专利名称：银耳杂多糖或其提取物的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种杂多糖的用途，尤其涉及一种银耳杂多糖或其提取物在保护或修复胃黏膜中的用途。
背景技术：
银耳(Tremella faciformis Berk)，又称白木耳、桑鹅、《清异录》。属银耳目(Tremellales)，银耳科(Tremellacease)，银耳属(Tremella)。具有滋阴润肺、益气和血之功效。银耳杂多糖是从银耳子实体(或其微生物发酵液)中提取分离的一种酸性杂多糖。中国自古以来将银耳称之为高级补品和药品，药食两用之佳品是宫廷上等进补食品。
随着科学的不断发展以及技术手段的不断提升，人们对银耳有了重新的认识，国内外对银耳的主要成分——银耳杂多糖进行了大量的研究，表明银耳杂多糖具有提高免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血糖、血脂、促进蛋白质核酸合成、抗血栓等药理作用。日本已经把它广泛地运用于保健品、化妆品、药品中。银耳的开发应用，引起了科学界的极大兴趣，受到国际医药界和化妆品领域的广泛重视，成为当今研究开发的热门话题。
但是至今为止，银耳杂多糖的组成和结构以及对应的功能却很少有报导。本申请人运用特殊分离纯化工艺将银耳中活性多糖加以提炼，经现代分析技术检测鉴定，该银耳杂多糖的结构以α-(1-3)甘露糖为主链，主要由重量百分比为70-93％的中性总糖、6-28％的葡萄糖醛酸、0.1-3％的结合蛋白组成；该银耳杂多糖的平均分子量为85-160万道尔顿，其中分子量大于6000道尔顿的占90％(重量)以上，具体参见本申请人于2005年1月18日申请的申请号为200510023427.4的专利申请，并将其商品名命名为WSK；该专利申请还公开了银耳杂多糖及其提取物具有保湿滑润皮肤和粘膜、增强润滑感、抗氧化衰老、抗过敏、增稠稳定等功能。到目前为止，还没有银耳杂多糖具有保护受损胃黏膜的相关报道。
发明内容
本发明的目的是为了提供一种申请号为200510023427.4的专利申请中的商品名为WSK的银耳杂多糖或银耳杂多糖提取物的新用途，该新用途是银耳杂多糖或银耳杂多糖提取物在制备保护或修复胃黏膜的药品、饮食品或保健品中的用途。
本发明所述的银耳杂多糖的结构以α-(1-3)甘露糖为主链，主要由重量百分比为70-93％的中性总糖、6-28％的葡萄糖醛酸、0.1-3％的结合蛋白组成；该银耳杂多糖的平均分子量为85-160万道尔顿，其中分子量大于6000道尔顿的占90％(重量)以上。其中，所述的中性总糖主要包括下列含量的糖基35-60％甘露糖、10-25％岩藻糖、8-18％木糖和5-15％葡萄糖，上述含量是以银耳杂多糖重量计。
该银耳杂多糖的侧链有多种不同的变化组合，其中的一种组合已通过X光衍射方法测定为如下结构式I所示的结构单元
该结构单元的分子量为2578.5或2724.7。该糖结构是以α-(1-3)甘露糖(Manp)为主链骨架，其2位碳原子上连有2个β-(1-2)木糖(Xylp)，3个β-葡萄糖醛酸(GlcAp)，1或2个岩藻糖(Fuc)，1个甘露糖为侧链。
本发明所述的银耳杂多糖提取物主要包括重量百分比为80-98％的上述银耳杂多糖，0.1-3.3％的游离蛋白及0.5-8％的灰分；该银耳杂多糖提取物的平均分子量为75-140万道尔顿，其中分子量大于6000道尔顿的占75-98％(重量)。
本发明所述的银耳杂多糖提取物的制备方法包括如下步骤1)将银耳子实体原料用水在80-100℃下搅拌提取得粗提液；2)将步骤1)所得的粗提液进行过滤，滤液最终通过孔径为0.1-1μm的过滤器；3)在步骤2)所得的滤液中加入乙醇，使乙醇的最终体积浓度为50-85％，收集沉淀；4)将步骤3)所得的沉淀干燥。
其中，该银耳子实体原料为干燥的银耳子实体原料，将该干燥的银耳子实体原料用水浸泡、膨胀并清洗干净(包括去黄褐色基部)，每次用20-100倍、多次提取时不超过200倍(重量)于该干燥的银耳子实体原料量的水在80-100℃下搅拌提取得粗提液。
