干燥综合征特异自身抗体免疫印迹试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种干燥综合征特异自身抗体免疫印迹试剂盒。
【背景技术】
[0002]干燥综合征为一种常见的自身免疫性疾病，主要累及唾液腺、泪腺以及其它多个重要器官。自身抗体是干燥综合征诊断中的重要生物标志物，目前主要用于干燥综合征诊断的自身抗体为SSA及SSB。但由于SSA及SSB仍缺乏较高的敏感性，对于很大一部分干燥综合征患者(尤其是早期患者)的诊断仍需要通过又创的唇腺活检，为干燥综合征的诊治带来极大的障碍。
[0003]目前，尚无专门针对干燥综合征特异自身抗体检测的免疫印迹试剂盒。大多数免疫印迹膜条涵盖多种自身免疫病如系统性红斑狼疮、硬皮病、皮肌炎/多发性肌炎相关的自身抗体，缺乏疾病特异性，造成临床资源的浪费。抗SP1、CA6、PSP抗体为新的可用于干燥综合征早期诊断的自身抗体，目前尚无检测抗SP1、CA6和PSP自身抗体的免疫印迹膜条。将SP1、CA6、PSP和抗SSA、SSB抗体联合用于干燥综合征的诊断，将极大地提高干燥综合征的早期检出率；针对干燥综合征特异自身抗体所开发的免疫印迹膜条将提高诊断试剂的使用效率。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种干燥综合征自身抗体免疫印迹试剂盒，利用免疫印迹技术，在一条印迹膜条上同时检测针对干燥综合征特异的自身抗体(SSA、SSB、SP1、CA6、PSP抗体)，为干燥综合征的诊断和鉴别诊断提供可靠的实验室依据。
[0005]为了达到上述目的，本发明由以下的技术方法来实现:
一种干燥综合征特异自身抗体免疫印迹试剂盒，其特征在于:所述的试剂盒组成成份包括:置反应槽内的印迹膜条、酶结合物、显色剂A、显色剂B、终止液、浓缩洗涤液、标准区带；将干燥综合征特异的自身抗原SSA (Ro)、SSB (La)、唾液腺蛋白质1 (salivary glandprotein 1，SP1)、碳酸酐酶 6 (carbonic anhydrase 6，CA6)、聰腺分泌蛋白(parotidsecretory protein，PSP)中的至少两种天然或重组抗原用SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳(PAGE)，按分子量大小依次分开，再通过印迹技术转移至印迹膜上，其印迹膜条上即含有按分子量大小不同排列的各种干燥综合征特异自身抗原；或将上述自身抗原通过其它物理吸附或共价结合的方式，以一定的排列次序固定在膜条上。将膜条放入反应槽与待测血清反应，如待测血清含有相应的自身抗体，将会与相应抗原结合，再加入酶结合物及显色剂，与标准带对照即可判断血清中是否含有干燥综合征特异自身抗体。干燥综合征特异自身抗体的有无及抗体的种类和数量，对干燥综合征诊断和鉴别诊断有重要的临床意义。
【具体实施方式】
[0006]以下的实施例和制剂实施例可更详细地说明本发明，但不以任何形式限制本发明。
[0007]实施例1
本试剂盒组成成份包括:置反应槽内的印迹膜条5板每板8条、酶联试剂0.5ml、显色剂A50ml、显色剂B50ml、终止液50ml、浓缩洗涤液50ml、标准区带。样品要求:静脉血
2-5ml，置试管待凝固后离心分离血清，血清标本保存于2-8°C，24小时内不能测试的标本应放_20°C保存，严重溶血，有絮状物或霉变的标本会影响测试。
[0008]测定步骤
1)洗涤工作液的配制
在2-8°C储存的20X浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释至1000ml，放入试剂瓶中，标签上注明配制时间，保存于4°C ;
2)在含有印迹膜条的反应槽中加入1ml样本稀释液湿润膜条，1分钟后移弃稀释液；
3)加入1ml已稀释的样本(含待测血清10ul)，置摇床上室温摇动30分钟或置37°C温箱30分钟;
4)弃去反应槽液体，加入洗涤工作液1ml，摇床轻晃，洗涤5分钟弃去反应槽液体，反复洗涤3次；
5)在反应槽中加入已稀释的酶结合物溶液，置摇床上室温摇动30分钟或置37°C温箱30分钟;
6)弃去反应槽液体，加入洗涤工作液1ml，摇床轻晃，洗涤5分钟弃去反应槽液体，反复洗涤3次；
7)在反应槽中分别加入显色剂A0.5ml，显色剂B 0.5ml ；
8)在摇床上室温摇动2-10分钟，显色；
9)待质控带和阳性区带显色清晰后加终止液0.5ml，在摇床上摇动2分钟；
10)用自来水冲去槽中液体，取出印迹膜条，置吸水纸上，待干后与标准带对照判断结果;
11)结果判断:将印迹膜条上起始线与标准带起始线对齐，观察阳性显色区带与对应的标准带位置即可判断显色区带是何种自身抗体。
【主权项】
1.一种干燥综合征特异自身抗体免疫印迹试剂盒。2.权利1所述的干燥综合征特异自身抗体免疫印迹试剂盒特征在于:所述的试剂盒组成成份包括:置反应槽内的印迹膜条、酶结合物、显色剂A、显色剂B、终止液、稀释液、浓缩洗涤液、标准区带。3.权利2所述的印迹膜条特征在于:将干燥综合征特异的自身抗原SSA(Ro)、SSB(La)、唾液腺蛋白质 1 (salivary gland protein 1，SP1)、碳酸酐酶 6 (carbonic anhydrase.6，CA6)、聰腺分泌蛋白(parotid secretory protein，PSP)中的至少两种天然或重组抗原用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，按分子量大小依次分开，再通过印迹技术转移至印迹膜上，其印迹膜条上即含有按分子量大小不同排列的各种干燥综合征特异自身抗原；或将上述自身抗原通过其它物理吸附或共价结合的方式，以一定的排列次序固定在膜条上；将膜条放入反应槽与待测血清反应，如待测血清含有相应的自身抗体，将会与相应抗原结合，再加入酶结合物及显色剂，与标准带对照即可判断血清中是否含有干燥综合征特异自身抗体；干燥综合征特异自身抗体的有无及抗体的种类和数量，对干燥综合征诊断和鉴别诊断有重要的临床意义。
【专利摘要】本发明公开一种干燥综合征特异自身抗体检测的免疫印迹试剂盒。包括；置反应槽内的印迹膜条、酶结合物、显色剂A、显色剂B、终止液、稀释液、浓缩洗涤液、标准区带。将膜条放入反应槽与待测血清反应，如待测血清含有相应的自身抗体，将会与相应抗原结合，再加入酶结合物及显色剂，与标准带对照即可判断血清中是否含有干燥综合征特异自身抗体：抗SSA（Ro）、SSB（La）、唾液腺蛋白质1（salivary？gland？protein？1，SP1）、碳酸酐酶6（carbonic？anhydrase？6，CA6）、腮腺分泌蛋白（parotid？secretory？protein，PSP）。干燥综合征特异自身抗体的有无及抗体的种类和数量，对干燥综合征诊断和鉴别诊断有重要的临床意义。
【IPC分类】G01N33/564
【公开号】CN105353122
【申请号】CN201510742995
【发明人】不公告发明人
【申请人】厦门敖依生物科技有限公司
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2015年11月5日