一种gc-ms/ms测定果蔬中氟唑菌酰胺残留的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种GC-MS/MS测定果蔬中氣挫菌酷胺残留的方法，更具体地说是采用 气相色谱串联质谱(GC-MS/MS)定性定量测定蔬菜和水果中残留的氣挫菌酷胺含量的方法， 属于农药残留量的测定技术领域。
【背景技术】
[0002] 氣挫菌酷胺(f Iuxapyroxad)是由己斯夫公司开发的班巧酸脱氨酶抑制剂类杀菌 剂。化学名称:3-二氣甲基-1-甲基-N-(3'，4'，5'-S氣联苯-2-基)-lH-化挫-4-甲酯胺;分 子式:Cl細12F5N30;相对分子质量:381.3;烙点：157 °C ;相对密度：1.42。溶剂中的溶解度 (g/L，20°C):丙酬>250、乙腊168、乙酸乙醋123、甲醇53.4、甲苯20.0。氣挫菌酷胺的化学结 构式如下：
[0003] 氣挫菌酷胺具有高效、广谱、持效、优异的内吸传导性、同时具有预防和治疗作用 等优点。它能抑制抱子发芽、芽抱管伸长、菌丝体生长和抱子形成，可有效防治谷物、大豆、 玉米、油菜和特种作物等的主要病害。该产品通过叶面和种子处理来防治一系列真菌病害， 如谷物、大豆、果树和蔬菜上由壳针抱菌（Septoria)、灰葡萄抱菌（Bot巧tis)、白粉菌 化rySiphe)、尾抱菌（Cercospora)、柄诱菌（Puccinia)、丝核菌（RhiZOCtonia)、核腔菌 (Pyreno曲ora SPP.)等引起的病害。其特别适用于豆类植物，防治由链格抱菌(Alternaria spp.)引起的灰霉病(Bot巧tis cinerea)、诱病、白粉病和壳针抱菌引起的病害，大豆诱病 (化akopsora)，棉花上由立枯丝核菌(化izoctonia solani)引起的病害W及向日葵和油巧 菜上由链格抱菌引起的病害等。在所有试验剂量下，对所有作物非常安全。氣挫菌酷胺适配 性强，可与化挫酸菌醋、=挫类杀菌剂和己斯夫其他产品复配使用。研究表明，氣挫菌酷胺 比市售的酷胺类杀菌剂具有更好的活性，该产品无论在活性、多功能性，还是在内吸性和耐 雨水冲刷性等方面都为现代杀菌剂建立了新标杆。己斯夫打算将氣挫菌酷胺引入世界上50 多个国家，用于100多种作物上。2011年，氣挫菌酷胺首先在英国登记和上市，现登记和上 市的国家包括澳大利亚、美国、加拿大、欧盟13国、己西和中国等。公司预测，该产品的年峰 值销售额可达6亿欧元。运是所有SDHI类杀菌剂中，开发公司寄予的期望值最高的产品。
[0004] 随着氣挫菌酷胺的登记、推广和使用，作为我国主要出口市场的美国、加拿大等国 家制定了其在蔬菜、水果、粮谷和畜产品等食品农产品中的最大允许残留量(M化），如美国 规定氣挫菌酷胺在果蔬中的MRL为0.5~30mg/kg，在畜产品及水产品等动物源性食品中MRL 为O . Olmg/kg，在坚果及粮谷中脈L为0.06~15mg/kg;加拿大规定氣挫菌酷胺在果蔬中的 M化为0.02~2mg/kg，在畜产品及水产品等动物源性食品中脈L为0.0 l~0.05mg/kg，在坚果 及粮谷中ML为0.01~3mg/kg;欧盟、日本等国家规定若田间使用农药没有在该国家登记， 没有制定相应的残留限量标准时，出口至其国家的食品农产品包括畜禽肉等动物源性食品 中残留限量均实行O.Olmg/L的"一律标准"。
[0005] 现阶段，对氣挫菌酷胺残留量测定方法的研究较少，报道的检测方法主要为蔬菜 和水果中氣挫菌酷胺残留检测方法，运些检测方法均采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)测 定蔬菜和水果中氣挫菌酷胺残留量的检测方法，使用LC-MS/MS测定食品农产品中农药残留 具有快速、简便、灵敏度高等优点，但由于其价格较昂贵，很多检测机构、企业或科研院所未 配置该仪器或配置台数较少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS检测时，需使用不同的流动 相或色谱柱，运样需要不断更换色谱柱、流动相并耗费比较长的时间对系统进行平衡，运一 定程度上制约了 LC-MS/MS的应用。使用气相色谱串联质谱(GC-MS/MS)分析食品农产品中农 药残留具有快速、简便、灵敏度高、选择性强等优点，可实现几百种农药的多残留分析，但迄 今为止未见食品农产品中氣挫菌酷胺残留量的GC-MS/MS检测方法的报道，因此建立简便、 快速、准确、耐用、能准确定性和定量分析蔬菜和水果中氣酸菌酷胺残留量的GC-MS/MS检测 方法具有重要意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种GC-MS/MS测定果蔬中氣挫菌酷胺残留的方法。
[0007] 为实现W上目的，本发明所采用的技术方案是：一种GC-MS/MS测定果蔬中氣挫菌 酷胺残留的方法，包括如下步骤：
[000引（1)提取 称取样品于具塞离屯、管中，加入乙腊或含1%乙酸的乙腊溶液均质提取Imin,加入氯化 钢或乙酸钢中的一种和无水硫酸儀，振荡后离屯、。
[0009] (2)净化 移取样品提取液上清液于离屯、管中，加入基质分散固相萃取剂，满旋振荡，离屯、，吸取 一定量净化液氮气吹干后，用体积比为1/1的丙酬/正己烧混合溶剂溶解定容，过膜后，待气 相色谱串联质谱(GC-MS/MS)检测。
