一种快速检测与鉴定钩吻中化学成分的分析方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种快速检测与鉴定钩吻中化学成分的分析方法，属于钩吻分析技术 领域。
【背景技术】
[0002] 钩吻，又名断肠草、野葛等，是世界著名的剧毒植物。在全世界一共有三个种属，分 别为：胡蔓藤(Gelsemium elegans Benth)主要分布在我国福建、浙江、云南、广西、湖南、贵 州、江西等南部地区及东南亚地区；常绿钩吻(Gelsemium sempervirens(L.)J.st-Hil)以 及沼泽茉莉(Gelsemium rankinii Small .)，主要分布于北美洲国家。中医对钩吻早就记 载，如《中药大辞典》中描述:其根、垄、叶均可入药，性温，味辛、苦，有大毒。具有祛风攻毒、 散结、止痛功能，主要用于治疗湿疹、痈肿、疗疮、体癣、跌打损伤、风湿痹痛、神经痛等。民间 亦有用钩吻总生物碱或钩吻注射液用于治疗肝癌、食道癌、皮肤病等。目前，国内外许多学 者通过大孔树脂、0DS反相硅胶、Sephadex LH-20、逆流色谱以及制备型HPLC等现代分离技 术手段从钩吻中分离得到了 121种生物碱、环烯醚萜和留体等成分，其中生物碱和环烯醚萜 是该属植物的主要活性成分。
[0003] 通过对国内外所有分离与鉴定的文献分析，目前都是采用传统的中药物质基础研 究思路对钩吻的化学成分进行了大量的研究，即对钩吻中的化学成分进行有目的的提取、 分离与纯化，再用质谱与核磁进行结构鉴定，发现钩吻中新的化学成分，筛选到一些有生物 活性的有效成分，从而不断完善钩吻的物质基础。这种研究方法对化学成分研究得比较清 楚，结构式准确，发表的研究结果对后人研究起着很好的借鉴作用。但是，目前除了少数的 几个化学成分有对照品外，绝大多数化学成分无对照品。后人如需进行药理与毒理、药物代 谢研究时，需重新分离和制备化合物，浪费大量的时间、人力和物力。目前为之，国内外也尚 未建立钩吻的化学成分谱。因此，如何将目前已知化学成分的研究结果有效地记录下来，建 立钩吻化学成分谱，为钩吻植物及其产品的化学成分的快速分析与监控具有重要意义。
[0004] 目前，钩吻化学成分检测方法有液相色谱法、气相色谱-质谱联用法和液相色谱-串联质谱法。通过查阅相关文献，大部分仅能检测与分析几个化学物，且需要标准品，不能 从方法与技术上解决钩吻复杂体系的物质基础研究。目前，也未见利用液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用仪结合自建数据包的快速检测与分析方法。
【发明内容】
[0005] 针对现有技术对钩吻化学成分检测技术存在的缺陷，本发明的目的是在于提供一 种快速、准确、能同时检测钩吻中包括生物碱、环烯醚萜、酚类等在内的多种化学成分的方 法，该方法具有操作简单、分析效率高、高通量等优点，可以广泛应用于钩吻物质基础研究、 质量控制、产品研发等各种与钩吻相关的分析领域。
[0006] 为了实现上述技术目的，本发明提供了一种快速检测与鉴定钩吻化学成分的分析 方法，该方法是将钩吻醇提取物采用液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用仪检测，检测结 果通过钩吻数据包进行快速自动匹配分析;所述的钩吻数据包通过将钩吻中各种已知化合 物的英文名称、分子式、精确分子量及结构式导入PCDL软件建立而成。
[0007] 本发明的技术方案通过液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用仪检测，结合建立钩 吻数据包对检测结果进行分析，能快速、准确地对钩吻中包括生物碱、环烯醚萜、酚类等在 内的多种化学成分进行同时检测，并进行结构鉴定分析，克服了现有技术中仅能对钩吻中 少数几种有标准品的化合物进行检测的局限。
