其上具有质量对照物的显微镜载玻片的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及分子病理学的领域。更具体地，本发明针对用于确保显微镜载玻片上 的组织样本的有质量的染色的设备和方法。
【背景技术】
[0002] 组织诊断对于患者护理而言正在变得更加重要并且要求愈加自动化W满足对于 吞吐量的日益增长的需求。自动化免疫染色技术被广泛地使用在大多数IHC实验室中。仪 器被设计成模仿手动免疫染色过程，包括诸如抗原修复、抗体和溶液施加、培育和清洗之类 的关键步骤。不同的系统具有不同程度的灵活性和载玻片容量，但是其目标是相同的：最小 化错误并且提供高质量的染色，因此可W从患者样本提取一致的解释。
[0003] 然而，不管运些自动染色器中的工程控制工具的供给如何，使组织具有染色溶液 的不正确分配和由于气泡或厚的、松散的或折叠的组织区段的存在而引起的患者样本的 不完整覆盖并不罕见，运然后产生伪阴性和非均匀染色的组织W供分析。参见例如化i， S.-民.，Taylor,C.民.，AntigenRetrievalImmunohistochemistryBasedResearchand Dia即ostics, 2010，Wiley,新加坡。另外，市面上的典型自动染色器将染色区域限制到大 约50mm长。一个制造商的盖玻片技术将染色区域限制到21X50mm。另一制造商的液体满 流空气混合协议覆盖了 25X50mm染色区域。当前不存在验证运些指定染色区域内的整个 组织区段被等同或完全染色的控制方法。
[0004] 当前，载玻片上的组织的不充分染色仅仅被回顾性地标识。许多并不如此明显 (not-so-obvious)的事件可能已经被忽视。来自化ko的化rcetTest?包括单独载玻片， 其包含具有〇、1+和3+的染色强度分数的=个团块化的、福尔马林固定的、嵌入石蜡的人类 乳腺癌细胞系，该单独载玻片作为批量对照物而被包括在每一个染色过程中。然而，批量对 照物不能标识批次内的每一个个体载玻片上的任何染色缺陷。
[0005] 另一先前的方案在已经包含阳性或阴性组织或细胞对照物的载玻片顶部上制备 患者样本区段。运些组织的源根据设施而变化并且其染色行为将由于患者可变性而从批次 到批次不同。如图1中所示，现有技术提供具有其上附着组织样本3和细胞对照物4的平 面基底2的组织样本载玻片1。细胞对照物4是W在样本和基底2的一个纵向端5之间的 区域中附着到载玻片的细胞团块（cellpellet)的形式。图2描绘了由马里兰州罗克维尔 的Bio-如ick公司销售的现有技术的另一组织样本载玻片1'，其包括用于癌症标记I肥化 验的细胞对照物 4a-i的 9 点式阵列化ttp://www.bio-quick.com/qc-dots%C2%AE-cance r-arra^ca-control-slides)。细胞对照物4a-i可W包括阳性和阴性对照物，但是每一个 被示为与彼此是不同的对照物。尽管载玻片1包含细胞团块阵列，但是其供给与包含单个 细胞团块的载玻片类似的信息。也就是说，细胞团块标记仅仅用于从被分析的组织样本接 收到的信号的校准。像载玻片1那样，载玻片1'将对照物4a-I定位在样本与基底2'的一 个纵向端5'之间并且可W因此取决于样本的大小和操作者的技术而靠近或远离患者的样 本。运些对照物到组织的单侧的位置因此不会提供组织样本自身是否被完全且均匀地染色 的可靠指示。
[0006] 现有技术因此缺少W确保组织样本已经W其整体既完全又均匀地被染色的方式 使用对照物的载玻片。
【发明内容】
[0007] 本发明提供具有邻近于样本附着区的阳性对照物样本的显微镜载玻片。运些载玻 片适合于组织样本的分析，诸如病理学染色，并且提供关于染色质量的实时确认。阳性对照 物样本或阳性对照物包括在组织样本的分析期间可W被检测的一个或多个生物标记。因 此，从阳性对照物染色的缺失将提供染色失败的实时标识。可选地，阴性对照物样本也可W 被包括在载玻片上。阴性对照物样本或阴性对照物不包含在阳性对照物中发现的一个或多 个生物标记。从阴性对照物染色因此也提供染色失败的实时标识。
[0008] 因此，在一方面中，本发明提供了一种用于要染色的组织样本的显微镜载玻片。显 微镜载玻片包括伸长的基本上平面的基底，该基底包括具有在其内可W附着组织样本的样 本附着区的第一主表面。载玻片还包括在邻近于样本附着区的第一位置处附着在第一主表 面上的第一阳性对照物样本和在邻近于样本附着区的第二位置处附着在第一主表面上的 第二阳性对照物样本。第一和第二位置被间隔为使得第一和第二阳性对照物样本的染色质 量指示组织样本的染色质量。
