一种治疗银屑病中药口服液的质量控制方法
【专利摘要】本发明公开了一种治疗银屑病中药口服液的质量控制方法，该药物由赤芍、土茯苓、肿节风等7味药材组成，具体的质量控制方法是运用薄层色谱法对PSORI-CMO1中赤芍和土茯苓进行薄层鉴别，同时结合高效液相色谱法测定口服液中绿原酸、芍药苷、异嗪皮啶、落新妇苷和黄杞苷的含量，确保所检测成分的准确、可靠，来有效控制中药口服液质量的目的。本发明克服了复方中药多成分的复杂测定方法，优点在于通过对药物中两种药材的鉴别和重要活性成分含量的测定，快速、有效地确保制剂的内在质量、疗效和稳定性，提高PSORI-CMO1口服液质量标准的可控性。
【专利说明】
一种治疗银屑病中药口服液的质量控制方法
技术领域
[0001] 本发明采用现代分析检测仪器检测中药制剂技术领域，涉及一种治疗银肩病的口 服液的质量控制方法。
【背景技术】
[0002] 银肩病是一种反复发作的慢性皮肤病，具有遗传倾向，感染、应激、压力等多因素 刺激诱导的以红斑鳞肩为皮损表现。目前全球已有银肩病患者1. 25亿，我国至少有400万 的银肩病患者，因其难治疗、易复发、具有遗传性，并能显著增加患者心脑血管等重大疾病 的发病率，导致患者出现严重的心理压力、自卑、失落，甚至自杀倾向，极大程度地影响了患 者的生存质量。银肩病病因与发病机制非常复杂，目前尚无完全根治的手段，现代医学主要 采用皮质类固醇激素、维A酸类、甲氨蝶呤（MTX)、糖皮质激素和生物制剂等。大多数疗法 毒副作用严重，不宜长期使用；生物制剂价格昂贵，尚需进一步进行远期安全性评估。中医 学在治疗银肩病方面占有重要的地位，积累了丰富的治疗经验，可有效缓解症状、减少复发 率、控制发展，且毒副作用低、价格适宜、适合长期使用。
[0003] 治疗银肩病的中药银肩灵方是广东省中医院临床治疗银肩病的专用药物（批号： 粵Z20080123)，是国医大师榻国维教授经验之方。银肩灵优化方（PS0RI-CM01)是发明人由 银肩灵方化裁，由土茯苓、赤芍、肿节风、甘草等7味药材组成，方以活血化瘀，凉血消斑，除 湿止痒为主要功效。申请发明人通过大量临床基础研究发现：PS0RI_CM01具有调剂免疫、 抗细胞增殖和止痒的功效，还能降低银肩病患者皮损面积、改善皮损严重程度。（卢传坚，刘 凤年.银肩灵片中药提取液对肿瘤坏死因数-a刺激后角朊细胞分泌细胞因子IL-8的影 响[J].辽宁中医杂志，2009,36(11) :1862-1863;卢传坚，闫玉红.银肩灵止痒作用的实验 研究[J].中国药房.2008,19(6) :409-410;余靖宏，赵瑞芝，卢传坚.银肩灵优化方对银肩 病豚鼠及炎性刺激角质形成细胞增殖的影响[J].中华中医药杂志，2013,05 :1531-1534; Lu Chuan-jian，XIANG Yu，XIE Xiu-li, etc. A Randomized Controlled Single-Blind Clinical Trial on 840utpatients with Psoriasis Vulgaris by Auricular Therapy Combined with Optimized Yinxieling Formula(PS0RI-CM01)[J]? Chinese Journal of Integrative Medicine, 2012,03 ：186-191.)〇
[0004] 随着科学的发展，分析仪器的普及应用，使中药复方检测分析和质量控制不断提 高和完善。其中高效液相色谱检测分析技术在中药质量控制中发挥越来越重要的作用。它 是通过光谱色谱等分析手段对中药或复方进行成分检测，利用不同成分特有的化学图谱， 反映中药或复方所含的内在化学成分的种类和含量。
[0005] PS0RI-CM01由赤芍、肿节风、土茯苓等7味药材组成，其活性成分较多，依据2010 版中国药典，各组分药材的色谱条件与系统适用性试验方法各不相同，逐一测定复方中各 药材的目标成分含量，不利于整体上评价和控制复方中药的质量，难以保证其药效成分的 稳定性和数量。
【发明内容】
[0006] 本发明目的在于根据现代技术，提供一种治疗银肩病的中药口服液的快速、高效 质量控制方法，从整体上评价和控制口服液质量，保证治疗银肩病中药的疗效更加稳定、可 与巨〇
