利用特异性挥发物筛选昆虫相关嗅觉蛋白的方法与流程

本发明涉及生物技术领域，具体地说，涉及一种利用特异性挥发物筛选昆虫相关嗅觉蛋白的方法。

背景技术：

昆虫对气味分子的识别和鉴定主要依赖于高度敏感的嗅觉系统，其包括一系列的过程，首先脂溶性小分子化合物的气味物质借助气味结合蛋白等小分子量触角蛋白的携带，穿过气－液相界面到达嗅觉受体，在触角嗅觉受体内完成对气味的识别，然后刺激神经元，将化学信号转变为电信号，逐级上传形成神经冲动，使昆虫产生特异的生理和行为反应。其在对气味识别过程中涉及到的嗅觉相关蛋白主要包括气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)、气味受体(odorant receptors,IRs)、气味降解酶(odorant degrading enzymes,ODEs)、离子型受体(ionotropic receptors,IRs)以及感觉神经元膜蛋白(sensory neuron membrane proteins,SNMPs)。自从首个气味结合蛋白于1981年在多音天蚕蛾中被发现以来，通过生物化学、遗传学、分子生物学、生物物理学、结构生物学以及RNA干扰和电生理学等一系列的研究方法和手段，共计8个目50余种昆虫嗅觉蛋白的功能在逐步被揭示，昆虫嗅觉蛋白的研究越来越受到有关科学工作者的关注。

随着多个昆虫基因组测序工作的陆续完成，已经明确昆虫嗅觉蛋白多达上百种，但是如何能够快速、准确的明确这些蛋白的功能是目前急需解决的一个课题。目前对昆虫嗅觉蛋白的功能研究基本是在单个蛋白的基础上进行的，较为常用的方法是根据基因的同源性进行引物设计，克隆相关基因，随后开展蛋白功能研究。但是，由于嗅觉蛋白种类较多，未经筛选的开展所有嗅觉蛋白的功能研究是非常庞大的任务。同时，由于昆虫嗅觉蛋白与其所识别的化合物之间并非一一对应的关系，昆虫识别某一种化合物可能是多个蛋白在共同作用，仅仅某一个蛋白的功能研究并不能完整、准确的解析昆虫对某一种特异性挥发物的识别机理。因此，如果在开展嗅觉蛋白功能研究之前，能够首先快速、准确和系统、完整的筛选出与识别特异性挥发物相关的嗅觉蛋白，不仅让我们有针对性地开展嗅觉蛋白的功能研究，节约了时间，对于我们系统而完整的开展昆虫对信息化合物的嗅觉识别机理也具有重要意义。

华北大黑鳃金龟属鞘翅目金龟科，是世界性的农业害虫，为我国东北、华北、西北地区以及东南沿海省等地区地下害虫的优势类群。金龟甲的幼虫通称“蛴螬”，其在土壤中发生为害，咬食植物的幼苗、根、茎、种子及块根、块茎等，对玉米、薯类、豆类、棉花、花生、甜菜及小麦等农作物和蔬菜、果树、林木幼苗等造成危害，降低产量，影响品质，严重地块可造成绝收，据调查统计，植物地下受害部分的86％是由蛴螬危害造成的。华北大黑鳃金龟成虫具有聚集取食习性，尤其对蓖麻具有偏嗜性。研究表明，蓖麻对华北大黑鳃金龟成虫诱集效果明显。因此，利用寄主植物或其挥发物诱集成虫为华北大黑鳃金龟成虫防治提供了可能，而华北大黑鳃金龟对寄主植物的准确识别和定位主要依赖于高度敏感的嗅觉系统，其中筛选识别特异化合物识别的相关嗅觉是其最重要的方面。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种利用特异性挥发物筛选昆虫相关嗅觉蛋白的方法。

为了实现本发明目的，本发明利用特异性挥发物筛选昆虫相关嗅觉蛋白的方法，从公共数据库或通过测序技术获取在昆虫触角中表达的嗅觉基因信息，利用特异性挥发物处理昆虫24-48h，然后检测昆虫触角中不同嗅觉基因的表达量，与对照未经过特异性挥发物处理的昆虫相比，将表达量增加的嗅觉基因，其所编码的蛋白作为候选的昆虫相关嗅觉蛋白。

所述特异性挥发物主要是指可引起昆虫特异行为反应的挥发性化合物，包括寄主植物挥发物、昆虫性信息素和聚集信息素等。

前述方法包括以下步骤：

1)提取昆虫触角RNA，转录组测序获得大量在昆虫触角中表达的嗅觉基因；

2)将昆虫成虫置于设有透气孔的养虫箱中，饥饿处理24-48h(优选24h)；然后将可持续释放特异性挥发物的容器放入养虫箱中，24-48h(优选24h)后取昆虫触角，提取RNA；同时设立对照组，即饥饿处理后的昆虫进行正常饲喂，24-48h(优选24h)后取昆虫触角，提取RNA；

3)检测昆虫触角中不同嗅觉基因表达量的变化。

前述方法中，步骤2)所述昆虫成虫为羽化后2日龄成虫。其中，可持续释放特异性挥发物处理组昆虫与对照组昆虫同日龄。

前述方法中，步骤2)所述养虫箱的材质包括有机玻璃，养虫箱的顶端设有一个直径为1cm小孔作为透气孔，箱体为正方体或长方体。养虫箱的容积不能小于0.3m³，否则影响成虫的正常活动，也不能大于1m³，否则挥发物的处理难以达到预期效果。每次提取RNA均需50头成虫的触角。

前述方法中，步骤2)将5个可持续释放特异性挥发物的容器分别置于养虫箱的四个角落和中间。其中，所述可持续释放特异性挥发物的容器为盛有特异性挥发物溶液的玻璃瓶，所述玻璃瓶用封口膜封口，封口膜上设有若干透气孔。

前述方法中，步骤3)是将触角RNA反转录成cDNA，并利用荧光定量PCR检测昆虫触角中不同嗅觉基因的表达量。

前述方法中，所述昆虫相关嗅觉蛋白包括但不限于气味结合蛋白。所述昆虫包括但不限于华北大黑鳃金龟。

前述方法中，所述特异性挥发物包括芳樟醇，反-2-己烯醇等。

用于荧光定量PCR的引物序列见表1。

表1引物序列(5′-3′)

荧光定量PCR的反应体系为：

每个反应体系对应于表1中一对引物组合。

反应程序为：95℃60s；95℃5s，60℃15s，40个循环。

本发明利用特异性挥发物处理昆虫，建立一种有效、快速筛选昆虫相关嗅觉蛋白的方法。该方法高效、简单，可操作性强，能够在大量的嗅觉基因中快速准确且系统、完整筛选获得靶标基因，为研究昆虫对特异性挥发物的嗅觉识别机理提供技术支持。

附图说明

图1为本发明实施例1中利用荧光定量PCR检测芳樟醇处理华北大黑鳃金龟雄虫触角后不同OBPs基因的表达结果；其中，CK代表空白对照，芳樟醇为华北大黑鳃金龟性信息素成分，OBP1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、13、14、15、16、21、22、24、25、26、27、28为华北大黑鳃金龟雄虫触角中表达的气味结合蛋白。

图2为本发明实施例2中利用荧光定量PCR检测反-2-己烯醇处理华北大黑鳃金龟雌虫触角后不同OBPs基因的表达结果；其中，CK代表空白对照，反-2-己烯醇为华北大黑鳃金龟寄主植物挥发物成分，OBP1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、13、14、15、16、17、18、23、27为华北大黑鳃金龟雌虫触角中表达的气味结合蛋白。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册(Sambrook J&Russell DW,Molecular Cloning:a Laboratory Manual,2001)，或按照制造厂商说明书建议的条件。

实施例1华北大黑鳃金龟触角中识别性信息素芳樟醇气味结合蛋白的筛选

1、提取华北大黑鳃金龟触角RNA，转录组测序获得大量在昆虫触角中表达的嗅觉基因，含OBP、CSP、OR、IR和SNMP。结果如下：

>HoblOBP1

MRSNIKMFKNSALFILGIILPSVLCMSEEMEALAKQLHDDCVAQTGVDEAHISTVKDQKGFPDDEKFKCYLKCLMTEMAIVGDDGVVDVEAAVGVLPDEYKDKAEPIMRKCGVIPGANPCDNVYQTHKCYYDTDAKSYMIV

>HoblOBP2

MKYFVVFAALCAYVLADTLQEHSQKVMEEIINVGAECAEKLGATPEDIDKLMKEQIPDSRAGLCVVSCANKKFGLQNADGTVNRGSTLVNIEKVKDIDNDMYKKMSSVWSTCSENTPNDSDECNTGVHLVKCMKEEGAKLGLNKETMGF