[0010] (3)标准工作溶液的配制 将不含氣挫菌酷胺的同种类基质空白样品按上述步骤（1)、（2)处理时，得样品提取净 化残渣，加入适量溶剂和标准溶液，满旋混匀，配制成至少3个浓度的氣挫菌酷胺系列混合 标准工作液。
[0011] (4)气相色谱串联质谱法(GC-MS/MS)测定 将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行GC-MS/MS测定，W标准工作液的色谱峰 面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线;在相同条件下将步骤(2)中净化后的 样品液注入GC-MS/MS进行测定，测得样品液中氣挫菌酷胺的色谱峰面积，代入标准工作曲 线，得到样品液中氣挫菌酷胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中氣 挫菌酷胺残留量;若上机溶液中氣挫菌酷胺残留量超过线性范围上限，需用定容溶剂将上 机溶液浓度稀释至线性范围之内。
[0012] 步骤(1)中样品若为脱水蔬菜和水果，需降低称样量，并加适量水充分浸润。
[0013] 步骤(1)中采用乙腊提取时加入氯化钢盐析，采用含1%乙酸的乙腊溶液提取时加 入乙酸钢盐析;含水量较少的样品盐析时需加入一定量的水。
[0014] 步骤(2)中基质分散固相萃取剂由无水硫酸儀、Cis和PSA组成，每毫升提取液中无 水硫酸儀、Cis和PSA加入量分别为150mg、50mg和25mg。
[0015] 步骤(4)中气相色谱条件为:色谱柱:HP-5MS毛细管色谱柱，柱长30m，内径0.25mm， 膜厚0.25皿;进样口溫度250°C ;载气：He，不分流模式进样，进样量：1化;恒流模式，流速 1.2mL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分钟20°C的速度升至200°C，然后W每分钟2 °C的速度升至220°C，再W每分钟20°C的速度升至280°C，保持IOmin;传输线溫度:290°C。
[0016] 步骤(4)中质谱条件为：电离模式：电子轰击电离化I，70eV);离子源溫度280°C;碰 撞气:氣气;多反应监测扫描方式MRM，监测参数为：
[0017」步驟（4)中测定祥液和基质标准工作浴液时，若祥液中农药色谱峰保留时同与标 准溶液中相应农药保留时间相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均 出现，而且离子丰度比与标准溶液的离子丰度比相一致，则可判断样液中存在运种农药;若 上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。
[001引本发明的有益效果在于：
[0019] 本发明利用分散固相萃取技术，建立了简便、快速并能有效避免样品中基质干扰 的样品前处理方法，将此前处理方法结合GC-MS/MS应用于蔬菜和水果中氣挫菌酷胺定性确 证和定量检测，平均回收率为86.0 %~96.0 %，平均相对标准偏差(RSD)为3.5 %~7.1 %， 检出限低于0.06化g/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点。能满足美 国、欧盟、日本等国家对相应产品安全检测的技术要求，为保障我国人民食品安全及对外出 口贸易健康发展提供有力的技术支撑。
【附图说明】
[0020] 图1为添加在空白苹果基质中的5ng/mL氣挫菌酷胺标液的选择离子色谱图。
[0021] 图2为不含氣挫菌酷胺的苹果空白样品的选择离子色谱图。
[0022] 图3为W不含氣挫菌酷胺的苹果空白样品为基质配制的氣挫菌酷胺标准工作曲 线。
【具体实施方式】
[0023] 现W W下实施实例来说明本发明，但并不是限制本发明的范围。
[0024] 实施例中使用的仪器与试剂
[0025] TlSBasic均质器（IKA,Germany); 58IOR离屯、机化卵endo;rf，Germany) ;MS3基本型 旋满混合器（IKA，Germany);7890N气相色谱-5977C质谱仪(Agilent，USA);乙二胺-N-丙基 硅烷(PSA)吸附剂(40~60WI1)、十八烷基硅烷键合相(Cis)净化剂(40~60WI1)均购于美国安 捷伦科技有限公司。
[0026] 试剂：乙腊、丙酬、正己烧化PLC级，Merke，Germany);乙酸（HPLC级，CNW，Germany); 无水硫酸儀、氯化钢和乙酸钢为分析纯，均购自国药集团化学试剂有限公司。
[0027] 标准物质：纯度99.5%，购自德国化.E虹enstorfer公司。
[00%]实施例1:苹果中氣挫菌酷胺残留量的检测
[00巧](1)样品前处理 称取经充分混匀的苹果10.0 g于50mL离屯、管中，准确加入20mL乙腊，均质提取Imin，加 入3g无水硫酸儀和2g氯化钢，满旋Imin后，700化/min离屯、5min。离屯、后，取6mL乙腊提取液 转移至装有900mg无水硫酸儀、300mg Cis和150mg PSA的离屯、管中，满旋Imin，SOOOr/min离 屯、5min。取ImL上清液于氮吹管中，于40°C氮气吹干，加入体积比为1/1的丙酬/正己烧混合 溶剂溶解残渣，满旋混匀过膜后，移入进样瓶中待GC-MS/MS测定。
[0030] (2)标准工作溶液的配制 准确称取25±0.1 mg标准品于25mL容量瓶中，用甲醇溶解，定容得1000.Ojig/mL标准储 备液;移取1. OmL标准储备液置于IOOmL容量瓶中，用体积比为1/1