[0007] 本发明是通过以下技术方案实现：
[0008] -种治疗银肩病中药口服液的质量控制方法，其特征在于，该方法包括以下步 骤：
[0009] (1)用薄层色谱法鉴别该药物中药材赤芍，包括：
[0010] a.供试样品的制备：取本品口服液10mL倒入分液漏斗，加乙醇10mL，振摇提取3 次，合并提取液，水浴蒸干，残渣加甲醇lmL使溶解，取上清液作为供试品溶液；
[0011] b.对照药材溶液的制备：取赤芍对照药材粉末0. lg，加乙醇10mL，超声提取30分 钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lmL使溶解，作为赤芍对照药材溶液；
[0012] c.赤芍薄层色谱鉴别：照薄层色谱法试验，分别吸取对照药材溶液和样品溶液 各2 y L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、甲酸的质量比例为 40 : 5 : 10 : 0.2作为展开剂，展开，取出，晾干，喷5%香草醛溶液显色，在105°C加热至 斑点显色清晰，白光下检视；
[0013] (2)用薄层色谱法鉴别该药物中药材土茯苓，包括：
[0014] a.供试样品的制备：取本品口服液10mL，放入分液漏斗，加乙醇10mL，振摇提取3 次，合并提取液，水浴蒸干，残渣加甲醇lmL使溶解，取上清液作为供试品溶液；
[0015] b.对照药材溶液的制备：取土茯苳对照药材lmg，加甲醇20mL，超声提取30min，提 取液滤出，挥干，加甲醇lmL溶解作为对照药材溶液。取落新妇苷对照品lmg，甲醇溶解制成 lmg/mL对照品溶液；
[0016] c. 土茯苓薄层色谱鉴别：依照薄层色谱法试验，分别吸取土茯苓对照药材溶 液-落新妇苷对照品溶液-供试样品3种溶液2 y L，0. 5 y L，1 y L，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以甲苯、乙酸乙酯、甲酸的质量比例为13 : 32 : 9作为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以3% A1C13溶液，放置20分钟后，置紫外光灯下检视；
[0017] (3)用高效液相色谱法测定药物中绿原酸、异嗪皮啶、芍药苷、落新妇苷和黄杞苷 的含量，包括：
[0018] a.高效液相色谱条件：InertSil 0DS-3色谱柱，十八烷基硅烷键合硅胶为填充 剂，流动相为甲醇A-甲酸水，梯度洗脱为0~10min 30%A -35%A、10~45min 35% A - 45 % A、45 ~60min 45 % A - 75 % A，平衡时间 15min，流速 0? 8mL/min，进样量 10 y L， 柱温24°C，PDA检测器采集范围：190~400nm ;检测波长330nm和230nm ;
[0019] b.供试品溶液的配制：取PS0RI-CM01处方剂量，常规水煎提取，前2次，每次1小 时，第3次45分钟，合并提取液，用纱布过滤，减压回收得粗提液，加去离子水定容至每毫升 药液含lg原药，用去离子水稀释5、10和15倍；
[0020] c.对照品溶液的制备：精密称取绿原酸、异嗪皮啶、芍药苷、落新妇苷和黄杞苷5 种对照品各2mg，分别加甲醇配制不同倍数质量浓度的对照品溶液；
[0021] d.线性关系考察：分别精密吸取上述不同浓度的5种混合对照品溶液，高效液相 色谱仪进样10 yL，以测得的响应信号和浓度进行线性回归，得到5种标准品的回归方程；
[0022] e.测定法：分别精密吸取对照品和供试品溶液各10 y L，注入液相色谱仪测定。
[0023] 作为优选的，治疗银肩病中药口服液的质量控制方法的供试品溶液为水提液，具 体方法为：取PS0RI-CM01处方剂量，常规水煎提取，前2次，每次1小时，第3次45分钟，合 并提取液，用纱布过滤，减压回收得粗提液，加去离子水定容至即每毫升药液含lg原药，用 去尚子水稀释5、10、15倍。
[0024] 优选的，所述的治疗银肩病中药口服液的质量控制方法用于提取方法相同的 PS0RI-CM01片剂，颗粒剂或药物组成含有肿节风、赤芍、土茯苓药材的复方。