>HoblOBP3

MMKVPLVLVLLAGLCLRISCTITDAQMKAARKLIRNTCRTKTKISDEQIESMHKGIWPDDDEVMKCYTHCCLATMKLQSKDGGFDKELAEKQYPKFPESIKESLIESLEKCADSGEGLTKKCDLSYAFFKCVYFYNPEGYIFP

>HoblOBP4

MTMFLYFLIVNIFLVETTQGAMTNAQIEATQRMVRRTCKSKMKITSDDELDGMLNGKWDNLSPATLCYLHCCVKMIKMVTGDGHVDYDSSLKQINNLPEPKRHPLIDSLNNCKDAGKSLTDKCEIAHEICKCFYFSNPGAYIIP

>HoblOBP5

MKFFVLLSFIAFANCMDQDFLTKATARMSQYVEECAKDAGATKDDLAELMEIRIPSRKEGKCLLACYNKKYGIQDKDGKLDKEASIEAMKDLKLADTELYDKAVKLFDTCIDQVPNQDCECNTAAIFMYCFNINGGLMGLQPGMVPM

>HoblOBP6

MLPVVILYFCLIGADSATQLHELFNTNAMKMGFQCLEEVGATEDTLQKIANREIPTSREGMCLITCIHQKFGMQNSDGTTNRAGTLLFLEALKDDPFYSQTKDHFMECLDTVSNDDEKCVIGAKFMECLSIGGMKKGIL

>HoblOBP7

MYYIVFLVFLTVDIALTQLIMPEYDKEQSQCVKELNLDADKIQKLSQAEGEITKDEKCVLRCVLQKIGVIDAQGVPIQDEIDKQFSKFKNIDMSKCIPPSSITDPCEQTYKLTTCFLSLLEAAA

>HoblOBP8

MMKLQLVLVLLLGLCLQVSSAINEAQMKAARKLIRNTCRTKTKISDEQIEDMHKGIWNDDDDVTKCYTHCCMGIMKMQNKHGGFDRELAAKQYPQIPESMRESLVSSLEGCADSGEGLTKKCDISYAFFKCVYFSNPEEYILP

>HoblOBP9

MKISLFCFALCVAIVNASIEKYIDQLTTEIATAKTECAKQVGASVDDVVEVSQGKTPTSKEGKCIISCVLKLFGGQDSNGKINKHAVIGKIEELKPIDTDVYEKFSSVWKSCSEKTSDDNDGCDSAAKLMICLAQEVDKHGISKKLIGL

>HoblOBP10

MKEIVLYFFILILMKANCLNQPNYAYECMAELGVSWSQMEEFEKSNPPHNIKCLSLCMGEKSGYITNKQINETAVLEELPSGVSIDFEQCKDITGIDDCDEFFKILECIREQFAKSMDDLKKT

>HoblOBP11

MPLLCIGADDPDKEKLREAAKTIMYDCKDKVSASDADVQSLLDKTLPTTKEGACLLECIFTTSKVMKDGTLDKDATLKTLESVLKKDKDKEAKMTQVLDACQKEIGKGTDDKCQTAKMIAECLQKQGKLAGLGPAS

>HoblOBP12

LNGKWDNLSSASLCYLHCCLKMIKMVTGDGHVDYDSTLKQINNLPEPKRHLLAEGLDNCKDEGKSLTDKCEIAYKICKCFYYNNPEAYIIP

>HoblOBP13

MKSIIVLFALIVISAGLTAKEEEKIKEFAKECRTSSGIEREKLEKLRNGDIEDDPKVKDFISCLFKKLSLQKSDGNIDQDIFKSKLSSKLTEAEKETIINDCINLKGSNDSETAFLLYKCYRSKTPSHNADLLV

>HoblOBP14

MKNIYINYFIVTLINVFLILEYAYAETATDLLRKKLCIRESNVNPSLVANADEGVFAGNRELKCYFRCYYLESGFINDSGEIQTEVIKSKIPQKIDKKIVQQAIDRCKKIKGSDSCETAYEVQKCLYNSKLQI

>HoblOBP15

MNKIFVVSAVLLGIASAYDFSDAYFNQLLTKEFDDLTLSESSFSHPRARRDDEAAQCHHRHKLCCGDDVLYGLHDKIKDKKKECLKEVTGKEFNGGPPFTCEELEQRKKEMICVAECIGKKNGVLDTDGNVKEEELRKHVKETITGLDWFQPQMDDVITKCIAEAKEAADKREADSCNPSELKLIHCFFKEMQLSCPADQITDQARCDALRESVKKHDFPPPH

>HoblOBP16

MKTIALVVLFAVLVSCQDSEEKRAERVRKYREECVQETKVDPALIDKADAGDFADTRELKCFAKCFYTKAGFFSEKGELLLDVVKTKIPPEHEREKALTIIELCKDLKGSDACETAYAIHKCYFQNAHAAQLHKN

>HoblOBP17

MKRMILLISLATFVISEKQDLIQYGEKCAEELGLGPSDLSEFKEKILSRAEMNHNSKCMARCTAEKAGLIVDGVLNEAAVSKCLPDGVDLEKCKALTGDDDCDKFYKIFRCLDKEKLEKSTM

>HoblOBP18

MKFLILLSALVTFITCTDQNFLDKANEKMTKYLQECAETTGATKDDMMELMEIKIPTRKEAKCLLACYHKKYGIQDKDGKLDKVASIEAMQDLKVADPELYDKAVKLFDTCIEQVPNQDCECETAAIFMYCFNIYGQMMGLKPGMVPM

>HoblOBP19

ILSLCLLNVVCVTKLQRMIKDAIAHLGTECLSETSDATMSDVQDLVDHVRPTTRKALCLITCIHTKAGMQDEHGKLKEEGGLNFVEPLKQEDMDYYEISKEHFINCINTVPDDAEACIVGGRFN

>HoblOBP20

QCLEEIGATEDTLKKIANREIPTSREGMCLITCIHEKFGMQYSDGKTNRAGTLIFLEPLKEDLAYYSRTKDHFMECLDTVSNEDEKCVIGTKLMECLSIG

>HoblOBP21

MKQFVIVVALCVIVSVQAITDEQKAKVKEYQTACVASTGVDPKLVEEGEKGNFITDAKLREFISCFLKKTGIQDEAGEIQASVIKQKLANDYTEAEIDAVLAKCKSSGGTPAEVAAAFYKCYWANASKHVPLV

>HoblOBP22

MKSFIVLFALIVISTALTDEQKEKIKTIGKQCKASSEVEREKLEKLRNGEIENDPKLKAFLRCTFEKLEFQKPDGTIDKEKVKSRLPSKLSETEKEEIVNECTNVTETDVTEIAYSVYKCYRSKTTAHNADLFL

>HoblOBP23

MTKVVLLFIVLIVAIQAKKKLSADEIKQINQDCLKSSGMDSSVIKNIVSYDTFPKASDKYTKYLECMYVNQGYLDKDGLISYETIEDFILDFYDLDTVKLAIEPCVVHQDGKSGGERAYNTAKCLIKNLEKLEKQHEKEHKDITGKLA

>HoblOBP24

MNMKYNIVLLLLCVICTYNEALLSQTDQIEAAKLCANQTGIAPKSIAKLTRKLSVPKKDPAVKFFLVCVYKYVGLQDQNGDMNFQKIREQLKNDFFKYDTDTIVDNCSSVKGNTHEDNAYLVTQCLLKQIRKLSKSNKNKD

>HoblOBP25

MEKIILLMCILSLEDVQAFSSDNQNQAITKCIQKTGVDESIVTRMGVTLDIPDNSVVKKFLACLNKKLGFQNEEGDMLFDNLRGNLVGMSSEEVNSTVSTCKQVKGTNSIENSYLVTKCIFRKIKSIIKLKKRK

>HoblOBP26

MKPDTSLVIVLMFAFVIIECESIPVLAKNVSQINEECSKQTGISNDVAKNLTSTQQMPKPSETYYKFLECLYKRQNYFDDDGNVSYRNIENFLSNYYEKSILRKAMAPCEDLQVGTSLGERAYNAGSCIIKNLVTIEAQEDGESINSSEESANDI

>HoblOBP27

MKFIVLVLSALTFINAYDYEDYYFDDIIMEQFELPHGRLQRNMENKSTNGDSCCNKFFKPRSPSTKKEECLKELGITKLPKLSKITEEQQQQVKCYYECRFRNHIDANGELFRAKQPQLRKIYKERMEWLAPKIDDIFDKCLTNLKPAEKVENECNDIGLRFTYCFWREAQLECPLDEQVNPEECQVLQEYLKKHNHILPTP

>HoblOBP28

MLVDGIEKLELDAWDNENNAKYDNGEANQESRYNKELFKTCCEEPSFLFLQYHFEGIGKECYKKLERHSHVHNSTKRPGNDTRTNTCIAECIAKKLDLINDGGFASKIKIHKLLTKAFSNVDWFLNEFNIHGWGCIDQKQGNQTDCNTVPIKAAYCLWRQIQLRCPMDRIKDQIKCRKIKRKISKIDALTEKEEKETEPRD

