了纳米免疫传感器的稳 定性。
[0031] ④制备简单、操作简便、成本较低等优点，降低了检验苯并(a)巧的成本。
【附图说明】
[0032] 图1为不同电极修饰材料的循环伏安表征图。
[0033] 图2为基于本专利构建的纳米免疫传感器用于苯并(a)巧检测的响应电流图。
[0034] 图3为肉制品I中苯并(a)巧检测的差分脉冲伏安图。
[0035] 图4为肉制品II中苯并(a)巧检测的差分脉冲伏安图。
【具体实施方式】
[0036] 下面参照附图对本发明【具体实施方式】进行详细说明。
[0037] 参见图1、图2、图3、图4。
[003引实施例1
[0039] 用纳米免疫传感器检测肉制品I中苯并(a)巧
[0040] 1.-种用于苯并(a)巧快速检测的纳米免疫传感器的制备方法 [0041 ] a.电极预处理
[0042] 将玻碳电极用粒径为0.05皿的氧化侣抛光粉抛光打磨至电极表面呈镜面，然后用 蒸馈水冲洗干净，再依次置于体积分数为50%的硝酸、丙酬、去离子水中超声清洗3min，氮 气吹干，备用；
[0043] b.聚酷胺-胺-P孤A功能化石墨締复合物的制备
[0044] 准确称取0.2g石墨締加入到lOmL聚二締丙基二甲基氯化锭水溶液(PDDA，体积分 数为0.25% )中，超声处理30min，水洗Ξ次去除过量的石墨締，制得PDDA功能化的石墨締， 取O.Olg P孤A功能化的石墨締加入到lOmL N，N-二甲基甲酯胺中，使其浓度为Img/mL，超声 处理15min，得到均匀一致的P孤A功能化石墨締的N，N-二甲基甲酯胺悬浮液，备用；
[0045] 准确称取0.0?聚酷胺-胺溶于lOmL甲醇中，使其浓度为2mg/mL，超声处理20min， 得到均匀透明的聚酷胺-胺的甲醇溶液，然后将聚酷胺-胺的甲醇溶液与PDDA功能化石墨締 的N，N-二甲基甲酯胺悬浮液按1:1混合均匀，超声处理35min，制得聚酷胺-胺-PDDA功能化 石墨締复合物；
[0046] C.纳米金的制备
[0047] 准确量取50mL 0.1 mg/血的氯金酸溶液置于烧杯中，用玻璃棒揽拌下加热至沸腾， 迅速加入2.5mL质量分数为1 %的巧樣酸钢溶液，持续揽拌至溶液颜色变为酒红色，得到纳 米金溶液。（注：制备纳米金使用的玻璃器皿在使用前需经铭酸洗液浸泡2地，并冲洗，烘干 处理）
[004引d.纳米免疫传感器的制备
[0049] 将步骤a中得到的玻碳电极应用Ξ电极系统，即W玻碳电极为工作电极、Ag/AgCl 电极为参比电极、销丝电极为辅助电极，在-0.2V~+0.6V的电位区间，采用LK98BII型微机 电化学分析系统W50mV · 的扫描速度在新配制的0.05mol/L硫酸溶液中进行循环伏安扫 描10圈，对玻碳电极表面进行活化处理。冲洗玻碳电极后，用移液枪移取化L步骤b得到的聚 酷胺-胺-P孤A功能化石墨締复合物滴涂到玻碳电极表面，于室溫惊干，再移取化L纳米金溶 液滴涂到修饰的电极表面，于室溫惊干，然后在修饰电极表面滴涂化L质量分数为0.5 %的 戊二醒溶液活化修饰的电极表面，于4°C条件下活化30min，然后用抑为7.4的0.2mol/L憐酸 盐缓冲液冲洗电极，再滴涂化L多环芳控抗体，并于4°C条件下固定化，再滴涂化L质量分数 为2%牛血清白蛋白溶液于4°C下封闭化，用抑为7.4的0.2mol/L憐酸盐缓冲液反复冲洗干 净，得到苯并(a)巧纳米免疫传感器，于4°C条件下保存备用。
[0050] 图1为不同修饰阶段电极的循环伏安图，a为玻碳电极，b为聚酷胺-胺-PDDA功能化 石墨締-纳米金修饰后的电极，C为在制备的纳米免疫传感器上滴加苯并(a)巧后的电极。由 图可知，a电极(玻碳电极)在电解质溶液中出现一对可逆的氧化还原峰，当电极修饰后，氧 化还原峰电流值增大，运是因为修饰物具有快速的电子传递能力。而滴加苯并(a)巧后(进 行免疫反应后），氧化还原峰电流值大幅降低，表面抗原-抗体免疫反应后生成的免疫复合 物在部分空间上阻碍了媒介体和底物的扩散，电子传递受到了阻碍所致。
[0051] 2.上述纳米免疫传感器用于肉制品中苯并(a)巧的快速检测