[0008] 本发明提供的方法可以同时检测和鉴定钩吻中生物碱、环烯醚萜、酚类等化合物， 将钩吻醇提取物通过液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用仪检测，用自动MS/MS方法找到 钩吻醇提取物中所含的精确母离子峰;将这些数据与钩吻数据包进行快速自动匹配分析， 快速找到钩吻醇提取物中化学成分的可能分子式与结构式，再根据其对应的精确二级质 谱，鉴定其可能的化学成分;该方法快速、准确地实现了对钩吻中化学成分的检测与鉴定， 且具有进样次数少、操作简单、分析效率高等优点。
[0009] 本发明的技术方案收集了国内外有关鉴定钩吻化学成分的文献，包括生物碱、环 烯醚萜、酚类等在内的216种化合物，把对应的英文名称、分子式、精确分子量及结构式导入 到P⑶L软件，建立钩吻化合成分的数据包。
[0010] 优选的方案，钩吻提取物为钩吻钩吻醇提取物。
[0011]优选的方案，检测采用Agilent 6530液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用仪，分 析柱为a 0DS-C18column，150mmX2.0mm I.D.，particle size 5um〇
[0012] 优选的方案，分析柱的液相条件为:流动相A为0.1 %甲酸水，B为乙腈;梯度洗脱:0 ~5111丨11，10%8;5~20111丨11，10%仂90%8;20~25111丨11，90%8 ;25.1111丨11，10%8;总分析时间 30min;进样体积2yL，流速0.3mL/min;样品温度4°C ;柱温箱30°C。
[0013] 优选的方案，质谱选择离子参数：毛细管电压正离子扫描4000V，负离子扫描-3500V;雾化压力40psig;干燥气流速9L min-1;气体温度350°C ; skimmer电压60V;诱导解离 电压170V;采用正负离子扫描方式。
[0014] 优选的方案，检测结果用自动MS/MS方法找到有二级质谱相对应的各种精确分子 量，保留时间窗控制在0.25min，质量误差控制在0.05Da，正离子模式一共找到559个化合 物，负离子模式一共找到237个化合物。
[0015] 优选的方案，将这些结果与自建的钩吻数据包进行搜索与匹配，对测定的精确分 子量与化学成分的精确分子量的误差限定在5ppm之内，正离子选择+H和+Na模式，负离子选 择-H、+C1和+HC00。其结果包括保留时间、测定的精确分子量、精确的分子量、误差、得分、可 能存在的化学成分及化合物数目；对匹配上的109个化合物;再根据其二级质谱进行进一步 的结构鉴定。根据该分析方法策略，正离子模式共鉴定了 56个钩吻化合物，负离子共鉴定23 个化合物。
[0016]本发明快速检测与鉴定钩吻中化学成分的分析方法如下：
[0017] 1)钩吻数据包的建立:查阅国内外钩吻报道化学成分的相关文献，把这些化学成 分的分子式与英文名称录入excell表，并画出每种化学成分的结构式;再把exell表与结构 式导入的Aglient的P⑶L软件中，建立钩吻钩吻化学成分的数据包。
[0018] 2)钩吻醇提取物的制备过程:将10kg钩吻放入的提取罐中加80L的95%乙醇，提取 1.5h，药液用200目滤网过滤，药渣再同法提取1次，合并两次提取液，置浓缩罐中浓缩至相 对密度1.2左右，减压干燥后即得；
[0019] 3)分析柱为0DS_C18column(150mmX 2.0mm I .D. ;particle size 5μηι);分析的液 相条件为：流动相Α为0.1 %甲酸水，Β为乙腈；梯度洗脱：0-5min，10 % Β; 5-20min，10 % to 90%B; 20-25min，90%B; 25 · lmin，10%B·，总的分析时间30min;进样体积2yL，流速0 · 3mL/ min;样品温度4°C，柱温箱30°C ;
[0020] 质谱选择离子参数:毛细管电压正离子扫描4000V，负离子扫描-3500V;雾化压力， 40psig;干燥气流速，9L mi