>HoblOBP29

KATCLRSCILKSMNMLKDSKINLDMINEFIKIVHNEEPEKIEPMKKNAVECLDKVKDMSDDCKMAYAFIQCYV

>HoblCSP1

MRLIFYSFLIYLAIADERYTTKYDNIDIDAVISTERLLQNYIKCLLDLVACTEEGSELKKNMPDAIQNDCSKCSDKQKEGSDKLILYLINNKPEYWQLLEEKYDPTGENTKKFIESKRMMTERTAMYTTVSK

>HoblCSP2

MYKVFIFVIIALVVAVISEKKNDNEEYTSQYDGIDIPKLLANRRLVLGYCKCLLSKGACSPDGAELKRVLPEALETDCRKCSKKHKHSARLVLHHLIDHEPKCWKELEGKFDPEGTYAKKYKHNSTLED

>HoblCSP3

MYKFVFAFFSLLIIAKILADDKYSSEFDSINYNEVLGNKRLVASYCNCLLDKGPCTAPAEYLKKILPEALETDCAKCTDKQRKSIPTLAKAIVGNDSDDCFKELAKRYDPTGEYRKRYKDVLEN

>HoblCSP4

MIKFFIILSVLVVLVLSKPEDGKYTTKYDNLDLDAILNNDRLRGAYNKCLKNAGPCTPDAEELKKVLPDAIENTCSKCNKKQKNGARKVIKFAMEKKPEEWQELKKIYDPEGKYEEKYKDWINKDD

>HoblCSP5

MKCYSLIFVLCVSVLVVNAQNKYTTKYDNIDIDSILANQRILTNYLKCLMEEGPCTNEGKELKRTLPDALANGCNKCNDRQRTTAEKVIRHLIKNRNNDWKRLTAKYDPTGDYRRKYEAQYNIKA

>HoblCSP6

MFLTIVLIILPVVSLAADAEPPGGYYVTRFDHFDIENILNHKRLVVYYAACLLDKGPCTPQGTEFKNILPDAIKTNCLRCTEKQRVVTTLSIRRLQKEYPDIWSQLRKKWDPSGENVKRLLSSANKPKPVVPFVPLILDKFGDGGDVEPSEITSTTETTVLTSSTLMNALLTTSLVQSTTATPTSTSTKQNTKQTVAVTSRPFNSIGPNLIVPNPRILIDKVIHTANLVLNSILKG

>HoblCSP7

MKNFVLLLIFISVPSILAEEKYTTKYDNVDLNEILRNKRLLKNYTNCLLSRGICSNDGAELKRLLPDVIETGCSKCSEKQRNGFAIILKHLIDKESKIWTELEQKYDPSGTYR

>HoblOrco

MMKFKPQGLVADLMPNIKLMKFAGHFMLNYYAENSGAVHTLRLGFCFGHLFLMLLQFGFTFGNLVQESDDVNDLAANTITVLFFTHCIVKFIYFGVRQKLFYRTLGIWNQSNSHPLFLESNNRYHQLALTKMRRLLIIVMVGTIGSWIAWTTITFFGDSVHNRKDPNNENETITEEIPRLLIRSWYPWDAMSGIPYYVSLIYQIYYVGFSMLHSNLLDSLFCSWLIFACEQLQHLKEIMKPLMELSATLDTYVPKSADLFRAHSASSQDKLTESDYNARNEDAHMRAMYSTHQEMGVTYRSGQLQEFSSGGIGPNALTKKQELMVRSAIKYWVERHKHVVRLVTAIGDAYGIALLLHMLTSTITLTLLAYQATKIDGVNKYALTVLGYLFYALAQVFHFCIFGNRLIEESSSVMEAAYSCHWYDGSEEAKTFVQIVCQQCQKAMSISGAKFFTISLDLFASVLGATVTYFMVLVQLK

>HoblOR1

MRRLSFEFTKAIYNDSVKKYMWFGKLLLEMLCAWPSKEGLFKRAIGWLFFCNLAVVEIFHAAYCAQNYSNIGDAVMVGATVTTTLEAMVRFYIMLSKREIINKILTKVWKKFWPVEVLDPVKRKKIQNKAKFRFWLNLIFFSSSLISSTNVNLAPYLSDNELIFKSSFPFDWNKPYVYEFLYVWQYFSNELVVFMINAFDFFFMSLVCICTIQYIIMQEVFANILSKDSRRHRQVIFGDRGKHMTDKEMLKKCLEQHEMLIEICNELDNSFNRAILIQFVVNTAANCAAFVTLKFDRSQFTKMLTYAVAHLSQLFYYCLAGQDLQYESQRLSDFIYDSDWQSSYNRDFRKSIVLMIQRSQKPQCLTALGLVNLDFLSFVQIMRLSFSFYTLLDGFLADE

>HoblOR2

MSAGNTTKPVIRKLSLEFSRDVYKDGVKMCILPGKVLLQGVCCWPDDEGLRMKIVGWFLFWNLFVIEIFHASYVFLNFNDIGDAVDAGATVTTTMEGLVRLHIMLTKKGVINSTLVKIWKQFWSLDVIEPVKRKKIKRQAQTAVMLTSIFLGSSIISNSQITGTPFIRNRGLVLKSVFPFDWRQYYFYEIIYIWQYYSDWFVLFMINAFDFFFIALVIICSVQYVIMQEIFKYILTDESKRHRKIIFGERGETMTDREMLFECLEQHKLLIGICNELESSFNIPILIQFFT STCGICAATLIMKVDYSQFSKMFTLVGAHISQLFCYCYVGQHLAFESDYLAYAIYDCGWHIDYDRSFRKALLLMMQRSQRTQRLTAAGITELDYASFLGILRLSFSFYTLLNNLFMKNVGQ

>HoblOR3

MNSKKSENYFKVHFFVLNLLGISMNSMKNPIKNLLYKTYSLLLFLFCFVFYPISELVFVLCSGNVEDSTFVFSFLLTQILGALKLVIVVIYKRKIISFCKSIETKPFLPDQNRSGQMEFMHIENAIRTSNNQAYFFHSFVVIVISQRYFYTSRAPGYYESTFDQTSNITIVKYVRMTPFYTILPFEQINSPGHEITVLYQVISAAVIGFMIGAVDAIIGGILCHIKAQLFILKDCLASYEQRAVYLMNKDGIYIDNREFAKHEMNKFNYSGNVRKLPSVLQKYVDVCVIQLIKHHQKIIELADGAEDTFSLLMLVQFLFSLLLICFQLFQLSICEIRSTKFVSMICYFFLMVLQLALYCWYGNEIMYHSSSLSDAIFESNWIVANAKTQKSLLIMMMRVYRPIKMTAGKFSVLSLESFMAIIRGSGSYFMVLKNTQSAV

>HoblOR4

MNNEYVMSFCLYHLHILGLNPFKQSIFSKLRAGFVALITCVLYGFNLAALFHDNNGIKSLQNTIDALPCGQQTSVRLLYLLICGNKMKQLYEMTNETWPNDICGSKLKERLQFDSERFKSFFKSYSTYLVTIVIIYLITPSFYTYRRLTTEWYLPCKLESDMCYLSARLAQVVYFMLIIYQIIIFDGMCWAFLFCLFLETEKVKYSFKYLNIEELNSKNEVNRKFCSIVKHHCYLLEFLKRFNAVYSLQMLNHFLTIAAALCFGMFLVSKDGFPPTTFENARFIPYVIGYNTQLYICCYSGEVIYSQLISIADAIYESMWYLNNHSNVSNGIRLGIQVSQIGNKVTIGGLWPLSLSTFVSVFKTSVSLNAILQTVYINAERSI

>HoblOR5

MSDNFFNVNFTMLKMSGIWIPDSKSSLIVKIMYWAYNFVWIGYSCLFFCPSELVYFATTLSNLEDLVKNVNMGMTHFLANIKVCLWFYYRKEIMGIIETLGAYGRRYESYGDFDNEKILKKAKKFKDIFSVLFLNFAMFTSISSCLICFYNTMELDLPKGGRIELKLPYFSYVPWDYRRSKILFSIAIWYQFFPVFNYAYIIVGFDTLYTAILGYVSAQLDIIQGAFSTIRPRCIVRLGLEVPEDVLRDPPELMNEMNKEMNKIVDHLQVLLDICTRLEEIYSYVILAQVMISLIVFCTCIFLVSLLPMFSLNFAAEMIYMVAIECQLLIYCVFGNKVTLSSSNIPNSIYIGDWYSSNISFKRSMLITMSRMQRPIYFTIGKFTPLTLSTFVTISRASYSFFAVLKNSEL