[0052] 取50mg苯并(a)巧标准品加入到lOmL二甲基亚讽中，再用抑为7.4的憐酸盐缓冲溶 液定容至 lOOmL，然后取该液依次稀释为 0ng/mL、0.01ng/mL、lng/mL、2.5ng/mL、5ng/mL、 10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL浓度梯度，备用。在权利要求2所述的纳米免疫传感器上涂上各 个梯度的上述苯并(a)巧标准品溶液，室溫下解育20min"WAg/AgCl电极为参比电极、销丝 (片）电极为辅助电极，苯并（a)巧纳米免疫传感器为工作电极，组成Ξ电极测试系统，在 l.Ommol/L K3[Fe(CN)6]+0.1mol/L KCl+0.2mol/L憐酸盐缓冲溶液(抑=7.0)进行差分脉冲 伏安法的检测。差分脉冲伏安法的检测参数如下，扫描速度为50mV · S-1，电压范围为-0.2V ~+0.6V。^苯并(a)巧浓度为零时电流值和各浓度梯度的差值为纵坐标，苯并(a)巧浓度的 对数为横坐标，得到苯并(a)巧的免疫响应电流差值与其浓度之间的线性曲线，即标准曲线 及线性回归方程式 AIpc(μA)=4.09621g[C/(ng/mL)]+2.3733，相关系数R2 = 0.9925。其中 A Ipc(μΑ)为不同浓度苯并(a)巧的电流响应差值值，μΑ，C为苯并(a)巧的浓度，ng/mL。
[005；3] b.测定
[0化4] 将肉制品I粉碎，取1 Og样品，进行W下的处理，即加入50mL环己烧，超声处理1 Omiη 后过滤到浓缩瓶中，在7〇°C旋蒸至20mL，移入分液漏斗，用50mL二甲基亚讽萃取，再用30mL 环己烧提取，弃去环己烧层，把提取液旋蒸至lOmL，用5mL二甲基亚讽洗涂浓缩瓶，合并二甲 基亚讽，加入15血水，摇匀后过活化后的Cl姻相萃取小柱抽干，用30mL正己烧洗脱，收集洗 脱液，蒸干后用2m巧醇定容，经0.45μπι滤膜过滤，备用。
[0055] 将上述纳米免疫传感器在与步骤a中的电解质溶液相同的溶液中进行差分脉冲伏 安检测，扫描速度为50mV · s^，电压范围为-0.2V~+0.6V。得到差分脉冲伏安图曰。然后取出 纳米免疫传感器，用去离子水冲洗去除电极表面的电解质，备用。
[0056] 在上述纳米免疫传感器上滴涂上述提取液化L，室溫下解育20miruWAg/AgCl电极 为参比电极、销丝(片）电极为辅助电极，苯并(a)巧纳米免疫传感器为工作电极，组成Ξ电 极测试系统，在与步骤a电解质溶液相同的溶液中进行差分脉冲伏安法的检测，扫描速度为 50mV · s^，电压范围为-0.2V~+0.6V。得到差分脉冲伏安图b。将图a与图b叠加后得到图3。 由图3得到，b图的响应电流值与a图相比，响应电流值变小，说明抗原与抗体产生了结合，也 就是说，肉制品中有苯并(a)巧被检测出来。分别进行Ξ次测量，求其平均值，按线性回归方 程式计算其苯并(a)巧的浓度。该肉制品样品中含有苯并(a)巧，其浓度为4.4ng/mL。
[0化7]实施例2
[0058] 用纳米免疫传感器检测肉制品II中苯并(a)巧
[0059] 1. 一种用于苯并(a)巧快速检测的纳米免疫传感器的制备方法
[0060] a.电极预处理
[0061] 同实施例1
[0062] b.聚酷胺-胺-石墨締复合物的制备
[0063] 同实施例1
[0064] c.纳米金的制备 [00化]同实施例1
[0066] d.纳米免疫传感器的制备
[0067] 将步骤a中得到的玻碳电极应用Ξ电极系统，即W玻碳电极为工作电极、Ag/AgCl 电极为参比电极、销丝电极为辅助电极，在-0.2V~+0.6V的电位区间，采用LK98BII型微机 电化学分析系统W50mV · 的扫描速度在新配制的0.05mol/L硫酸溶液中进行循环伏安扫 描10圈，对玻碳电极表面进行活化处理。冲洗玻碳电极后，用移液枪移取扣L步骤b得到的聚 酷胺-胺-P孤A功能化石墨締复合物滴涂到玻碳电极表面，于室溫惊干，再移取扣L纳米金溶 液滴涂到修饰的电极表面，于室溫惊干，然后在修饰电极表面滴涂扣L质量分数为0.5 %的 戊二醒溶液活化修饰的电极表面，于4°C条件下活化30min，然后用抑为7.4的0.2mol/L憐酸 盐缓冲液冲洗电极，再滴涂化L多环芳控抗体，并于4°C条件下固定化，再滴涂扣L质量分数 为2%牛血清白蛋白溶液于4°C下封闭化，用抑为7.4的0.2mol/L憐酸盐缓冲液反复冲洗干 净，得到苯并(a)巧纳米免疫传感器，于4°C条件下保存备用。
[0068] 2.上述纳米免疫传感器用于肉制品中苯并(a)巧的快速检测
[0069] 将肉制品II粉碎，取1 Og样品，进行W下的处理，即加入50mL环己烧，超声处理 lOmin后过滤到浓缩瓶中，在70°C旋蒸至20mL左右，移入分液漏斗，用50mL二甲基亚讽萃取， 再用30mL环己烧提取，弃去环己烧层，把提取液旋蒸至lOmL，用5mL二甲基亚讽洗涂浓缩瓶， 合并二甲基亚讽，加入15mL水，摇匀后过活化后的Ci8固相萃取小柱抽干，用30mL正己烧洗 脱，收集洗脱液，蒸干后用2mL甲醇定容，经0.45WI1滤膜过滤，备用。
[0070] 将上述纳米免疫传感器在与步骤a中的电解质溶