[0025] 优选的，所述的提取液用II型ZTC 1+1天然澄清剂澄清。它是一种以天然多糖为 原料制成的天然高分子物质，由A、B两个组分组成，A组分为黄褐色可溶性固体粉末或浅褐 色液体，主要含淀粉酶，配成1 %的水溶液使用；B组分为浅黄色可溶性固体粉末或浅褐色 液体，主要含淀粉酶的复合酶，用1 %醋酸配成1 %浓度的溶液使用。
[0026] 优选的，在治疗银肩病中药口服液的质量控制方法的含量测定方法中：供试品稀 释5倍，过0. 22 y m滤膜，10 y L进液相色谱仪、绿原酸的含量为：17. 31 y g/ml、异嗪皮啶的 含量为：9. 96 y g/mL、芍药苷的含量为：438. 45 y g/mL、落新妇苷的含量为：157. 07 y g/mL、 黄杞苷的含量为：71. 42 y g/mL。
[0027] 优选的，所述的薄层色谱法鉴别赤芍和土茯苓中，赤芍以三氯甲烷：乙酸乙酯： 甲醇：甲酸为40 : 5 : 10 : 0.2作为展开剂，5%香草醛溶液显色，土茯苓以甲苯：乙酸 乙酯：甲酸为13 : 32 : 9作为展开剂，3% A1C13显色。
[0028] 本发明以赤芍药材的鉴定成分芍药苷，肿节风的鉴定成分异嗪皮啶及土茯苓的鉴 定成分落新妇苷和黄杞苷的含量测定为指标，该方法避免了药物组成药材中药物成分在同 一色谱条件下响应（峰）的重叠，以5种活性成分的含量测定为控制标准，更加合理、真实 地反映一种治疗银肩病的中药口服液的药品质量。
[0029] 说明书附图
[0030] 图1是赤芍对照药材图。
[0031 ] 图2是土茯苓对照药材图。
[0032] 图3是330nm波长下绿原酸、异嗪皮啶、落新妇苷和黄杞苷5种对照品的色谱图。
[0033] 图4是230nm波长下芍药苷的色谱图。
[0034] 图5是银肩灵优化方（PS0RI-CM01) 330nm波长下HPLC色谱图。
[0035] 图6是银肩灵优化方（PS0RI-CM01) 230nm波长下HPLC色谱图。
[0036] 图7是土茯苓330nm波长下HPLC色谱图。
[0037] 图8是绿原酸、异嗪皮啶、落新妇苷和黄杞苷对照品光谱图。
[0038] 图9是芍药苷对照品光谱图。
[0039] 图10是银肩灵优化方中绿原酸、异嗪皮啶、落新妇苷和黄杞苷对照品光谱图。
[0040] 图11是银肩灵优化方中芍药苷对照品光谱图。
[0041] 图12是阴性样品330nm波长下的HPLC色谱图。
[0042] 图13是阴性样品230nm波长下的HPLC色谱图。
【具体实施方式】
[0043] 如图1-13所示，本发明一种治疗银肩病中药口服液的质量控制方法，该方法按如 下步骤进行：
[0044] (1)供试品溶液的配制：取PS0RI-CM01处方剂量，常规水煎提取（前2次，每次 lh，第3次45min)，合并提取液，用纱布过滤，减压回收得粗提液，加去离子水定容至每毫升 药液含lg原药。同时，用去离子水稀释至5、10、15倍备用。
[0045] (2)对照品溶液的制备精密称取绿原酸、异嗪皮啶、芍药苷、落新妇苷和黄杞苷5 种对照品各2mg，分别加甲醇配制不同倍数质量浓度对照品溶液。
[0046] (3)线性关系考察：分别精密吸取上述不同浓度的5种混合对照品溶液，高效液相 色谱仪进样10 yL，以测得的响应信号（峰面积）和浓度进行线性回归，得到5种标准品的 回归方程。绿原酸Y = 29901x+5698. 6 (R2= 0. 9992)，浓度在1. 79~115 y g/mL范围线性 良好；芍药苷Y = 17281X+117236 (R2= 0. 9997)，浓度在5. 84~750 y g/mL范围线性良好； 异嗪皮啶Y = 25094x+34497 (R2= 0. 9989)，浓度在0. 54~87. 5 y g/mL范围线性良好；落 新妇苷Y = 5272. 8x+60778 (R2= 0. 9994)，浓度在7. 81~1000 y g/mL范围线性良好；黄杞 苷 Y = 6986. 4x+37074 (R2= 0. 9992)，浓度在 3. 91 ~500 y g/mL 范围线性良好。
[0047] (4)测定方法：照高效液相色谱条件测定，色谱条件和系统适用性和Inertsil 0DS-3色谱柱，流动相见表1，平衡时间15min，流速0. 8mL/min，进样10 y L，柱温24°C，PDA 检测器采集范围：190~400nm ;检测波长330nm和230nm。