>HoblOR6

MVCPCEEILSSPRWILELLGCWPMKSPTKTYTIKMFVASVFTIAFPTMLCFEILFVYKNYNVLMQILNFLIPYVYVLCKYTIFTFQQKQLFILLNCTKSKLFNQSPSNDKILRPIADVIIMVTKVFRFTLVFALLMIALLPLSETKLYPVPISHDLGRYSILMYVFQITCLSIGGWLCMGFDCGFIALAAIGIGQIDILKLRLSSVIQDLVVNKNTFSKSVEQLKTQTKINKALRACILHHFAIEEYCKRLSNLFSTTIFIQYLMSILALAITMSRILTITELSVKILELVFILMFIFTQLITYSWSGHQIMIKSSEIGEACYMVKWYYYDASNRRILFLIMERAKRPLYIKASMFAKTTLTTCINILRCTYSIFTILSMSYREN

>HoblOR7

MKGHSENFFDINLIFLKYSGLLPPKNKSNISYTLYKILRFFAVIITVILGTTGAIIGVIENIYNFNVLIELLNVALTMFLSAIKSVFWLINSKSIEEIMQTLATNEFDYEQTEVFKPNILKEKARRIGRNYTLILWILTQLTLGFAYIPAISLSFWYYVNDLPITNITTFQTLPYYIHIPFAYNTAMKYCLACIVQAVPCYMYANILVGVDTLFMNILNLIGTHMLILQGAFKTMRKRCLKKIAGPSLAPDGLHNSNEMEYYMMLEMKKSINHLQMLFQCCYKLEEIFKYVSLFQALGSVIILCSSLLMLSTTSCVSKEFGNEIFYFIGINVQMGLYCSFGNQVTLKALDLPQAIWESEWLECRKSYKICILMTMMRLKKPVYLTAGKFAPLLLNTHISVLKGSYSYYTVLKSMDK

>HoblOR8

VCNMFAKTYRFFVGITIAFYAIFPFIEHTLPLPGWFPFDKKKHSYSLYVYHLVCLILNGYNHTSLDCINAAMISIASAQLEILKDNLHNLRRNEDDDLTIDQEDVVVRKRVKKCVLHHNVIVKFVADIEDMFSNVLLVQFLCSIIIMCVTGFQVFVIPPARMHYITLVLYFCCNLTQIAIYSWFGHDILAKSSDIGLACYMTEWNVLSPKSRKLIFIIMERSKVPIILTAGKFINLSLNTFMMIVRTSYSYLAVLQHMYKT

>HoblOR9

MGHINCLEPLIKPKWLLIKSGLWPMENISVLIAIKYFLNFALDVTILGIILQNIVNAISTNNMNLLNWSICVLLPLTNYYTKAVTLFVNKKHLRSILNDLDSDIFNYNSEKLNRHIRKIYAISNMMIRYFAFVISTFVFVFGVLPIITNIRPIVPASFKTGKFTRLYNVAHLFAVIFVGYNSTAFDVLFMSLMALCGAQLDILKERLSNVFVDASEIYEDASSNMKFTDINVVVGCILKDCVALHEAINRFVMKLDILLSFPLLTQYGIGCFIICNTILELTIMGHLDSANIIGLCGYSGVVFAQIAVYHWLGNEILYKSDEIIQSCYLSQWYKLDLKSQKCIMLLMERAKRSLVITLYKFVFISLESLGVIVRWSYSIFALIKARYK

>HoblOR10

MNTNQFKQINKDYFKIHFFVLKFFGISIKPVEDSLSGIAYKIYSVILFILCFVCYPTSLFFFLYLNADLENATLVLCFLLTYILGTFKLIIILIFKRKITTFSAHIENEPFLPDNRRSNDREFIYVENAIRTCNNQGYIFHTFVVLIVVQRLYYAAIDAGYYKNFWDFSTNTTIVKHVKSTPFYTVLPFEPIDFPYYEITVMYQAYCSATYGFVIGATDAIICGIMCHIKAQLLILKNCLKTYIQRGIYIMKEDKVHINIQELEKHQELNKDSVYAVPLVLQQYVEISITELIKHHQKILELAEGAEDTFSFLMLVQFVFSLALICFQLFQLSIYSIPSVKFFSMFSYLLLMLYQLFVYCYHGNEVMLYSLSIIDAIFESNWVMVNVKCQKSLLLSMLRASRPIKMTAGKFVYLSLDSFMSIVRGSGSYFMVLTNMNARKH

>HoblOR11

ILYSVASRMRKMFSVMLLFHYFVTVATTCSDLFILVKYVDITVIGIKFTVLVFIFGQFAYYTFPSDEVACQFSDIARALYMSKWYRTNIKVQKSLLFIMMKCQRTKYFTGAGLMDINADAFGSVVRKTFSFFTIMRNILNK

>HoblOR12

MLLNATITKSVSYLNFKGLNPFISRSKSAKFKAIIFLFTETMATISIALCIFVSSLGSDSFMDSVTGMICATQTICKQIILLLFQDDFIDVVHYIKEFWAANKFGKEPAKQIDVIHNTTERLLKMFKYLLSIAAIAFLVKPFLEEELVLPVSWLSVCSIHESMICYTINYISQCFYIGDLIFSLLIFDELFFKLLTYGYCELEQVKYALSFLKTKNTTSEKESKIMLEMVIIIKHHSRALEYIDKVDKLFSMVLLCQFSTSVCGGCMGLFVLTYEGLPPKLNTALKNVPYVLGVLSQIFIYCVAGQKIAEQSESVADMAYNMRWWIKHQPQVGRAICLIMQRAYKRKQMTAGGVWNLDMITFVAVRSVVMSNRN

>HoblOR13

MSTSRLSLRRLSLEFTKDIYKDGIKICLLPGKILLQGCCCWPDSGTLYSKIIGWFLFWNLIVMEIFHTAYVVKNFRNIGDAVSTGATVTTTMEGFVRVYVMVTKGHVINTILVKVWKQFWPLDAIEPKRRQKIQRKAQLSVLLTSILFFCSASSNSLITSTPYIRNHGMLLKSVFPFEWNQLYVYELIYIWQYYSDWFVLFMINAFDFFFVALVTVCFLQYVIMQDVIKFILSEKSRSQRIIIFGKRGQSISDKEMLYKCLEQHKLINGICNELEESFNIAILIQFFVSTTTLCAAALIMKVDYSQFSKMLTFAGAHLAQLFCYCYVGHQLSYESTSLAYAIYTCDWHINYDRNFRKALVLMIQRSQKVQNLTAAGVTELNFTSFVGIMRLSFSFYTLLNNLLMKNENE

>HoblOR14

MGKIMQIFSRFLRNLDILKRNSDILNDDGKCTLIVSEFVLCLVNFWPENHTIRTRITFFTLLAAYISMQISFFMFLVTSIEDIGSFTKIMSSLSVGMQVIAKMSILFFKYNELNAIIRIIRYEFWPATTMGKLIKNQIRSKLTFILIGCIAIYLLGMLFLLQIAAAPLMKGIRILPYNSWYPFDWSQSPTYEVLYILQSFMIIYVTENIVVGCDFLFFSICFNCTVQFNLLCEVFKEIGNGREMELLNYLFRLPGTFYRPTMNEVDVNERKLMVLCIQHHQKLLNICLQLNKLFNYGHLYQFVASVTGLCASCYLITNENSANGRSLVASYFVAHASQLFQYCAVSNEVTHASLELSTAAFQCGWHKKEYSDFRKCLSIVLQRSQKGVPVKAAGLFVLNYASFVTMMRSTFSLYTFLNNFTEQ

>HoblOR15

MSKRIIHYDSINFERRIMSVFGFYSGLGFEGNSLTKLVFKISITSGILFIYTMIIKIFLVTNDLEVVFEIFHILITETAFVLKAILFYQALPKLYSLEELLRGPTFNQHTEDQDRFISKAIFTYKLFARSFQFTSWGAMITYSLCPIIDGTILAIPIWTPFDEDKYKIYAQFFEIICFIVLSTIDVAIDCISTSMINLMAIQLDILNDNLRRIGQNRSTGSYLEQEKQIQNDLVRYVQHYIAIIRFVSDTQDIFSVGIFIQIFTSVVAICTTGIQIALRTSGTFISTLLYFQTMIIEIGMFCWFSQDIITKSSQIGESCYISEWYTCNTSTKRSIFIIMERAKKEIKFRAGGVFEMSLTTFVMILRNSYSYFAVLMRVYKN

