RSD%。结果显示A部位，B部位各自的相似度均为0. 99W上，其各 自共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于2%，表明仪器精密度良好。
[0020] 2. 4. 2稳定性试验：取批号13254001的胶囊，按"2. 2"项下方法制备供试品溶液， 精密取同一供试品溶液，按"2.3"项下色谱条件分别在0、2、4、6、12、2地进样测定，对结果 进行相似度、相当保留时间和相对峰面积计算。结果显示A部位，B部位各自的相似度均为 0. 99W上，其各自共33有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于2%，表明供试品溶 液在室溫下24h内稳定性良好。
[0021] 2. 4. 3重复性试验：取批号13254001的胶囊，按"2. 2"项下方法制备供试品溶液 6份，按"2. 3"项下色谱条件进行测定，对结果进行相似度、相当保留时间和相对峰面积计 算。结果显示A部位，B部位各自的相似度均为0.99W上，其各自共有峰的相对保留时间 和相对峰面积的RSD均小于2%，表明重复性良好。
[0022] 2. 5特征图谱的建立： 将10批强力天麻杜仲胶囊分别按"2. 2"项下方法制备供试品溶液，按"2. 3"项下色谱 条件测定，分别记录HPLC色谱图。将A、B两个部位的数据分别导入"中药色谱指纹图谱相 似度评价系统（2004A)"，生成特征图谱；W其中一个批号（11254011)样品的色图谱（S1)为 参照图谱，通过多点校正和自动匹配，生成对照特征图谱R，见图1。经分析确定A部位的色 图谱中有28个色谱峰为共有特征峰，B部位的色图谱中有18个色谱峰为共有特征峰。
[0023] 2. 6特征图谱相似度评价： 采用国家药典委员会"中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A)"，对10批强力天麻 杜仲胶囊A部位，B部位的特征图谱进行相似度计算，结果见表2。
[0024] 表2A部位，B部位特征图谱的相似度评价结果
2. 7色谱峰归属分析： 取强力天麻杜仲胶囊按"2. 2"项下方法制备供试品溶液，取"2. 1"项下的混合对照品 溶液，按"2. 3"项下色谱条件进行测定，通过各峰保留时间和紫外光谱图对比分析，确定了 部分峰的归属，见图2。在A部位指认了 3个色谱峰，分别为1号峰(天麻素)、8号峰(紫花 前胡巧)、9号峰（7-径基香豆素）；在B部位指认了 4个色谱峰，分别为2号峰(没食子酸)、 5号峰(原儿茶酸)、8号峰(绿原酸)、17号峰(紫云英巧)。 阳0巧] 3讨论： 强力杜仲天麻胶囊主要成分水溶性成分，在特征图谱研究过程中，前面选用过直接用 乙醇、甲醇提取或提取后挥去醇用乙酸乙醋、正下醇直接萃取，调酸后用乙酸乙醋、正下醇 萃取等多种样品处理方法，发现有样品图谱出现信息少、峰强度低，或样品峰分离不好、基 线漂移严重等问题；经反复试验发现样品用乙醇提取后，挥去乙醇的残留物水溶解后调碱 酸分别用乙酸乙醋萃取，制备得到碱性条件乙酸乙醋萃取样品（A部分）和酸性条件乙酸乙 醋萃取样品（B部分)，运两部分样品的色谱图信息量大、基线平稳、重复性好，因此采用两张 特征图谱来表征强力杜仲天麻胶囊的内在信息。
[00%] 使用DAD检测器对强力杜仲天麻胶囊两个提取部位的样品进行200~400nm的全波 长扫描，并对各波长下的色谱图进行分析比较，为了能较全面的反映制剂的内在信息，根据 检测到的色谱峰数目，各峰之间的分离度W及峰形，选择了 220nm作为检测波长。
[0027] 本发明试验优化了流动相条件，比较了甲醇-水、乙腊-水、乙腊-0. 1%甲酸 水、乙腊-0. 1%憐酸水等体系作为流动相时强力天麻杜仲胶囊的特征图谱，结果发现乙 腊-0. 1%憐酸水作为流动相，色谱峰数目较多，且分离度、对称性良好。
