n-1;气体温度，350°C ; skimmer电压，60V;诱导解离电压，170V;采 用正负呙子扫描方式；
[0021] 4)设定自动MS/MS方法的一些限定参数，找到有二级质谱相对应的各种精确分子 峰与分子量，然后对这些结果与自建的钩吻数据包进行搜索与匹配，对测定的精确分子量 与化学成分的精确分子量的误差限定在5ppm之内；自动给出包括保留时间、测定的精确分 子量、精确的分子量、误差、得分、可能的化学成分与数目等匹配结果;对匹配上的119个化 学物根据其精确二级质谱进行进一步的结构解析;根据该分析方法策略，正离子模式共鉴 定了 56个钩吻化合物，负离子共鉴定23个化合物。
[0022] 相对现有技术，本发明的技术方案带来的有益效果:本发明的技术方案通过液相 色谱-四级杆-飞行时间质谱联用仪检测对钩吻提取物进行检测，在此基础上，建立钩吻化 学成分的数据包，并巧妙地将钩吻化学成分数据包应于钩吻化学成分的检测分析，能实现 同时对钩吻中多种化学成分进行快速与精确的分析与检测，且操作简单、分析效率高、高通 量等优点，可以广泛在涉及钩吻植物及其相关分析中推广使用。
【附图说明】
[0023]【图1】为钩吻醇提取物正负的总离子流色谱图（TIC): (a)为正离子扫描TIC，（b)为 负离子扫描TIC。
[0024] 【图2】为339.2067的精确提取离子色谱图（EIC)。
[0025] 【图 3】为 Na-Methoxy-19(Z)anhydrovobasinediol 的二级质谱图。
[0026] 【图 4】为 Na-Methoxy-19(Z)anhydrovobasinediol 的裂解规律。
【具体实施方式】
[0027] 以下实施例是对本发明的进一步说明，而不会限制本发明权利要求的保护范围。
[0028] 实施例1
[0029] 1、仪器、试剂与材料
[0030] 仪器：Agilent 6530液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用仪，分析柱为&005_ C18column(150mmX2.0mm I.D.；particle size 5ym)〇
[0031] 试剂：乙腈与甲酸为色谱纯。所用水为超纯水(去离子水）。
[0032] 材料:0·22μπι水相针头式滤器。
[0033] 2、钩吻醇提物
[0034]将10kg钩吻放入的提取罐中加80L的95%乙醇，提取1.5h，药液用200目滤网过滤， 药渣再同法提取1次，合并两次提取液，置浓缩罐中浓缩至相对密度1.2左右，减压干燥后即 得。
[0035] 3、检测
[0036] 所述的分析柱的液相条件为：流动相A为0.1 %甲酸水，B为乙腈；梯度洗脱：0_ 5min，10 %B; 5-20min，10 % to 90 %B; 20-25min，90 % B; 25 · lmin，10 %B ·，总的分析时间 30min;进样体积2yL，流速0.3mL/min.样品温度4°C，柱温箱30°C .
[0037] 所述的方法的质谱选择离子参数：毛细管电压正离子扫描4000V，负离子扫描-3500V;雾化压力，40psig;干燥气流速，9L min-1;气体温度，350°C ; skimmer电压，60V;诱导 解离电压，170V;采用正负离子扫描方式。
[0038] 4、分析与鉴定
[0039] 检测结果用自动MS/MS方法找到有二级质谱相对应的各种精确分子量，保留时间 窗控制在0.25min，质量误差控制在0.05Da，正离子模式一共找到559个化合物，负离子模式 一共找到237个化合物。将这些结果与自建的钩吻数据包进行搜索与匹配，对测定的精确分 子量与化学成分的精确分子量的误差限定在5ppm之内，正离子选择+H和+Na模式，负离子选 择-H、+C1和+HC00。其结果包括保留时间，测定的精确分子量、精确的分子量、误差、得分、可 能存在的化学成分及化合物数目；对匹配上的化合物根据其二级质谱进行进一步的结构鉴 定。
[0040] 表1:钩吻醇提取物分析检测后与自建数据包匹配的结果
[0051]表2.钩吻醇提取物中化学成分在正离子模式的精确分子量与其对应的二级质谱 的汇总表
[0059] 注:括号里面的为离子对应的相对离子峰度。
[0060] 表3.钩吻醇提取物中化学成分在负离子模式下的精确分子量与其对应的二级质 谱汇总表
【主权项】
1. 一种快速检测与鉴定钩吻中化学成分的分析方法，其特征在于:将钩吻醇提取物采 用液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用仪检测，检测结果通过钩吻数据包进行快速自动匹 配分析;所述的钩吻数据包通过将钩吻中各种已知化合物的英文名称、分子式、精确分子量 及结构式导入P⑶L软件建立而成。2. 根据权利要求1所述的快速检测与鉴定钩吻中化学成分的分析方法，其特征在于:检 测采用Agilent 6530液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用仪，分析柱为0DS-C18column， 150mmX2.0mm I.D.^particle size 5um〇3. 根据权利要求2所述的快速检测与鉴定钩吻中化学成分的分析方法，其特征在于:分 析柱的液相条件为：流动相A为0.1 %甲酸水，B为乙腈；梯度洗脱：0~5min，10 %B ; 5~ 20min，10 % to 90 % B; 20~25min，90 % B; 25 · lmin，10 % B;总分析时间 30min;进样体积2yL， 流速0.3mL/min;样品温度4°C ;柱温箱30°C。4. 根据权利要求2所述的快速检测与鉴定钩吻中化学成分的分析方法，其特征在于:质 谱选择离子参数:毛细管电压正离子扫描4000V，负离子扫描-3500V;雾化压力40psig;干燥 气流速9L mirT1;气体温度350°C;skimmer电压60V;诱导解离电压170V;采用正负离子扫描 方式。5. 根据权利要求1~4任一项所述的快速检测与鉴定钩吻中化学成分的分析方法，其特 征在于:先用自动MS/MS方法找到钩吻醇提取物中所含化学成分的精确母离子峰，再与钩吻 数据包进行搜索与匹配，对测定的精确分子量与化学成分的精确分子量的误差限定在 lOppm之内，得出包含保留时间、测定的精确分子量、精确的分子量、误差、得分、可能的化学 成分及化合物数目在内的匹配结果;对匹配上的化合物，根据其精确的二级质谱进行进一 步的结构鉴定。
【专利摘要】本发明公开了一种快速检测与鉴定钩吻中化学成分的分析方法，将钩吻醇提取物通过液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用仪检测，用自动MS/MS方法找到钩吻醇提取物中所含的精确母离子峰；再与钩吻数据包进行快速自动匹配分析，找到钩吻醇提取物中化学成分的可能分子式与结构式，再根据其对应的精确二级质谱，鉴定其可能的化学成分；该方法快速、准确地实现了对钩吻中化学成分的检测与鉴定，且具有操作简单、分析效率高、高通量等优点。
【IPC分类】G01N30/88, G01N30/34
【公开号】CN105572284
【申请号】CN201510968431
【发明人】刘兆颖, 刘艳纯, 孙志良
【申请人】湖南农业大学
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2015年12月22日