>HoblOR16

IDAAQNGASIEKINAMIATLFLIVTCCLKIGVCTFQSRLFFSIVEDLHSIRFNSHDPKYNKPLEDAIQLINFFAKVFRVCVFMIVLFHIVFPLFGRTPLSIYPTFELENHPYISHGIQIITVGIAAWNLTCVDLFFGAMITIAITQIDILRLKLQHFTADAKQEFLKRRKRENCSYHTISNEILVDCVDLHIAVIRFLKKVEDMVTIILLVQYSAGVVIVCNNILQLTKSDSIFSPDFIQPFSFLCGVILDLVIYHWLGNEIIAKSDKIGEACYTSEWYICNAKTHKTLFMIMEKAKKPLNIKIYKFTDLSFQSFVAILHAAFSVYTLLDTVAEEN

>HoblOR17

NNIDNLSEILPVFLAVLLLIVKRINIASRSSEFLLTLLVLEKTEFNNHPEGLMGPIKRCVRISKTLTKIFKVVMICVIIFYVMLPFVEDKPLLLPLSFDLGRFEKATCIFQVISFSYCCMSVVCVDLFCALLLSLATAQLEVLELRLRNIVSEAKFSNGSSILNYKRDLDQRVYKILRKCIKHHLSIISLVRQIEKTYTVPLFLQYTLGIGIICFLLLQLSYTVQPGTLQFLLLCNCLVAILNELLLYHYFGNELIFQSLRIRDACYMSEWYECSPFIRKMLVIIMERTKIPLAITVYGYCLVSLESLSALFRWSYSIFALLSTVYWKVNQ

>HoblOR18

MLGIFGLYSRRDDENGVFFKIRRALIAVFSTVMLICLFIKMYENRNNLLDIFETCYYFMVQAAFVIKLYIYFYHLPDLHALEEMLSGKIFNSLSKEQEMYISDAMKSHKIFAGCYQFCCVCCAIIYSIFPAMDGQALAVPIYSPFNVEKYRMFLYCFEVCCFFMTACNNSSFDGMTVGLTTIMSAQLDVLKDNLKHAADRDMGGKFLEQEKKIKDRLRNCVRHHNAILEFTAKTQDIFSTGVFFQILASMLGICLTGLQSLMVPWGSVQFASVGLFLVTEIIQIGMFCWFGENIIIKSSEIELSCYMSEWRSCSTSNKRIFLIIMENAKTPIKFTAKGLFILSLGTFVMVLRSGYSYFAVLRQVSQK>HoblOR19

RISRASCKKRNELRICIKHHQLLLSIFGRMQLIYSWVLLLQYLMTLGMACVQLYILNTGELDIADTIELVIYLGTMYTEFGYYSIPVEEISSEFSGIVNAIYMSSWYEKDMATKRILLNVMTTAQVPKYLYAGGMIQVNMDTFGSVFRKSFSLYLVLKNLVK

>HoblOR20

MEEEYVMSFGLSFLRAVGFSPFNPGLLDHIKSSALILTTTFIYCLNILPMIIEYDGVQSLESSIDSIPAGEQVMVKLLTTWILRNKMKYLYEMVNQKWPDDIYGNEFEIKLNNNAKNFKRIFALCKAQFMFSSLIYTSKPLFVQARVLATQLYVPCDLLSNSCYITFLGIQNIYIVIVATGEVVFDFIFHAFLFFAYIELEKIKYGFRNLDIMGKKENNEKIVYSEFCKIIKHHNFILEFLHNLNNIYSLQLLNHFITLSANIVLAILFMNKDGFPPSYDEMARYIPYLITILSQLFLYCLAGEGIYSQLASVGDAIYESKWYNMKQSSSLTKGMILVIQISHINRINRKLTIGNIWPLNLATFMSVVKSSFSLQACLQTAYNTDDTM

>HoblOR21

NCTALIRFLITTIHLTYCKEDTIEKELCVTVKPLLIPTPGPLNTISGRWILGGFQCICLILYAWQIIAYDTLFACFLIYVDCNVHILRYFFETITERSINKLQLRCCSTPNLELTQQMNIQMRTGTINLQNLIITCEEIMDVFKYVILLQVLFALFILMTSLYVAASVPVFGASFTYQLEYYMTIVTQLSLYCWFGNEITLSFTKIPDAIYNNNWVVSNKSFKRSMLINTIRMNKPIYIKIGMVAPLNLNVLIYILRASYSYFAVIKNKY

>HoblOR22

MANIKCIKTITTPIWMLRKTSFWPEQTYTKTFILTSIFNNIFHFTIYTLLILDIINALKSNDIKLFNWVIGILIPITNYYAKAVTIIYNKKCLFSILDDFKSNIFNSHTEKHNLHIQLIRKVSHLIMRYLIITMGIFVLIFSVPSFFTNGLLFIPPPFEIENFDVLYKFVNLIAACYIGYNCGGLDVLFLTFLALCVAQLQILKERLKNILEDAKKINVESKYKMDLDIILADILRECVLLHKKINRFVEKLGVLLSLPLFVQYVSGCVMICFSIIQLTLGSKRSALDIIGLCGYSSATFGQMSAYHYLGNEIIYQSNEIVESCYLSRWYELNPKFQKRILLLMERATRPLILSAYKFVFISLASLGVIVQWSYSLYAVTKAKYG

>HoblOR23

SKMSSDEFNGGSEVCDSILPYYIVIPFDISTKISCCFALIFQILPFVVFAWQITAHDLLFAVFLIALKCHFIIVRGAFETLRSRCLKMLNLQPHYNILHDRDNIKLDNAMKTEMRKCTQYYQIIIKLAQEVENSFTHIILVQVLIVIFIMVSCLYMMSSLVITSGKFFAEVNFVIAILIQITFYCWFGNEMTLASADICSGIYDNNWLSASESFKRSMLIQMIRSSRITYITVGKFSAVTLLTLASILRGSYSYFALLSNLKE

>HoblOR24

LRNAATTEIYACVKHHELLLSVFSCMKKMYFWMLLFHYAVTLITGCSQLYVILVSSTDTADLIGTLIYVNGMLVQFAYYSFPAEEMVFELRSVSVAVYMSMWYEKDASVRKTLLMIMMKSQQQEYLSAGGIIDMNVNAFGSVIRKVFSFYTVLHNVLSN

>HoblOR25

MKLHCLVTKNGQIRKILKEISGDVFQPKSEYQEQLIITSLLTIRRCTKLLIYISLGS CVFFVVLPLVNRSDEKPLPGKLWFPFNTSNHPVYDILYIYETIAVILHPLTHICMDTIPLALMAFICGQFDVLHDTLTNLKIFATERLESNTKRTKDDLHEEMNKLLIECIIRHQETKRLANEVNDVYTSHFFAQLVNCVSVLSLIMYKLTMIPIASVGFFTLALYLTCLLGLLLLYCWYGNEIVSKSSAVYLAAYSSDWTGCPISFQKNLLFMMLHLQRPVTMYAGRFFPLSLDVYTAILRFTWSYFTLLLNIDE

>HoblOR26

AVLTVLFFGILDSILSRFKSNDYNDWSMPLAPFSLFKVTTNTQFILVCLYQSTCLLICASIISSIDLLMGSVLAHMKTQFTILKNTIRSMQSNDDLAEEVTERHSQKTSVDLLQNKLQYVVTYHQSLIDLAHQFEDVFSFLLLTLFIGNFVVLCFTMYHASLYPLSNTKALMDFAYVIAICVQLLLTCYWGNELTLESESVAFACYDVKFVGTSPNFQKELALMIQRSQRPIVLTAGKFVNLSLNSYVSILRMSYSYYMVL

>HoblOR27

MSMSFILTSFKVLVWFYYRKDLLKITKLLEENSSRFKDYNFDSEDIISKEKLFKDLWTKSFFLASSLVSVSAGFLSTTEALTSGEKYVEFKNGSQYFYNQKLPYYSLVPFDQTSSKLAYIKAVVYQCLALLSCGYITVGLDMMFVAIMSLTNAHFILLKNAFRRIGAVRIERLNITSTICIEQSTMLRRACENELNKCIKHLQMLIRICQSLENIYSPVVLMQVLISLVVLCTCLYQVSSIPFGAKLLGNDLAYLLAIEIQVVVYCYVGSKLTHSALDIPSAIYESSWLTASLTYKKTMIMTMMRMQKPIHITIGKFSPLTLNTFLSIGKMSYSIFTMLKSRN

>HoblOR28

VKTLQSLMHFTHIFLKYLFLMYYKVDIEKILVDILKYFWKTWMFKKQIAEEVEKIYKTVESIQKCTIFLAAIVLLVHTLRPLFDKSHIYLLETYTPSSYAIGALLLISQCYTLYFGFCVAIGFDLIYFSLCVHLILQTRLLKEKLREVFENSRDNSSFKLGYCIQHHQFLFSLFLRKKAIYSLMLLFHYFVSLITGCSVLFEILSSNTDLGNAIIELTVIVFFMGQFGFYTFLAEQIAFEFSDISDAIYLTQWYNSNIFLQKCMLHIMMKSQRIHYFSGGGLIDINVDAFGSVLRKTFSFCAIMQNLINK