[0009] 在另一方面中，本发明提供了一种用于要染色的组织样本的显微镜载玻片。显微 镜载玻片包括伸长的基本上平面的基底，该基底包括具有在其内可W附着组织样本的样本 附着区的第一主表面。载玻片包括在邻近于样本附着区的第一位置处附着在第一主表面上 的第一阳性对照物样本和在邻近于样本附着区的第二位置处附着在第一主表面上的第二 阳性对照物样本。第一和第二位置被间隔为使得样本附着区的至少一部分在第一和第二位 置之间沿基底的纵轴延伸。
[0010] 在又一方面中，本发明提供一种制作本发明的显微镜载玻片的方法，该方法包括 将阳性对照物样本的薄层在第一和第二位置处转移和附着到显微镜载玻片上的步骤，其中 第一和第二位置被间隔为使得第一和第二阳性对照物样本的染色质量指示组织样本的染 色质量。
[0011] 在再一方面中，本发明提供一种分析方法，该方法包括利用用于分别定位在第一 和第二位置处的阳性对照物样本的检测手段来对本发明的显微镜载玻片染色的步骤。第一 和第二位置被间隔为使得阳性对照物样本的染色质量指示组织样本的染色质量，W及从至 少第一和第二位置检测阳性对照物样本。
【附图说明】
[0012] 图1描绘了具有在邻近于载玻片的组织附着区的位置处的作为对照物的细胞团 块的现有技术载玻片。
[0013] 图2描绘了具有在邻近于载玻片的组织附着区的位置处的多个细胞团块的另一 现有技术载玻片。
[0014] 图3描绘了具有跨载玻片的组织附着区的一部分定位的细胞团块的根据本发明 的实施例的载玻片。
[0015] 图4描绘了具有跨组织附着区的一部分定位的细胞团块的根据本发明的实施例 的另一载玻片。
[0016] 图5描绘了具有彼此与组织附着区相对并且沿载玻片的相对边缘定位的细胞团 块的根据本发明的实施例的又一载玻片。
[0017] 图6描绘了图5的载玻片的可替换实施例，其中细胞团块二者彼此纵向间隔并且 与载玻片的纵轴横向间隔。
[0018] 图7描绘了具有在载玻片的组织附着区附近定位的=个细胞团块的本发明的另 一实施例。
[0019] 图8描绘了具有在载玻片的组织附着区附近定位的四个细胞团块的根据本发明 的实施例的再一载玻片。
[0020] 图9描绘了具有彼此跨组织附着区定位的不同细胞团块对的根据本发明的实施 例的又一载玻片。
[0021] 图10描绘了具有沿载玻片的相对边缘并且邻近于组织附着区定位的不同细胞团 块的多个对的根据本发明的实施例的另外又一载玻片。
[0022] 图11描绘了具有由基本上均匀间隔的细胞团块周边定界的组织附着区的根据本 发明的实施例的可替换载玻片。
[0023] 图12描绘了具有由不同类型的团块周边定界的组织附着区的根据本发明的实施 例的另一可替换载玻片。
[0024] 图13描绘了具有在载玻片上的组织附着区附近的八个细胞团块的根据本发明的 实施例的载玻片。
[0025] 图14描绘了根据本发明的实施例的又一可替换载玻片，其中在载玻片的组织附 着区附近定位的细胞团块进一步被提供在显微镜载玻片的第一主表面上的支撑平台上。
[0026] 图15描绘了具有在载玻片的组织附着区附近定位的细胞团块的根据本发明的实 施例的又一可替换载玻片，其中组织样本被附着在显微镜载玻片的第一主表面上的平面凹 陷区内。
[0027]图16描绘了具有在载玻片的组织附着区附近定位的细胞团块的根据本发明的实 施例的又一可替换载玻片，显微镜载玻片进一步包括在样本附着区上方抬高的基本上平面 的标记区。
[0028] 图17描绘了根据本发明的实施例的用于制作载玻片的系统。
【具体实施方式】
[0029] 本发明提供了包括创新性对照物样本布局的显微镜载玻片，其提供了附着到载玻 片的组织样本的正确染色的较高置信度。本发明的载玻片适合于组织样本的自动染色和分 析。本发明的显微镜载玻片特别适合于组织样本的自动的、多回合的、复用的分析。运些载 玻片使得能够实现关于组织成像/分析期间的染色质量的确认。运些载玻片还提供通过在 每一个染色回合之后提供的图像回顾来确认在所有染色回合完成之后的染色质量。在一些 实施例中，本文所公开的显微镜载玻片和方法可W在组织化学、免疫染色、免疫组织化学、 免疫分析、免疫巧光或巧光原位杂交方面是特别可适用的。
[0030] 如图3中所示，本发明的第一方面提供了一种显微镜载玻片10,其用于对与其附 着的组织样本15染色。载玻片10包括伸长的基本上平面的基底12,该基底12具有第一主 表面14,该第一主表面14具有样本附着区16 (其周边由假想线指示)，组织样本15可W附 着在该样本附着区16内。载玻片10还提供在邻近于样本附着区16的第一位置处附着在 第一主表面14上的第一阳性对照物样本20a和在邻近于样本附着区16的第二位置处附着 在第一主表面14上的第二阳性对照物样本20b。第一和第二位置被间隔为使得第一和第二 阳性对照物样本20a和20b的染色质量指示组织样本15的染色质量。也就是说，当对照物 样本20a和2化分别被定位在组织样本