该银耳子实体原料也可以为新鲜银耳子实体原料、保鲜冷藏的新鲜银耳子实体原料或冷冻的新鲜银耳子实体原料，将该银耳子实体原料去黄褐色基部并清洗干净，每次用2-15倍、多次提取时不超过30倍(重量)于该银耳子实体原料量的水在80-100℃下搅拌提取得粗提液。
本发明所述的银耳杂多糖提取物的另一种制备方法包括如下步骤1)将按照常规微生物发酵方法(参考文献①银耳深层发酵条件的研究，吴大康等；食品科学；2002，Vol.23，No.1；64；②银耳菌分离方法的研究，张炳炽；中国食用菌；Vol.13，No.3；22)获得的银耳发酵液加热至80-100℃、保温0.5-2小时，过滤，清液最终通过孔径为0.1-1μm的过滤器得滤液；2)在步骤1)所得的滤液中加入乙醇，使乙醇最终体积浓度为50-85％，收集沉淀；3)将步骤2)所得的沉淀进行干燥。
本发明所述的银耳杂多糖的制备方法包括将采用上述制备方法制得的提取物进一步纯化的步骤。
其中，该纯化采用Sevag法及透析法来实现。当然，如本领域技术人员所知，其它的多糖纯化方法，如色谱分离法等也能制得本发明银耳杂多糖。
所述的药品可以是现有技术中的各种剂型，如粉剂、片剂、胶囊剂(包括软胶囊和硬胶囊)、液体剂、悬浮液、乳剂、口服液、果冻或冲剂。
所述的饮食品包括饮品和食品，为含有银耳杂多糖或银耳杂多糖提取物的浓缩液和/或干燥物的饮品或食品，对饮食品的应用没有限制，可以是现有技术中的各种剂型，如可以使用在粉剂、片剂、胶囊剂(包括软胶囊和硬胶囊)、颗粒、冲剂、果冻、饮料、乳制品或小点心烘烤品等。
所述的保健品可以是现有技术中的各种剂型，如粉剂、片剂、胶囊剂(包括软胶囊和硬胶囊)、液体剂、悬浮液、乳剂、口服液、果冻或冲剂等。
根据本发明，所述的药品中还可以含有其他保护或修复胃黏膜的药物，该银耳杂多糖可以起到辅助保护或修复胃黏膜的作用。该其他保护或修复胃黏膜的药物可以是如萘丁美酮，其可以抑制胃黏膜中性粒细胞活化。
所述的饮食品或保健品中还可以含有其他各种可食用的营养成分，以起到更佳的营养保健的作用。
所述的银耳杂多糖可以是粗提过的含有杂质的银耳杂多糖粗品，也可以是银耳杂多糖纯品。
所述的保护胃黏膜是指防止胃黏膜受损或者是减轻胃黏膜受损的程度。所述的修复胃黏膜是指修复受损的胃黏膜，以使受损的胃黏膜恢复到正常的健康状态。在修复胃黏膜的过程中，胃黏膜上皮细胞再生，防御功能得到增强，抵御致病因子的能力得到提高，胃黏膜的屏障能力得到增强。
具体实施例方式
现根据本申请人的申请号为200510023427.4的专利申请中的制备方法制备所需的银耳杂多糖提取物及银耳杂多糖(WSK)，将其详细描述如下实施例1将干燥的银耳子实体用水浸泡，膨胀后，去其黄褐色基部并清洗干净；把洗净后的原料放入提取罐中，加100倍于干料的水，100℃水温下搅拌提取4h，然后过滤，清液最终通过孔径为0.1-1μm的过滤器；均匀搅拌下，将滤清液和乙醇充分混合，使混合液体中的乙醇最终浓度为85％，收集沉淀，用纯乙醇脱水，收集沉淀；-40℃冷冻干燥，粉碎得银耳杂多糖提取物。产品收率20％(以干银耳重量计)。
实施例2将保鲜冷藏的银耳，去其黄褐色基部并清洗干净；把洗净后的原料放入提取罐中，加15倍于鲜料的水，100℃水温下搅拌提取4h，然后过滤，清液最终通过孔径为0.1-1μm的过滤器；滤清液加热浓缩，得浓缩液；均匀搅拌下，将滤清液和乙醇充分混合，使混合液体中的乙醇最终浓度为85％，收集沉淀，用纯乙醇脱水脱色，收集沉淀；80℃热风干燥，粉碎得银耳杂多糖提取物。产品收率2.1％(以鲜银耳重量计)。
实施例3将微生物发酵获得的银耳发酵液，加温100℃，0.5h，常规过滤，弃滤渣，清液最终通过孔径为0.1-1μm的过滤器；均匀搅拌下，将滤清液和乙醇充分混合，使混合液体中的乙醇最终浓度为85％，收集沉淀，用100％乙醇脱水脱色，收集沉淀；-40℃冷冻干燥，粉碎得银耳杂多糖提取物。产品收率0.55％(以发酵液重量计)。
实施例4