>HoblOR29

MVPPPFDTGRFNIVYIFFHSLSVMYLCVNSTGYDVFYLTLMALCVAELNILEERITNVLEDVSEGHDSREKISLENIKPLLKRTLRECIILHDAIIAFVKKLSIVLSFPLFVQYTCGCFMLCNTVLQMTIVSDKVTESCYLSMWYATDTLSQKTLMLIMERAKRSLILQLYGFVNISLDSLGVIIR

>HoblOR30

FVSLVIYTLCITMELMTYCWFGNEIIMKSSEISTSAYKTEWLNSSISFQKDLQFFMLLTEKPVKITAGNFFTLSVETFTTIMRSTWSYFAVLRQKYVEDVLE

>HoblOR31

YCFMGGLIVQLGGIFTYETCMKNSVKTNKDMTCGYGYKVHYPYEYQSGISQIAHIAVGVYSLSFVAASASLFLCLFICCVEYITVRIDHLNDMLLKVFEVEDYEDQSFTMKLCLEYHILITGLAEQANSCLLILSTAALFNYSSTIGLSLFAMLKGNITKPLVSAIGFTCSIFILSAYGQQIINKYEAIGTAVYNSKWYHSSPLLRKHVLLIVMRAQKPLLLQVGLGFYFHLPLFT

>HoblOR32

LLILHFYYFCIGFPVVFGFDLIYFALCVHVIIQTRLLKRKLKNVSRNCGKNSVSELNSCIQHHQFLFSMFLRMKDVYSMMFLFHHFLTLISTCSTLFEVLNGHNTDLTNYFIKFVLILLFISQFAYYALPAAQVASEFSEVSDAIYISEWYNKEVVLQKCMLFIMMKAQRIHYFSGGGLMDINTDTLGSVIRKTFSFYAIIRNLINK

>HoblOR33

RNDNQSLLIKTHQKRMLRFCYVFVCMGITTCSLFAVFPFADPRELKLPLSGWYPFAEEPFVILFIYQITALSVIGVSNISLDCIIVCFLNHICIQIDLLNHELRYMRGVCLEKLKARYKINSKHEFKIKLQMLMNAELESCIIHHQTILSMTRDFQQIFSVGIFTVFIFGCATLCMTMLQFVMVSIKSIKFVSLVI

>HoblOR34

EKVIKCVEYHIFIMSFFKNLRKLCSSLFLCQYTIALVSICTELYAFSNTKEEFDITELFKSMFYTSTILLEFGMYCFCSQYVVDEIRSLSDAIYASRWYECKTNFQKDLMFIIMRTQSQTEFTAGGLVAMDVQAFTSVIKRAFSFYALMKSLF

>HoblOR35

PFEIDFSIKLLIQIMDFFYVLWVGITCVLIGFVVGCAELIIIRVRHLNIMFKDALSFASCVNSKKLLVTCVKYHAHIISLTDRYNKCFDKFVMLFLMQTGPTIAVASFSIIIEPKISVMLHLSGWVVTLFILCISGQRLTDESLVISQSVYDTEWYQIDISLRKYVILILMQSQRPLRAKMWMFSEASYMTFAKVIKMSYSIITLLNGTLARKN

>HoblOR36

LYSLLKLRFLESNVKLFEDGAKYTIIFSQIIANFINIWPEKFSTSTMICFSVTFLVCILQEVSLFVFLITSIEDVDSFTKVLASMSIVMQSMVKGGTFYYKAKEMNDVIKIIRTEFWPSNTMGKDLDHKIRGNSKILLTVLLAQYLFAVAFLLFYVILPLIQGTKQLPHTSWYPFDWSASPAYQVIYCLQAYITAYFNENVVCAYDYLYCTICANCVAQFRLLSEAIKQIGTGREDEIARSLLKISGVSYRPILKVEDFSERRLLVICIRHHQKLIEVSNRLNNIFGNGHLVQVFASVLGSCT

>HoblOR37

QVFASVLGSCTTIYRITMKNGLNDLTLLISCYMAHFMQLLEYCALSNELSYWSTCLSETAFQSCWYEKKYSDIRRCLSILIMRSQKPISMNGLGLFELNYVFFMSVMRFTFSLYTFLSRFSE>HoblOR38

KKLKKLVEKMNEILAVPLFIQSVLGAVILCLAMYKLTKVAPMSGEALTYINYYIAMLIQLSVYFWYSNEILWKSDELSNSAYQCQWVDKTTSFKRNLLFFILSAHSPLKIYGGYFVVLSMDLLIAIVKFSWTCFTLLKSM

>HoblOR39

FPLFVQYVCGCFTICNAILQLTVMKESGSSNLLSMCAYTGVTFGQMTAYHWLGNEIIFKSNQIIQSSYCSKWYALNTKHQKELLLLMERAKRPLIIQLYKFIYISLDSLGVIVRWAYSVFALIS

>HoblOR40

GLCKLYSWMKYNKKIQRMLRTIDERFWDTSIVNEKLSTGLSLRVQLISKTVASHIFISVGLCLMIVIFPLVQYPDGRKQLPSAIWFPYNTDKRPLYEITYVLLGISNHISVLVNLNYDSLYVYFMQNISIQF

>HoblOR41

LQLTLWSNKIINATYSSKWYELDIGAQTKLLILMERAKRPLNVQVYKFIFISLESLVTVVRWAYSVFALLRARYS

>HoblOR42

ICSASLILKVDNSQFLKMLTFAAGNTAQLFYYCYAGHQLAYESNRLADAVCGCDWHLHYDRSFRKALIMIIQRSQKGQSLTAAGITTLDFASFLAIMRLSFSFYTLLSNLLMKNKN

>HoblOR43

YHQQQLLCSAPKCALYFSIRKKLDNIIKIVWYEFWPSNMMGTIVEKNIKSDSKTLLVGFLIEYGVGCVFLLLFIIAPAMTGIRQLPYNAWYPFDWSRTPTYEILYLFQVYIDIYIIANTVCGYDFLYGSICANCVAQFRLLNETIKK

>HoblIR25a

MLNLFYLVLFIASCDRLRTQTIQNINVLYANEEDNDVADKAVDVALDYVKRNSKLGVKVDIRKVVGNRTDSKGMLDSLCKTYGSMLDNKGPPHLVLDTTMTGLVSETVKSFVKALQLPTISGSFGQEGDLRQWRDIDDAQQNYLIQIMPPADIIPELIRSIVINQNISNAAILFDNSYVMDHKFKSLLQNVATRHVIRPIQDDSAIRDQLQNLRKLDIVNFFILGSIVNIRKVLDVADSISYFNRKFAWHSITQDKGDLKCMCKNATVLFAKPVMDTKYQDRLGLIKTSYQLTSDPEISAAFYFDLALQAFLSIKNMINDGGWPSNQSYITCDDYDGKNSPDRKGFNLKKYFGKDPTETPSYGPMNIARNGESFMQFNMQLTAVSVRAGSSDKAVNLGTWKAGFNNNMSLIDPESMGNYTADIVYRVATVLQAPFVMVDSEAVKGYSGYCIDLIDEIANILKFDYEIFVVPDGKFGNMDLKGNWNGIVKELMEKKADIGLGSISVMAERENVIDFTVPYYDLVGITILMKLPKTPTSLFKFLTVLENDVWLCILAAYFFTSFLMWIFDRYSPYSYQNNRDKYKDDEEKREFNLKECLWFCMTSLTPQGGGEAPKNLSGRLVAATWWLFGFIIIASYTANLAAFLTVSRLDTPVESLDDLSKQYKIQYAPLNGSASMTYFERMANIEAKFYDIWKDMSLNDSLSDVERAQLAVWDYPVSDKYTKMWQAMKEAGLPNTLDEAVERVRSSRSSSEGFAFLGDATDIRYLELTNCDLQMVGEEFSRKPYAIAVQQGSPLKDQFNTAILQLLNRRQLERLKEKWWTNNPKALKCEKQDDQSDGISIQNIGGVFIVIFVGIGLASITLAFEYWWYKYRKTSKVITIQDNPQQSVQKHKSKPDNSKTMALGKLYPRSRF

>HoblIR8a

HRRSIDRNWLYDLVSGQVLSLQCPEQQKGLPISLQASCREFTLKESFWFALTSFTPQGGGEAPKSLSGRTLVAAYWLFVVLMLATFSSNLSAFLTVEMMQTSVQSLEQLAQQSRINYTVVEASQTHHYFINMKNAEDTLYRLWKELTLNASTDETQYRVWDYPIREQYGHILIAINDSIPVANAAEGFRKVNEYTDFAFIHDSAEIKYEVSRNCNLTEVGEVFAEKPYAVAIQQGSQLNDEISKTILDLQKDRFFEYLQAKYWNYSKRGECDNSDNNEGITLESLGGVFIATLFGLALAMVTLVGEIIYYKRKRTKKVYPPGKDIQSIRTVSVKPAIPDSITFGTTFKPVLPDKDNLRVSPFTLYPRSRNRIN

