骤离心或过滤，取 清液。③在常温或低温下，将鲍鱼预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度 15-35kV/cm、频率200-3170Hz、脉宽1. 5 μ s_17 μ s的高压脉冲电场进行处理，处理时间 300-1500 μ S。将PEF处理液10000_20000g离心，去沉淀，取上清液。向上清液中加入中性 蛋白酶进行酶解，PH 6-8，加酶量为6.0*104-2.4*105u/kg，37-42°C，搅拌酶解，反应3-4h， 100°C迅速灭酶5min ；冷却至室温。C)步骤离心或过滤，取清液。D)纯化将经过C步骤离心或过滤后所得清液进行电渗析处理，以除去重金属，通 过每膜对的电压为0. 6-1. 0V，取淡相；
E)醇沉将经过上述C步骤或D步骤所得上清液或淡相浓缩至可溶性固形物含量 3%-10%，加入浓缩液体积2. 5-4倍的乙醇，室温下静置8-12h，离心分离，沉淀物即为鲍鱼多糖。本发明的技术方案按如下所述实现 实施例1
在10°C下，取IOkg洗净、去结缔组织的鲍鱼肉或内脏，按料液比1:1加蒸馏水、打浆、 过40目筛、搅勻，制备成鲍鱼预处理液。将鲍鱼预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强 度15kV/cm，频率3170Hz，脉宽1. 5 μ s，处理时间1500 μ s，得PEF处理液，在分离因数为 15160G的条件下离心，去沉淀，取上清液。将所得上清液浓缩至可溶性固形物含量至6%，按 料液体积的2. 5倍加入纯度95%以上酒精，经1 静置醇沉。醇沉后，进行沉降离心，取沉 淀，即为鲍鱼多糖。经50°C冷冻干燥得鲍鱼多糖粉末210g。实施例2:
在20°C下，取IOkg洗净、去结缔组织的鲍鱼肉或内脏，按料液比1:2加蒸馏水、打浆、 过40目筛、搅勻，制备成鲍鱼预处理液。将鲍鱼预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强 度20kV/cm，频率1000Hz，脉宽2.0 μ s，处理时间1200 μ s，得PEF处理液。在分离因数为 15160G的条件下离心分离，去沉淀，取上清液。采用40个膜对的膜堆，通过电压MV，对上 清液进行电渗析处理，取淡相。将淡相处理液浓缩到可溶性固形物含量至6%，按料液体积的 2. 6倍加入纯度85%以上酒精，经Ilh静置醇沉。醇沉后，进行沉降离心，取沉淀，即为鲍鱼多糖。经50°C冷冻干燥得鲍鱼多糖粉末194g。样品经检测，重金属含量为7. Oppm，对比实 施例1降低三分之二。实施例3:
在30°C下，取IOkg洗净、去结缔组织的鲍鱼肉或内脏，按料液比1:4加蒸馏水、打浆、 过20目筛、搅勻，制备成鲍鱼预处理液。将鲍鱼预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度 25kV/cm,频率1500Hz，脉宽5. O μ s，处理时间800 μ s，得PEF处理液。在分离因数为15160G 的条件下离心分离，去沉淀，取上清液。将质量分数为3%的壳聚糖胶体溶液(体积分数3% 的HAc溶液环境下配制)与PEF处理液体积比1 10加入，并30°C水浴，搅拌、溶解30min， 充分吸附絮凝蛋白质。在分离因数为15160G的条件下离心，去沉淀，分离粗蛋白。采用40 个膜对的膜堆，通过电压^V，进行电渗析处理，取淡相。将淡相处理液浓缩到可溶性固形 物含量至6%，按料液体积的3倍加入纯度75%以上酒精，经IOh静置醇沉。醇沉后，进行沉 降离心，取沉淀，即为鲍鱼多糖。经50°C冷冻干燥得鲍鱼多糖粉末175g。样品经检测，重金 属含量为5. Oppm，对比实例一降低四分之三。实施例4:
在1°C下，取IOkg洗净、去结缔组织的鲍鱼肉或内脏，按料液比1:4加蒸馏水、打浆、过 40目筛、搅勻，制备成鲍鱼预处理液。将鲍鱼预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度 30kV/cm,频率500Hz，脉宽8.0 μ s，处理时间500 μ s，得PEF处理液。在分离因数为15160G 的条件下离心分离，去沉淀，取上清液。向上述处理液中加入中性蛋白酶进行酶解，PH 7， 加酶量为6. 0*104u/kg，40°C水浴，搅拌酶解，反应汕后，100°C迅速灭酶5min (灭酶工艺为 现有技术，可采用温度95-100°C、时间2-10 min内的任意值)。冷却至室温，在分离因数为 15160G的条件下离心，取上清液，得鲍鱼多糖酶解液。采用40个膜对的膜堆，通过电压36V， 进行电渗析处理，取淡相。将淡相处理液浓缩到可溶性固形物含量至6%，按料液体积的3. 5 倍加入纯度95%以上酒精，经9h静置醇沉。醇沉后，进行沉降离心，取沉淀，即为鲍鱼多糖。 经50°C冷冻干燥得鲍鱼多糖粉末155g。样品经检测，重金属含量为5. Oppm，对比实例一降 低四分之三。实施例5:
在10°C下，取IOkg洗净、去结缔组织的鲍鱼肉或内脏，按料液比1:5加蒸馏水、打浆、 过40目筛、搅勻，制备成鲍鱼预处理液。将鲍鱼预处理液通过高压脉冲电场处理，电场强度 35kV/cm,频率200Hz，脉宽17. 0 μ s，处理时间300 μ s，得PEF处理液。在分离因数为15160G 的条件下离心分离，去沉淀，取上清液。向上述处理液中加入中性蛋白酶进行酶解，PH 7，加 酶量为1.2*105u/kg，40°C水浴，搅拌酶解，反应3h后，100°C迅速灭酶5min。冷却至室温， 板框过滤，取滤液，得鲍鱼多糖酶解液。采用40个膜对的膜堆，通过电压40V，进行电渗析 处理，取淡相。将淡相处理液浓缩到可溶性固形物含量至6%，按料液体积的4. 0倍加入纯 度95%以上酒精，经他静置醇沉。醇沉后，进行沉降离心，取沉淀，即为鲍鱼多糖。经喷雾 干燥得鲍鱼多糖粉末148g。样品经检测，重金属含量为5. Oppm，对比实例一降低四分之三。
权利要求
1.一种鲍鱼多糖的制备工艺，其特征在于它包括以下步骤A)将新鲜鲍鱼肉或脏器洗净后，加入鲍鱼肉或脏器重量的1-5倍的水后，打浆得到鲍 鱼肉或脏器预处理液，进行B步骤；B)低温或常温下将预处理液通过高压脉冲电场处理后，得到PEF处理液，进行C步骤；C)将上述步骤的处理液离心或过滤分离，去除沉淀物，得上清液，进行E步骤；D)将经过C步骤离心或过滤后所得清液进行电渗析处理，以除去重金属，通过每膜对 的膜堆电压为0. 6-1. 0V，取淡相，进行E步骤；E)将经过C步骤所得清液或经过D步骤所得淡相浓缩至可溶性固形物含量3%-10%，加 入浓缩液体积2. 5-4倍的乙醇，室温下静置8-12h，离心分离，沉淀物即为鲍鱼多糖。
2.根据权利要求1所述的鲍鱼多糖的制备工艺，其特征在于所述的高压脉冲电场处 理的方法是在0-30°C的温度下，将鲍鱼肉或脏器预处理液通过电场强度15-35kV/cm、频 率200-3170Hz、脉宽1. 5μ s-17y s的高压脉冲电场进行处理，处理时间300-1500 μ S。
3.根据权利要求1或2所述的鲍鱼多糖的制备工艺，其特征在于它还包括Bl步骤， 所述的Bl步骤位于B步骤之后、C步骤之前，所述的Bl步骤为向B步骤所得的上清液中 加入壳聚糖胶体溶液，将HAc溶液环境下配制的浓度为2%-5%的壳聚糖胶体溶液与PEF处 理液按照体积比1:10-1:20加入，30-50°C水浴，搅拌10-30min，充分吸附絮凝蛋白质；离心 或过滤，分离粗蛋白，取清液。
4.根据权利要求1或2所述的鲍鱼多糖的制备工艺，其特征在于它还包括B2步骤， 所述的B2步骤位于B步骤之后、C步骤之前，所述的B2步骤为向B步骤所得的上清液中 加入中性蛋白酶进行酶解，在PH 6-8、加酶量为6. 0*104-2. 4*105u/kg、37_42°C的条件下搅 拌酶解，反应3-4h，95°C -100°C迅速灭酶5min ；冷却至室温，离心或过滤，取清液，然后再进 行C步骤。
5.根据权利1所述的鲍鱼多糖的制备工艺，其特征在于将E步骤所得的鲍鱼多糖经 过干燥得鲍鱼多糖粉末。
全文摘要
本发明涉及一种鲍鱼多糖的制备工艺，它包括以下步骤①将洗净的鲍鱼肉或脏器打浆得到鲍鱼预处理液，常温下采用高压脉冲电场处理；②采用壳聚糖对PEF处理后的鲍鱼料液进行絮凝除去粗蛋白，以提高多糖纯度；③采用电渗析技术对预处理液进行处理，有效脱去重金属；④采用乙醇沉淀制备鲍鱼多糖。本发明大幅度提高了多糖得率，在保证所得多糖的生物活性的同时，解决了传统酶法提取工艺多糖得率低的难题。
文档编号C08B37/00GK102140141SQ20111012316
公开日2011年8月3日 申请日期2011年5月13日 优先权日2011年5月13日
发明者余鑫, 卢晓燕, 方婷, 罗晓航, 陈锦权 申请人:漳州欧圣食品有限公司, 陈锦权