相滤膜过滤，移取200yL滤液，并用超纯水稀释定容到lmL后待测。
[0056]烟气气相物的处理方法：直接吸取收集烟气吸收瓶的乙腈lmL于1.8mL旋盖色谱 瓶，直接进入LC-MS/MS分析。
[0057] 3、LC-MS/MS 条件
[0058] 色谱条件:Atiantis UPLC HSS 13(10〇111111\2.1111111，1.8_);流动相厶:水（含0.1% 甲酸，体积分数），流动相B:甲醇(含0.1 %甲酸，体积分数）；流速0.4mL/min;柱温35 °C ;进样 量2此。梯度洗脱条件：梯度洗脱条件：0~2min，90 % A~50 % A; 2~2.4min，50 % A~30 % A; 2.4~4.0min，30%A~20%A;4.0~6.0min，20%A~5%A;6.0~9.8min，5%A~5%A;9.8~ 10.0min，5%A~90%A;10.0~12.0min，90%A~90%A。
[0059] 质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，喷雾电压（IS): 2.6kV;离子化温度350°C ;雾化气 流量：1000L/Hr;锥孔气(cone)流量50L/Hr;碰撞气流量为0.15ml/min;碰撞气为氩气，其余 气体为氮气；驻留时间为30msec，正离子MRM模式采集，监测离子对及其相应的碰撞能量 (CE)见表1。
[0060] 表1多反应监测模式下五种农药及其内标的部分质谱参数
[0063] 注:*为定量离子对。
[0064] 4、烟气转移率研究
[0065] 加标样品的农残转移率研究:选取两个不同焦油释放量卷烟（1号标烟:8.89mg; 2 号标烟：11 .〇5mg)，挑选重量和吸阻合格的烟支，分别向其中加入各农药标样40yL混合标准 储备液，用微量注射器均匀注射，将加标卷烟置于温度为(22±1)°C，湿度为(60±3)%的环 境中平衡48小时，按照GB/T16450调整检查吸烟机抽吸参数，留取每轮烟蒂和烟灰，分别放 入50mL旋盖离心管中，烟蒂包含滤嘴和烟丝;用剑桥滤片收集主流烟气总粒相物，然后将捕 集过烟气总粒相物的滤片取下用脱脂棉擦洗捕集器内壁合并放入50mL旋盖离心管中；用 20mL乙腈(预先加入lOOiiL内标)吸收主流烟气气相物。按照上面的处理方法分别处理捕集 过烟气总粒相物的滤片、滤嘴、烟蒂烟丝、烟灰以及烟气气相物，并引入LC-MS/MS分析测定。
[0066] 自制卷烟样品的转移率研究：选取国内外烟叶样品63个，利用建立的方法测定烟 叶中的五种杀菌剂截留量，选取截留量较高的烟叶样品6个，利用小型卷烟机切丝并卷制卷 烟，挑选重量合格的烟支，将卷烟置于温度为(22±1)°C，湿度为(60±3)%的环境中平衡48 小时，按照GB/T16450调整检查吸烟机抽吸参数，用剑桥滤片收集主流烟气总粒相物，然后 将捕集过烟气总粒相物的滤片取下用脱脂棉擦洗捕集器内壁合并放入50mL旋盖离心管中； 留取每轮烟蒂(包含滤嘴和烟丝），分别放入50mL旋盖离心管中。按照上面的处理方法分别 处理捕集过烟气总粒相物的滤片和滤嘴，并引入LC-MS/MS分析测定。
[0067]采用针栗注射(5iiL/min)对目标物单独进样，将五种农药及内标(0.5iig/mL)的标 准溶液进行全扫，得到最大响应值的准分子离子[M+H]+为母离子，通过优化喷雾电压、锥孔 电压、碰撞能等参数使得母离子强度最大。在子离子扫描(PI)模式下，调整CE找到该母离子 对应的子离子，其中响应最高的锥孔电压和碰撞能量见表1。加标样品的选择离子流色谱图 如图1所示。
[0068] 标准曲线和检出限