>HoblIR64a

SSSVICDLQEMQMYSPLQTRTSLQKHSPFRNMLGFCMIRLFETGVSTRLRNIYDARKSKCTSNSFSIRTRVGLHEFSAVLYIYIIGIVASVTILTIEIIIYKKNYLHLYPFTH

>HoblIR75a

RQKIKNIKFRVQQYGLLLCRSSKSFHFVKEKLKNLNLRIDSNLYVALKSTVGEYEVHEFYNPGYKNGGTLMSYNSFNYTQRGAFASNYLSGYQMRKDMRSVHLRVAFVVTKKVSAPLEYLKDQRTKQFDTSSKVNFGIFGHMIDIHRYRWDVVITPAWFGSKRHGVEIGLANVLHQNLADISGSSGLMTPGRVEAFDFGVGTYLFRTSFLFRNPYTYDDDVGEALVLRPFSRGAWLCAGLFALILGLSLKLVFQFETRVLKRTSQTYSLCSIVVITIAAFCQQGEFYFRIDLQKLNDETTFSNIGSGLHYNSVCGRVLLLQLLVFAYVLYNYYTSSIVSSVINSKKKTLDTLEELVKSDLDIGIERIAYARVLNATNNPILFHLNNEANANNTRISFFPQSEGIQKIREGNFAYLAETITAYNDMDRVFSNEEICETVELDGARPTLIYIVGKKNGQYNELFSISYRQIVHSGLLQRQQKIFTNQKPHCLNAIQFVQVGFGQLTSAFVLLTAGYGITLMILLIEIVHFRIKSGSYKNIQ

>HoblIR40a

YFLRNIHEAMKVILITNPRYDAYRVYYNQATSHRKHHMTMVNWWTKHKKLFKYPTLPASIDIFKDFKGKIIYVPVIHKPPWHFVRYKNNSFDILGGRDDKLLRLIAEKLNFRYQYIDPPERIQGSSFSPNGSFEGVLGLIWKREVEFFLGDVALTWERFNAVEFSFLTLADSDAFVTHAPDTLNEAFALVRPFHWKVWPVIILTFLISGPALYALITIPNSWQPRFLIKSRRKLFGECIWFTFSLFLRQSEKEPSSSHKSRFFIILLSIAATYVIDDMYSANLTSLLAKPGREKSINNLVQLEKAIKLKGFQLYVEKYSSTYGLLENGTSIYGRLW

>HoblIR21a

LGSSAPRILTSWRNGSLTRPQVKLFSKKMHTGFSGHRFITSVAHQPPFVIKRGLDENDDIVWDGIEIRLLKMLSRMYNFTLDIKAAKDDISKSPADKVIDYVNDGTVNVGLSGIYLTKERLENLDVGYPHSYDCAAFISLTSTALPRYRAIMGPFQWTVWLALTITYLFAIFPLAFSDKHTLKHLLTKPEEMENMFWYVFGTFTNCFTFGKDTWTKSPKITPRLLMGFYWIFTTIITACYTGSIIAFITIPIFPTTVDTIQQLLSGRFQIGTLDKGGWEFWFRNSSDKNSQKLLKNLEFLPNIESGLRNITKAFFWPYAFLGSKAQLDYIVQTNFTTTNKKSLFHISSECFVPFGVSVVFGKYSIYKDIIDRGISYISQSGLIIKLEHDIRWDFMRSPTGKLLQANSMNTLKLISVEDRSLTLDDTQGTFLLLFAGFLGGMLSLIFERVGGCFKCYKKRRFSTSSSISSKPRSYDEPTPREKLDSIQYSYDEFQLLNNVQENNRNKTDVDAEFENMHHINKELQKTSTNLIVRTFNFDKLFGEENLNSHHETVEDH

>HoblIR76b

QTYMWIQNTRCKG-IE-ASFYFCSKMALIDIILIGLCANLTCPGDKIPDLSKRTRSLLREQEELIRNYTLKIATVHNPPLSIIETVDGVLRARGIAFEYIEILQNKLGFKYELVKPPDNSLRPEDNGIIGMLSRNEVDIGAAFLPPFPYLSNYIRFSTNLDKGEWVVLMRRPPVSATGSGLLAPFTFQVWLLILVSLFAVGPIIYFLILLQSRLCKEDDNIIYPLPSCVWFVYGALLKQGSTLSPHTDSSRILFATWWIFITILTAFYTANLTAFLTLSRFTLPISSITDIGTKKYSWVSPKGSAIEAALDIDDTFKQSLDGSHGQFSEEDASIILDNWVTRRDYMYIGERPIVEHLMYRDYLAKIDMNIAEGDRCTFVITKWVVRDNMRAFGYSPEFPFQKLFDNLLEHLVESGIVMYSLRKGLPDTQICPLDLGSKERQLQNTDLLMTYYIVAGGFIVSTVAFAGELLSKKCSGRVKSRKATASKDLFTISKKRKKGVLNEDHLFPPPPPYHALFKPPFPHSENAKTKTINGRDYWVVKSTDGDTRLIPIRAPSAFLFQYDN

>HoblIR93a

CKMLPVQLLIGLGFVNFVFSNNFPSLLSANATLAIVIDKEYLGDNYESIKSTIEDYIYITKRDRLKHGGINVFYYSWTSITIRKEISAILTIAS CADTWKLFKRANVENILHMAISESDCPRLPPNEGFTIPTIVRGEELPQILLDLRSIKAYDWQSVVILYDDSLGRDFVTRVLTSLTIDTKEVTGGGTAVSLIKLDKHNTGLDKTSIKNTLSTIAARLSGTNFLVIVSMELVTYVMETATALRLVDTNNQWLYVISNHKLNNKSISGILKNLKEGNNVAFLYNISTSGAKCKEGMECHIREMLDAFSNALDVAILDEFELAGQVSDEEWDAIRPTKLERRNFLLDTMKAYLIKNSVCGNCTAWQMQACDTWGKEFKTSSSSEFSLIQVGYWRLGSGPSMTDVLFPHVAHGFRGKSFPLISFHNPPWQIIKINKTGGANCRGLVFDIINELAKSLNFTYTVIVLDNGQNVSGNNSNYNNEISYGVTYTIPERVIEMVQNKFVFLAAAAYTVTEQSKTMVNFTMPVSTQTYSLLAARPKELSRALLFMSPFTYNTWLCLLLSIFVVGPLLYIVHKYSPANEYNGMNVRGGLSSVYNCIWYIYGALLQQGGLYLPYADSARIVVGAWWLVVLVLSTTYCGNLVAFLTFPNSDKPITTINELLNRRDTITWSITPASFFEYEIKMSNEPKHQILYQGSTKGIKNFEEMIKNIELGKHVHIDWKIRLQYIMKKQFLSKSTCDLSMSKEDFFEEKLGIIVAQDNPYLGRINREIKRLHQVGLIEKWLRDYLPKRDRCFKTKGGSGVNNHTVNLDDMQGCFFVLFLGCSISFLLICFERLFYKYQKKREKKVVQPFIS

>HoblIR68a

CINVLLFYFLQIFVQESEDLLSPHNKTQKSLLQIKHDDCQTYIILISNGQQVSRLLRYGDRYRILDTRAKFIMLHDHRLFHKSLHYLWKRIVNIIFIKEYVGMKKSGDTTIAIPWFEISTVPFPSPIHNVFVPKRLDIWRKSKFRSGVNLFQDKTSDLRNQTLNIVVMKHTPATTNTLLVQDDTVRAVMGDGSKGFAGLEVEILAAVSKAMNFKCKLYEAPNADVEFWGKKHPGGQYTGLIGEMIGGKADVALGDLYYTSYILELMDLTVPYNAECLTFLTPESLSDNSWKTLILPFKLFMWLAVIFCLFFCGIVFHYLAQFHCNINRLKRNAQNSDEIFPKKNQTLTLPTISIDQMNYNSKYFLMKQQFVTKRETNDPEGLYLFSDFSNSMLYTYSMLVMVSLPKLPTGWSLRMLVGWYWLYCTLVVVSYRASMTAILANPAPRVTIDTLQELVNSKLSYGSWSEVNKDLFKTSSDPISQTIGNNFQIIRNSSMAVEKVSEGKFALYENVYFLKEAFVIRQLQVQSATNSTENQVTEQVSNKPGERNLHIMKNCAINMPISIGLQKNSPIKPRADKYIRKVLEGGLIKKWLDDVMQPTLNAERPSTLQTTKALMSMQKFIGAIVALFIGYLIGFAALCTEIIYFHYIVKRHPNFNKYSRRIN