[0028] 当然，W上只是本发明的具体应用范例，本发明还有其他的实施方式，凡采用等同 替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明所要求的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种强力天麻杜仲胶囊的特征图谱检测方法，其特征在于：制备供试品溶液，供试 品溶液包含碱性条件乙酸乙酯萃取样品-A部位和酸性条件乙酸乙酯萃取样品-B部位；同 时制备对照品溶液；将供试品溶液和对照品溶液分别进行色谱条件测定；将供试品溶液A、 B两个部位的数据分别生成特征图谱进行精密度试验、稳定性试验和重复性试验；建立强 力天麻杜仲胶囊的特征图谱，并对特征图谱进行相似度评价；最后确定色谱峰的归属从而 鉴别出强力天麻杜仲胶囊的成份。2. 根据权利要求1所述的强力天麻杜仲胶囊的特征图谱检测方法，其特征在于：所述 供试品溶液的制备如下：取胶囊内容物约lg，精密称定，置磨口烧瓶中，精密加入70%乙醇 30mL，称定称重，水浴回流2h，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，混匀，滤过，用少量70% 乙醇洗涤，合并滤液和洗涤液，蒸至近干；残渣加水15mL使溶解，用石油醚萃取3次，每次 10mL，弃去石油醚层，水层用氨水调pH11~12,用乙酸乙酯萃取4次，每次10mL，合并乙酸 乙酯层，蒸干，得碱性乙酸乙酯萃取部位-A部位；经碱性乙酸乙酯萃取后的水层用稀盐酸 调pH至1~2,用乙酸乙酯萃取4次，每次10mL，合并乙酸乙酯层，蒸干，得酸性乙酸乙酯萃 取部位-B部位；将A部位、B部位残留物分别用70%甲醇溶解定容至2mL，摇匀，高速离心 10min，取上清液，即得。3. 根据权利要求2所述的强力天麻杜仲胶囊的特征图谱检测方法，其特征在于：所述 对照品溶液的制备方法如下：取绿原酸、天麻素、紫花前胡苷、7-羟基香豆素、原儿茶酸、紫 云英苷、没食子酸适量，精密称定，用70%甲醇溶解，分别制成相应的对照品混合溶液。4. 根据权利要求1所述的强力天麻杜仲胶囊的特征图谱检测方法，其特征在于：所述 色谱条件测定的色谱条件是：采用CORTECSTMC1S色谱柱，流动相为乙腈-0. 1%磷酸水溶液， 梯度洗脱，进样量5μL;体积流量0. 5min/mL;检测波长220nm;柱温40°C。5. 根据权利要求3所述的强力天麻杜仲胶囊的特征图谱检测方法，其特征在于：所述 建立强力天麻杜仲胶囊的特征图谱是将强力天麻杜仲胶囊分别制备供试品溶液，进行色谱 条件测定，分别记录HPLC色谱图；将A、B两个部位的数据分别导入"中药色谱指纹图谱相 似度评价系统（2004A)"，生成特征图谱；以其中一个批号样品的色图谱为参照图谱，通过 多点校正和自动匹配，生成对照特征图谱；经分析确定A部位的色图谱中有28个色谱峰为 共有特征峰，B部位的色图谱中有18个色谱峰为共有特征峰。6. 根据权利要求1所述的强力天麻杜仲胶囊的特征图谱检测方法，其特征在于：所述 确定色谱峰的归属为：在A部位指认了 3个色谱峰，分别为1号峰：天麻素、8号峰：紫花前 胡苷、9号峰：7_羟基香豆素；在B部位指认了 4个色谱峰，分别为2号峰：没食子酸、5号 峰：原儿茶酸、8号峰：绿原酸、17号峰：紫云英苷。
【专利摘要】本发明公开了一种强力天麻杜仲胶囊的特征图谱检测方法，它先制备供试品溶液，供试品溶液包含碱性条件乙酸乙酯萃取样品-A部位和酸性条件乙酸乙酯萃取样品-B部位；同时制备对照品溶液；将供试品溶液和对照品溶液分别进行色谱条件测定；将供试品溶液A、B两个部位的数据分别生成的特征图谱进行精密度试验、稳定性试验和重复性试验；建立强力天麻杜仲胶囊的特征图谱，并对特征图谱进行相似度评价；最后确定色谱峰的归属从而鉴别出强力天麻杜仲胶囊的成份。该方法准确、可靠，可用于强力天麻杜仲胶囊的鉴别和质量控制。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105403629
【申请号】CN201510568900
【发明人】李勇军, 兰燕宇, 王爱民, 刘俊宏, 李霞, 张锦, 黄勇, 郑林, 王永林, 廖尚高, 李春, 孙佳
【申请人】贵州医科大学
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年9月9日