[0048] 表1流动相梯度洗脱表
[0050] (5)对上述确定的测定方法进行有效性评价，其中包括精密度、重复性、稳定性等。
[0051] 2.银肩灵口服液中赤芍和土茯苓用薄层色谱法鉴别：
[0052] (1)样品溶液的配制
[0053] 供试样品溶液的制备：取本品口服液10mL，放入分液漏斗，加乙醇10mL，振摇提取 3次，合并提取液，水浴蒸干，残渣加甲醇lmL使溶解，取上清液作为供试品溶液。
[0054] 取赤苟对照药材0. lmg，加乙醇10mL，超声提取30min，提取液滤出，挥干，加乙醇 lmL溶解作为赤芍对照药材溶液。
[0055] 取土茯苳对照药材lmg，加甲醇20mL，超声提取30min，提取液滤出，挥干，加甲醇 lmL溶解作为对照药材溶液。取落新妇苷对照品lmL，制成lmg/mL对照品溶液。
[0056] (2)赤芍薄层色谱鉴别
[0057] 依照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB)试验，分别吸取对照药材溶 液和样品溶液各2 yL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸 (40 : 5 : 10 : 0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷5%香草醛溶液显色，在105°C烘箱加 热至斑点显色清晰，白光下检视。如图1所示，供试品色谱中，在与对照品溶液色谱相应的 位置上，显相同颜色的斑点。
[0058] (3) 土茯苓薄层色谱鉴别
[0059] 依照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB)试验，分别吸取土茯苓对照 药材溶液-落新妇苷对照品溶液-供试样品3种溶液2 y L，0. 5 y L，1 y L，分别点于同一硅 胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（13 : 32 : 9)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 3%A1C13溶液，放置20min后，置紫外光灯（365nm)下检视。如图2所示，供试品色谱中， 在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0060] 本发明一种治疗银肩病中药口服液的质量控制方法，优选的供试品溶液的制备： 该方法公示品溶液的制备：取PS0RI-CM01处方剂量，常规水煎提取（前2次，每次lh，第3 次45min)，合并提取液，用纱布过滤，减压回收得粗提液，加去离子水定容至每毫升药液含 lg原药。
[0061 ] 本发明一种治疗银肩病中药口服液的质量控制方法中，优选的测定方法：高效液 相色谱条件测定，色谱条件和系统适用性试验：InertSil 0DS-3色谱柱，流动相梯度见表 1，平衡时间15min，流速0. 8mL/min，柱温24°C，PDA检测器采集范围：190~400nm ;检测波 长 330nm 和 230nm，进样 10 y L。
[0062] 本发明所述的质量控制方法，由于芍药苷的最大吸收波长为230. 2nm，绿原酸、异 嗪皮啶、落新妇苷、黄杞苷的最大吸收波长分别为327. 4nm，342. 9nm，290. 4nm，292. 8nm，芍 药苷在大于290nm处吸收很少，故选择230nm和330nm双波长分别测定苟药苷与绿原酸、异 嗪皮啶、落新妇苷、黄杞苷含量。
[0063] 3?澄清工艺及各成分含量
[0064] (1)澄清剂的配制：11型ZTC1+1天然澄清剂由A，B两组分组成。A组分：精密量 取1. 〇g A组分中加入少量在蒸馏水，搅拌成糊状，再加入蒸馏水配制至100mL的粘胶液，溶 胀24h，用双层纱布过滤即得。B组分：精密量取1. 0g B组分中加入少量体积分数为1 %的 醋酸溶液，搅拌成糊状，再加体积分数为1 %的醋酸溶液配制成l〇〇mL的粘胶液，溶胀24h， 用双层纱布过滤，即得。