>Hobl SNMP1

MQFPARLALASGIILTCITIFGWVAFPNLIKSKIKTGVTLKPGSELREMYMKIPFAITFKIYVFNLTNPEDVAKGKTPIVQEVGPYMFEEWRSKVFVSEDDEDDTMTFYSKETFIFRPDQSSPLTGNEVLTIPHPLIVAILLTVVRDKPSALNLINKAMNSIFKNPKTPFLTATFKQIFFDGVIVNCSVSDFAGKAVCTQLKTEGAKDFEFIEENVFKFSLLGTKNGTASNKYKVKRGLKDYRDTGRVIEYNDMTELSVWPTKECNQFHGTEGTIFPGLTPHGSEIPSFAAMLCRSMGAKYLGDTKYNGIPVSRYTLDFGDQTNNPEDKCYCPSPDECMKKGVMDLRKCSGPVVASMPHFYNADPSYANGVKGVFPDKDKHELYLLFEITTGSPLAARNRLQFSMPLLPIPKVDVMKNCPDTLVPMFWVEESIDLNKTMTKPIKTMFVTMKTVRIISWIILLGTIGGLCYAAFLYYKRSREVQITPVKSVSQKKDNAISTVMTKSAGGVSNPAVSDNEIDKY

>Hobl SNMP2

MYKNCPIIVGVSGLAVLILGIVCTWYGFPALVESQINQNIILENGSQAFKVWQKQPFPLHFKVYFFNVTNPEEIMVGATPILREVGPYVYDLYIEREVTEVNEDADTIEYFLTKRFHFNPSMSGCRSDHEMVTIINAPLMGTLLKTNSISSHLLKMVHDGYQFIYPGIIDMFLRVQIKDLLFGGIPVYCSAQEITSLCSAMRFALPSTMKRAPNKMDFIFSMFGKFNETSFGPFEMTRGIKNTTRGSIISYQEEQMLDYWSGDLCNMLNGSDSGLYERMFEPVDKVYTFTPEICRSVGISFEKKMKKSNFVVYKYSGTQESLSHRGSDQCFCENVGDKNYECPLDGLVNLDSCLRAPIFMSNPHFYLADESLLNYTVGLAPRKRAHESFLILEPNTATPLKGAKRTQMNVEVKRFDLFPLTKYMPEGIFPILWIEEGMELPHNLLAHLENSFMKITMLDYIKWIIILAGIALMILSFILIMQQERLMCFSSKGSLTINDGKHMVTHIKAYDDMSFSPPSGYPKPDDPIFKLVAAHSNNNNNSSNVAWPYRE

2、将2日龄的华北大黑鳃金龟雄性成虫150头置于3个80cm×80cm×80cm的有机玻璃箱中，顶端开一个直径1cm的小孔作透气孔，养虫箱内不放置任何寄主植物，饥饿处理24h；随后将5个分别盛有1mL芳樟醇溶液玻璃瓶(5mL)分别放置于养虫箱的四个角落和中间，打开玻璃瓶盖子，瓶口封封口膜，封口膜上面用针扎5个小洞，用来缓慢挥发化合物，24h后提取华北大黑鳃金龟触角总RNA，反转录成cDNA，用荧光定量PCR检测不同嗅觉基因表达量的差异。同时以饥饿处理24h，正常饲养(以小叶女贞新鲜叶片饲养)24h的成虫为对照，提取RNA，荧光定量检测不同嗅觉基因表达量。以上处理设立3次重复。

以Actin为内参基因，引物序列见表1；qPCR反应体系及反应条件如下：

qPCR反应体系：

qPCR反应程序：95℃预变性60s；95℃5s，60℃15s，40个循环。

结果表明，华北大黑鳃金龟雄虫对于其性信息素芳樟醇具有明显的行为反应，其在对芳樟醇的识别过程中，OBP作为信息化合物的运输载体，与芳樟醇识别相关的OBPs在其处理后表达量出现明显变化。根据荧光定量PCR结果(图1)，与饲喂新鲜树叶的对照相比，利用芳樟醇处理华北大黑鳃金龟雄虫后多个OBPs基因表达量显著增加，其中OBP7、8、9、11、13、15、27、28蛋白表达量增加3倍以上，这些蛋白均可能在芳樟醇的识别中具有重要作用。

与传统的逐个OBP功能研究相比，本方法一次即可获得多个与化合物相关的OBPs，效率明显提高，且3次生物学重复试验稳定，误差小。

实施例2华北大黑鳃金龟触角中识别寄主植物挥发物反-2-己烯醇气味结合蛋白的筛选

采用与实施例1相同的方法，用能引起华北大黑鳃金龟明显行为反应的寄主植物挥发物反-2-己烯醇处理华北大黑鳃金龟雌性成虫，同样以饥饿处理24h，正常饲养(以小叶女贞新鲜叶片饲养)24h的成虫为对照，提取RNA，荧光定量检测不同嗅觉基因表达量。并设立3次重复。

结果表明，与饲喂新鲜树叶的对照相比，利用反-2-己烯醇处理华北大黑鳃金龟雌虫后多个OBPs基因表达量显著增加，其中OBP4、9、13蛋白表达量极显著增加，OBP11和16蛋白表达量也明显增加(图2)，这些蛋白均可能在反-2-己烯醇的识别中具有重要作用。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列说明：

SEQ ID NO:1-52为荧光定量PCR所用引物序列。其中，SEQ ID NO:1-2为一对引物组合，SEQ ID NO:3-4为一对引物组合，以此类推。

序列表

<110> 中国农业科学院植物保护研究所

<120> 利用特异性挥发物筛选昆虫相关嗅觉蛋白的方法

<130> KHP161116845.4Q

<160> 52

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

gccgcctctt caacttcttt a 21

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

ccacaggatt ccatacccaa g 21

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

attgtgggag atgatggtg 19

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

cggttctgct tatccttgt 19

<210> 5

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

ggaacagata cccgacagt 19

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

gatgtccttg accttctcg 19

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

cactgttgcc tggcgactat 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

atccttcacc agagtcagcg 20

<210> 9

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

gctgcccttt ctttctatc 19

<210> 10

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

tctcctgacc atcctttg 18

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

agaccaagtt ccaaatcagg 20

<210> 12

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

tcccatcaat cctccgtta 19

<210> 13

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 13

tgggctttca gtgtcttg 18

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 14

ctctattcgt tgttccgtct 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

gacaaggagc aaagtcaatg 20

<210> 16

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

cagccgcctc taacaaa 17

<210> 17

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

ggaatgatga tgacgacg 18

<210> 18

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

cccctccaaa cttgaaac 18

<210> 19

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

aaatagcgac ggcaaagaca ga 22

<210> 20

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 20

cacccatcat tatcatcgga ag 22

<210> 21

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 21

aatgtatggc agagttaggc 20

<210> 22

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 22

ttcgtcgcaa tcgtcaa 17

<210> 23

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 23

tccgacaaca aaagaaggc 19

<210> 24

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 24

ctggcaagcg tccaatac 18

<210> 25

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 25

gccgaaaagg agacgatta 19

<210> 26

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 26

gttatggctg ggcgtttta 19

<210> 27

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 27

catacgcaga aaccgcaaca 20

<210> 28

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 28

aacacgcctt catccgcat 19

<210> 29

<211> 16

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 29

atgacgaagc cgcaca 16

<210> 30

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 30

aaccaatcca gcccagt 17

<210> 31

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 31

tccagcactc attgataagg 20

<210> 32

<211> 16

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 32

gtttcgcaag catccg 16

<210> 33

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 33

aatcgttgtc gctttatgtg 20

<210> 34

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 34

atttcggatc tactcctgtt g 21

<210> 35

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 35

cgacggcact tactgatga 19

<210> 36

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 36

ggatcgtttt cgatttctcc 20

<210> 37

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 37

ccagatagaa gctgccaagc 20

<210> 38

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 38

tcatgtcccc attttggtct 20

<210> 39

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 39

tggaagatgt ccaagccttc 20

<210> 40

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 40

tttggaagcc caatttcttg 20

<210> 41

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 41

cccgatactt cgttagtgat 20

<210> 42

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 42

cgttgctgat tcctgtttg 19

<210> 43

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 43

tgaatgccgt tttaggaatc 20

<210> 44

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 44

accattccat gcgttcct 18

<210> 45

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 45

gtcaatacat ccccaaccat 20

<210> 46

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 46

atttgattaa cgatggtggc 20

<210> 47

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 47

gaagagttag gtttaggacc aa 22

<210> 48

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 48

gccgcaatca tcatcaccag tt 22

<210> 49

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 49

gaaatatctc caggaatg 18

<210> 50

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 50

ggtaacaggc taacaaac 18

<210> 51

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 51

ggacagtagc gtcataaa 18

<210> 52

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 52

aatcttcaat cgtctcgt 18