利用特异性挥发物筛选昆虫相关嗅觉蛋白的方法与流程

技术特征：

1.利用特异性挥发物筛选昆虫相关嗅觉蛋白的方法，其特征在于，从公共数据库或通过测序技术获取在昆虫触角中表达的嗅觉基因信息，利用特异性挥发物处理昆虫24-48h，然后检测昆虫触角中不同嗅觉基因的表达量，与对照未经过特异性挥发物处理的昆虫相比，将表达量增加的嗅觉基因，其所编码的蛋白作为候选的昆虫相关嗅觉蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述特异性挥发物是指可引起昆虫特异行为反应的挥发性化合物，包括寄主植物挥发物、昆虫性信息素和聚集信息素。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取昆虫触角RNA，转录组测序获得大量在昆虫触角中表达的嗅觉基因；

2)将昆虫成虫置于设有透气孔的养虫箱中，饥饿处理24-48h；然后将可持续释放特异性挥发物的容器放入养虫箱中，24-48h后取昆虫触角，提取RNA；同时设立对照组，即饥饿处理后的昆虫进行正常饲喂，24-48h后取昆虫触角，提取RNA；

3)检测昆虫触角中不同嗅觉基因表达量的变化。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2)所述昆虫成虫为羽化后2日龄成虫。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，步骤2)所述养虫箱的材质包括有机玻璃，养虫箱的顶端设有一个直径为1cm小孔作为透气孔，箱体为正方体或长方体。

6.根据权利要求3-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤2)将5个可持续释放特异性挥发物的容器分别置于养虫箱的四个角落和中间；其中，所述可持续释放特异性挥发物的容器为盛有特异性挥发物溶液的玻璃瓶，所述玻璃瓶用封口膜封口，封口膜上设有若干透气孔。

7.根据权利要求3-6任一项所述的方法，其特征在于，步骤3)是将RNA反转录成cDNA，并利用荧光定量PCR检测昆虫触角中不同嗅觉基因的表达量。

8.根据权利要求3-7任一项所述的方法，其特征在于，所述昆虫相关嗅觉蛋白包括气味结合蛋白；所述昆虫包括华北大黑鳃金龟。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述特异性挥发物为芳樟醇或反-2-己烯醇；荧光定量PCR所用引物序列如SEQ ID NO:1-52所示。

10.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于，荧光定量PCR的反应体系为：

反应程序为：95℃60s；95℃5s，60℃15s，40个循环。