[0069] 分别移取混合标准储备液 OyL，25yL，50yL，100yL，250yL，500yL，1000yL 和 2500yL 混合标液工作液到8个lOmL容量瓶中，每个容量瓶移入100yL内标工作液（lOyg/mL)，配制成 溶剂配制标准工作曲线。基质匹配标准曲线的配制方法为分别移取200此每个标准工作曲 线溶液于8个1.8mL旋盖色谱瓶，加入200yL空白烟叶样品萃取液，用乙腈定容至lmL，各杀菌 剂的线性范围见表2。分别对这些标准溶液进行UPLC-MS/MS分析，并对各标样峰面积与内标 的峰面积的比值(y)和其浓度(x)进行线性回归分析，得到标准曲线，各化合物线性关系良 好(相关系数r 2 0.99)，可以满足定量分析的需要。以3倍信噪比确定方法的检出限，各个基 质中五种杀菌剂的L0D范围为0.325-1.551ng/cig(表2)。
[0070] 表2五种农药的线性范围、检出限和定量限
[0072] 5、方法的回收率
[0073] 采用直线型吸烟机抽吸卷烟后，分别向各个部分添加的混合标准溶液，分别按照 "2、样品的提取和净化"的方法处理样品后上机检测，然后分别计算主流烟气总粒相物、气 相物、滤嘴、烟蒂中烟丝和烟灰的回收率。每个水平测5次，得出平均回收率(表3)。如表3所 示，五种农药平均回收率在90.9 -111.8%之间，其中回收率高低为气相物〉烟灰〉滤嘴〉烟 蒂中烟丝〉主流，RSD范围为1.3%-10.1%。
[0074] 表3主流烟气总粒相物(滤片）、滤嘴、烟蒂中烟丝、烟灰和气相物中五种农药的回 收率和RSD(n = 5)
[0076] 6、标准卷烟加杀菌剂标准品样品的烟气转移率研究
[0077] 通过不同焦油释放量的标准卷烟样品中加入五种杀菌剂标准品进行转移率测定， 分别计算五种杀菌剂向主流烟气总粒相物、气相物、滤嘴、烟蒂烟丝和烟灰中的转移率，如 表4所示。从表4可以看出，五种杀菌剂向主流烟气总粒相物、滤嘴和烟蒂烟丝中均有不同程 度的转移，而烟灰和主流烟气气相物中基本没有农药转移。主流烟气总粒相物中除多菌灵 的转移率较低(〈5%)，其它四种杀菌剂的转移率菌接近或超过30%。主要原因可能是多菌 灵遇热(温度>306°C)易分解成其它化合物，从而导致滤嘴和烟气中多菌灵的转移率较低。 不同焦油量的卷烟添加农药标准品后，农药的转移率有所不同，1号标烟（焦油8.89mg)中， 烟气转移率最高的指标为三唑醇;2号标烟(焦油11.05mg)中烟气转移率最高的指标为霜霉 威;滤嘴的转移率基本都在10%左右。可能的原因是不同的焦油释放量的卷烟，滤嘴和卷烟 纸的通风率有所不同，这也可能导致杀菌剂向烟气和滤嘴的转移率发生变化。
[0078] 表4加标样品中五种杀菌剂向主流烟气总粒相物(滤片）、气相物、滤嘴、烟灰和烟 蒂烟丝中转移率
[0080] 注:n.d?表不未检出。
[0081] 7、高杀菌剂截留量烟叶卷制样品的转移率
[0082] 挑选的6个农药截留量较高的烟叶样品，利用小型卷烟机，切丝卷制自制卷烟，按 照标准方法抽吸卷烟，由于标烟加标样品的转移率研究表明五种杀菌剂基本不向烟灰和主 流烟气气相物中转移，烟蒂中残留烟丝对五种杀菌剂的截留也较低，个别指标在烟蒂烟丝 中有一定截留量，可能是由于向烟丝中加入标准品的过程中人为加入引起的，因此只选取 滤片捕集主流烟气总粒相物和收集滤嘴，分别计算五种杀菌剂向主流烟气总粒相物和滤嘴 中的转移率，如表5所示。
[0083] 从表5可以看出，实际样品中农药向烟气总粒相物和滤嘴的转移率普遍较低，除一 个样品的三唑酮转移率大于20%，其它样品的各个指标转移率都低于20%。这与实际样品 加标实验的转移率进行比较差异较大，主要原因可能是成品卷烟烟支加入标准品后，虽然 有经过48小时的平衡，但是标准品一般会分散在烟叶的表面，基本不会渗入细胞间隙或者 进入细胞中，卷烟在燃吸的过程中，添加在烟丝表面的杀菌剂标准品可能会通过热蒸馏作 用进入成为气体，通过滤嘴，从而进入卷烟主流烟气总粒相物。而多菌灵、稻瘟灵、三唑醇和 三唑酮作为内吸性强的杀菌剂，主要是通过进入植物组织或