将实施例1～3的银耳杂多糖提取物用600倍(重量)去离子水溶解，溶解后，加入200mL的氯仿∶正丁醇＝4∶1(体积比)的混合溶液，充分混合后，用离心机离心(4000r/min，30分钟)，收集上清液。将离心后的上清液与上述氯仿正丁醇混合溶液按3∶1(体积比)混合，并用离心机离心(4000r/min，30分钟)，收集上清液。重复以上操作，反复处理至水相在280nm处的OD值(使用752紫外光栅分光光度计，上海精密科学仪器厂)不再下降为止。水相减压浓缩至三分之一，浓缩液与水相3倍量(体积比)的95％乙醇充分混合，4000r/min离心30分钟，得沉淀物。沉淀物用100倍(重量)去离子水溶解后，离心，去不溶物，将清液装入30cm长的透析袋内(透析袋可以通过5000分子量以下物质)进行透析(两头扎好吊装入有去离子水的瓶内，并使用去离子水流水冲洗12小时)，收集5000分子量以上物质。经透析后的清液与3倍量(体积)纯乙醇充分混合，再次4000r/min离心30分钟，得沉淀物，沉淀物用无水乙醇脱水后，60℃真空干燥，获得纯银耳杂多糖(WSK)。
效果实施例1银耳杂多糖(WSK)保护胃黏膜损伤样品实施例4得到的银耳杂多糖(WSK)，按体重60公斤的成人计，推荐日服量为0.8％(w/w)银耳杂多糖溶液，200mL/人，每天2次。大鼠按照0.8％(w/w)银耳杂多糖10倍于人的剂量，即6.6mL/200克，每天两次。
动物清洁级雄性大鼠9周龄，体重200±10克，由复旦大学实验动物科学部提供，合格证书SCXR(沪)2000-0002。
动物实验室清洁级屏障单元，合格证书02-1-2，室温23℃±0.5℃，湿度70％±5％。
仪器和试剂解剖器械，游标卡尺，酒精。
动物受试物给药途径每次剂量为6.6mL/大鼠，分两次灌胃。
实验方法银耳杂多糖对胃黏膜急性酒精损伤的大鼠胃黏膜保护的影响实验组的10只大鼠连续10天给予0.8％(w/w)银耳杂多糖溶液(每日灌胃2次)，用灌胃器通过口腔往胃里灌；另外对照组的10只大鼠正常饲养10天(每日灌胃2次等量蒸馏水)，解剖前大鼠禁食(不禁水)24小时。当天实验组灌胃0.8％(w/w)银耳杂多糖5倍剂量(3.3mL)，对照组当天灌胃等量蒸馏水；1小时后，再灌胃无水乙醇(剂量为1.0mL/鼠)；再过1小时后，处死动物；取胃于10％甲醛中固定浸泡；20分钟后，沿胃大弯剪开，去除胃内容物，将胃黏膜展开，用游标卡尺出测量出充血或弥漫性出血带的面积(精确到0.01mm)。以充血带和弥漫性出血带的总面积作为损伤程度的评价指标。
数据处理所有数据均以x±S表示，组间采用t检验分析显著性。实验结果见表1。
表1大鼠胃黏膜充血带和弥漫性出血带的总面积表
给药10天后，实验组大鼠胃黏膜充血带和弥漫性出血带的总面积小于对照组，实验组大鼠的充血带和弥漫性出血带的总面积为3.23±1.49mm2，相对于对照组大鼠(5.41±1.53mm2)具有显著性差异，P＜0.05(t检验)。
结论银耳杂多糖提取物及银耳杂多糖(WSK)对胃黏膜受损具有预防和保护功能，如对胃黏膜急性受损具有保护功能，尤其是对胃黏膜急性酒精损伤有较好的辅助保护功能。
权利要求
1.一种银耳杂多糖或银耳杂多糖提取物在制备保护或修复胃黏膜的药品、饮食品或保健品中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的药品为粉剂、片剂、胶囊剂(包括软胶囊和硬胶囊)、液体剂、悬浮液、乳剂、口服液、果冻或冲剂；所述的饮食品为含有银耳杂多糖或银耳杂多糖提取物的浓缩液和/或干燥物的饮品或食品，对饮食品的应用没有限制，可以使用在粉剂、片剂、胶囊剂(包括软胶囊和硬胶囊)、颗粒、冲剂、果冻、饮料、乳制品或小点心烘烤品等；所述的保健品为粉剂、片剂、胶囊剂(包括软胶囊和硬胶囊)、液体剂、悬浮液、乳剂、口服液、果冻或冲剂。
全文摘要
本发明公开了一种银耳杂多糖或银耳杂多糖提取物在制备保护或修复胃黏膜的药品、饮食品或保健品中的用途。
文档编号A61P1/04GK1931181SQ20051002974
公开日2007年3月21日 申请日期2005年9月16日 优先权日2005年9月16日
发明者刘桂云, 骆峰, 骆滨 申请人:上海市新文达生物科技有限公司