一种gc-ei-ms测定果蔬中氟唑菌苯胺残留的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种GC-EI-MS测定果蔬中氣挫菌苯胺残留的方法，更具体地说是采用 气相色谱-电子轰击离子源-质谱(GC-EI-MS)定性定量测定蔬菜和水果中残留的氣挫菌苯 胺含量的方法，属于农药残留量的测定技术领域。
【背景技术】
[0002] 氣挫菌苯胺是由己斯夫公司开发的班巧酸脱氨酶抑制剂类杀菌剂，通用名： penflufen;试验代号:BYF14182;化学名称:N-[2-(l，3-二甲基下基)苯基]-5-氣-1,3-二甲 基-IH-化挫-4-甲酯胺；外观:灰白色粉末状固体;烙点：11 TC ;沸点：沸点前分解;分解溫 度:320°C ;蒸气压：1.2 X l〇-6pa(25°C);分配系数:Kow Io评=3.3(20°C，PH=7);亨利常数： 1.05 X 1 〇-中曰? m3 ? mo 1 -1 (25°C)。溶解度:在水中的溶解度为10.9mg/L(20°C);在正己烧中 的溶解度为1.6g/L，甲苯中为62g/L，丙酬中为139g/L，甲醇中为126g/L，乙酸乙醋中为96g/ 1，二甲亚讽中为162邑/1(^上均为20°(：);〔45登录号：494793-67-8。相对分子质量317.41; 分子式C18H24FN3O,化学结构式为：
[0003] 氣挫菌苯胺是拜耳公司开发的又一个化挫酷胺类杀菌剂，于2006年申请专利，主 要用于种子处理，对多种植物病原真菌具有良好活性。该杀菌剂为班巧酸脱氨酶(SDH)抑制 剂，主要作用于呼吸链电子传递复合体n，阻断能量代谢。经过处理后的种子在萌发过程中 可W吸收氣挫菌苯胺，并通过木质部传导到植物体的其他部位，从而起到保护作物的作用。 氣挫菌苯胺是一个种子处理杀菌剂，用于马铃馨、玉米、水稻、棉花、小麦、大麦、首猜、蔬菜、 豆类W及油菜等种子，可W防治种传、±传的担子菌和子囊菌病害，主要有丝核菌 (化izoctonia spp.)和黑粉菌素化Stilago spp.)等引起的马铃馨黑捷病、小麦纹枯病、水 稻纹枯病、油菜菌核病、小麦散黑穗病、小麦腥黑穗病、玉米小斑病等病害。可与丙硫菌挫、 甲霜灵、嚷虫胺、朽菌醋等复配，不仅可W防治病虫害，还可W延缓抗性产生与发展。氣挫菌 苯胺于2011年在英国获得首个全球登记，2012年又在美国和加拿大取得其登记批准，在澳 大利亚及很多国家获得登记，具有很广阔的应用前景。
[0004] 随着氣挫菌苯胺的登记、推广和使用，作为我国主要出口市场的美国等国家制定 了其在蔬菜、水果、粮谷和畜产品等食品农产品中的最大允许残留量(M化），2012年5月14 日，美国新增对农药戊苯化菌胺(Penflufen)的残留限量要求，残留限量要求规定如下：
欧盟、日本等国家规定若田间使用农药没有在该国家登记，没有制定相应的残留限量 标准时，出口至其国家的食品农产品包括畜禽肉等动物源性食品中残留限量均实行 O. Olmg/L的"一律标准"。
[0005] 现阶段，对氣挫菌苯胺残留量测定方法的研究较少，报道的检测方法主要为蔬菜 和水果中氣挫菌苯胺残留检测方法，运些检测方法均采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)测 定蔬菜和水果中氣挫菌苯胺残留量的检测方法，使用LC-MS/MS测定食品农产品中农药残留 具有快速、简便、灵敏度高等优点，但由于其价格较昂贵，很多检测机构、企业或科研院所未 配置该仪器或配置台数较少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS检测时，需使用不同的流动 相或色谱柱，运样需要不断更换色谱柱、流动相并耗费比较长的时间对系统进行平衡，运一 定程度上制约了 LC-MS/MS的应用。配备电子轰击电离源的气相色谱质谱(GC-EI-MS)分析食 品农产品中农药残留具有很大优势，由于电子轰击电离源质谱为通用性检测器，可实现几 百种农药的多残留分析，可同时定性和定量，价格适中，因此现各种检测机构和企业均配备 气相色谱-电子轰击离子源-质谱仪(GC-EI-MS)对食品农产品中的农药残留进行检测，但迄 今为止未见食品农产品中氣挫菌苯胺残留量的GC-EI-MS检测方法的报道，建立气相色谱-电子轰击离子源-质谱(GC-EI-MS)定性和定量分析粮谷和动物源性食品中氣挫菌苯胺残留 量的检测方法具有重要意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种GC-EI-MS测定果蔬中氣挫菌苯胺残留的方法。
[0007] 为实现W上目的，本发明所采用的技术方案是：一种GC-EI-MS测定果蔬中氣挫菌 苯胺残留的方法，包括如下步骤：
[000引（1)提取 称取样品于具塞离屯、管中，加入乙腊或含1%乙酸的乙腊溶液均质提取Imin,加入氯化 钢或乙酸钢中的一种和无水硫酸儀，振荡后离屯、。
[0009] (2)净化 移取样品提取液上清液于离屯、管中，加入基质分散固相萃取剂，满旋振荡，离屯、，吸取 一定量净化液氮气吹干后，用体积比为1/1的丙酬/正己烧混合溶剂溶解定容，过膜后，待气 相色谱-电子轰击离子源-质谱(GC-EI-MS)检测。
[0010] (3)标准工作溶液的配制 将不含氣挫菌苯胺的同种类基质空白样品按上述步骤（1)、（2)处理时，得样品提取净 化残渣，加入适量溶剂和标准溶液，满旋混匀，配制成至少3个浓度的氣挫菌苯胺系列混合 标准工作液。
[0011] (4)气相色谱-电子轰击离子源-质谱法(GC-EI-MS)测定 将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行GC-EI-MS测定，W标准工作液的色谱峰 面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线;在相同条件下将步骤(2)中净化后的 样品液注入GC-EI-MS进行测定，测得样品液中氣挫菌苯胺的色谱峰面积，代入标准工作曲 线，得到样品液中氣挫菌苯胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中氣 挫菌苯胺残留量;若上机溶液中氣挫菌苯胺残留量超过线性范围上限，需用定容溶剂将上 机溶液浓度稀释至线性范围之内。
[0012] 步骤(1)中样品若为脱水蔬菜和水果，需降低称样量，并加适量水充分浸润。
[0013] 步骤(1)中采用乙腊提取时加入氯化钢盐析，采用含1%乙酸的乙腊溶液提取时加 入乙酸钢盐析;含水量较少的样品盐析时需加入一定量的水。
[0014] 步骤(2)中基质分散固相萃取剂由无水硫酸儀、Cis和PSA组成，每毫升提取液中无 水硫酸儀、Cis和PSA加入量分别为150mg、50mg和25mg。
[0015] 步骤（4)中气相色谱条件为：色谱柱：HP-5 MS毛细管色谱柱，柱长30m，内径 0.25mm，膜厚0.25WH;进样口溫度250°C ;载气:He，不分流模式进样，进样量：1化;恒流模式， 流速1. OmL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分钟20°C的速度升至200°C，然后W每 分钟2°C的速度升至220°C，再W每分钟20°C的速度升至280°C，保持IOmin;传输线溫度:280 r。
[0016] 步骤(4)中质谱条件为:离子源溫度150°C;四极杆溫度150°C;电离模式：电子轰击 电离，即EI模式，能量70eV;扫描方式:选择离子监测（SIM)模式，监测的离子为：141、274、 317。
[0017] 步骤(4)中测定样液和基质标准工作溶液时，若样液中农药色谱峰保留时间与标 准溶液中相应农药保留时间相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均 出现，而且离子丰度比与标准溶液的离子丰度比相一致，则可判断样液中存在运种农药;若 上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。
[0018] 本发明的有益效果在于：
[0019] 本发明利用分散固相萃取技术，建立了简便、快速并能有效避免样品中基质干扰 的样品前处理方法，将此前处理方法结合GC-EI-MS应用于蔬菜和水果中氣挫菌苯胺定性确 证和定量检测，平均回收率为79.0%~91.8%，平均相对标准偏差(RSD)为6.3 %~7.8%， 检出限低于2.73yg/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点。能满足美 国、欧盟、日本等国家对相应产品安全检测的技术要求，为保障我国人民食品安全及对外出 口贸易健康发展提供有力的技术支撑。
【附图说明】
[0020] 图1为添加在空白苹果基质中的氣挫菌苯胺标液的选择离子色谱图。
[0021] 图2为不含氣挫菌苯胺的苹果空白样品的选择离子色谱图。
[0022] 图3为W不含氣挫菌苯胺的苹果空白样品为基质配制的氣挫菌苯胺标准工作曲 线。
【具体实施方式】
[0023] 现W W下实施实例来说明本发明，但并不是限制本发明的范围。
[0024] 实施例中使用的仪器与试剂
[0025] T18 Basic均质器（IKA，Ge;rmany) ;5810R离屯、机化卵endorf,Germany) ;MS3基本型 旋满混合器（IKA，Germany);7890N气相色谱-5977C质谱仪(Agilent，USA);乙二胺-N-丙基 硅烷(PSA)吸附剂(40~60WI1)、十八烷基硅烷键合相(Ci8)净化剂(40~60WI1)均购于美国安 捷伦科技有限公司。
[0026] 试剂：乙腊、丙酬、正己烧化PLC级，Merke，Germany);乙酸（HPLC级，CNW，Germany); 无水硫酸儀、氯化钢和乙酸钢为分析纯，均购自国药集团化学试剂有限公司。
[0027] 标准物质：纯度99.5%，购自德国化.E虹enstorfer公司。
[0028] 实施例1:苹果中氣挫菌苯胺残留量的检测 [00巧](1)样品前处理 称取经充分混匀的苹果10.0 g于50mL离屯、管中，准确加入20mL乙腊，均质提取Imin，加 入3g无水硫酸儀和2g氯化钢，满旋Imin后，700化/min离屯、5min。离屯、后，取6mL乙腊提取液 转移至装有900mg无水硫酸儀、300mg Cis和150mg PSA的离屯、管中，满旋Imin，SOOOr/min离 屯、5min。取4mL上清液于氮吹管中，于40°C氮气吹干，加入体积比为1/1的丙酬/正己烧混合 溶剂溶解残渣，满旋混匀过膜后，移入进样瓶中待GC-EI-MS测定。
[0030] (2)标准工作溶液的配制 准确称取25 ± 0.1 mg标准品于25mL容量瓶中，用乙腊溶解，定容得1000.0 jig/mL标准储 备液;移取1. OmL标准储备液置于IOOmL容量瓶中，用用体积比为1/1的丙酬/正己烧混合溶 剂定容得到10.Oyg/mL标准中间液;将lOiig/