[0065] (2)澄清剂A、B加入顺序：根据说明书，ZTC天然澄清剂主要是根据溶液的性质选 择不同的添加顺序，一般中药复方相对于蛋白质等电点（pH = 4. 8)为酸性环境，添加顺序 为先B后A组分，B组分用量为A组分2倍。
[0066] (3)评价指标：分别选取绿原酸含量保留率（XI)、芍药苷含量保留率（X2)、异嗪皮 啶苷含量保留率（X3)、落新妇苷含量保留率（X4)、黄杞苷含量保留率（X5)、固形物去除率 (X6)作为评价指标进行综合评分，将化合物保留率权重定为0. 7,固形物去除率X2权重定 为 0? 3,即 0D% =(0? 7X1+0. 7X2+0. 7X3+0. 7X4+0. 7X5)/5+0. 3X6。计算公式如下：
[0067] 化合物保留率=澄清后提取液化合物的含量/提取液中化合物的含量X 100%
[0068] 固形物去除率=(澄清前固形物含量-澄清后固形物含量）/澄清前固形物含 量 X100%
[0069] (4)工艺考察：以澄清剂加入量，料液比，温度，时间为考察因素，各选取最佳的3 水平，以L 9(34)正交表进行试验，以化合物保留率和固形物去除率计算综合评分，进行方差 分析，结果见表2。由正交试验的方差分析可以看出，澄清剂加入量及提取液料液比对综合 评分有显著影响，温度和时间对提取液的澄清效果无统计学意义。试验中发现，澄清剂B组 分为4%时PS0RI-CM01水提液澄效果好，确定II型ZTC 1+1天然澄清剂澄清PS0RI-CM01 提取液的最佳工艺条件为澄清剂加入量B组分4%，B组分为2%料液比为1 : 5,温度为 60°C，反应时间lh。
[0070] 表2 L9(34)正交试验结果
[0072] (5)各成分含量：以II型ZTC 1+1天然澄清剂澄清PS0RI-CM01提取液的最佳工艺 条件：澄清剂加入量B组分4 %，B组分为2 %料液比为1 : 5，温度为60 °C，反应时间lh，制 备样品。高效液相色谱条件：InertSil 0DS-3色谱柱，流动相梯度见表1，平衡时间15min， 流速0. 8mL/min，柱温24°C，PDA检测器采集范围：190~400nm ;检测波长330nm和230nm， 进样10 y L。选择230nm和330nm双波长分别测定芍药苷与绿原酸、异嗪皮啶、落新妇苷、 黄杞苷含量。样品连续进针3次，取平均值。按本发明质量控制方法测得每克生药，绿原 酸的含量为：17. 31μg/ml，异嗪皮啶的含量为：9.96yg/mL，芍药苷的含量为：438.45 yg/ mL，落新妇苷的含量为：157. 07 y g/mL，黄杞苷的含量为：71. 42 y g/mL。
[0073] 本申请发明人经考察获知，当采用乙腈-水，乙腈-甲酸水，甲醇-水体系作为流 动相梯度洗脱时，药物成分分离不理想，运用甲醇-甲酸水体系洗脱，药物各成分没有重 叠，且峰形优异。本实验方案通过对药物活性成分含量的质量控制，从整体上评价和控制口 服液质量，更加合理、真实地反映一种治疗银肩病的中药口服液的药品质量。
[0074] 4?实验研究
[0075] 银肩病典型组织病理特点为表皮角化过度和角化不全，表皮突向下延伸，真皮乳 头延长、水肿，毛细血管扩张、扭曲。棘层增厚、颗粒层消失，角层内或角层下可见Munro微 脓疡（由中性粒细胞构成），周围有淋巴细胞及组织细胞浸润等。本实验目的以观察中药银 肩灵和PS0RI-CM01对小鼠鼠尾鳞片表皮颗粒层形成的影响。
[0076] ⑴实验材料
[0077] a?动物：昆明种小鼠，SPF级，体重（18~22)g，雌雄各半。
[0078] b.药物：银肩灵方组成土茯苓、赤芍、肿节风、甘草等药材，购自康美药业股份有 限公司，经广东省中医院黄志海主任中药师鉴定均符合《中华人民共和国药典》（2010版） 标准；迪银片（国药准字：H50021778)重庆华邦制药股份有限公司；甲氨蝶呤（国药准字： H32026443)，江苏恒瑞医药股份有限公司；0.9%氯化钠注射液，广东大冢制药有限公司生 产，批号：080202。
[0079] c?仪器：Nikon Eclipse E2000 光学显微镜。
[0080] (2)实验方法
[0081] 银肩灵方与PS0RI-CM01常规水煎提取（前2次，每次lh，第3次45min)将煎煮液 混合，按本发明质量控制方法制备工艺制成水煎液，每毫升含生药2g，使用时用蒸馏水配成 实验所需浓度。
[0082] 将健康昆明种小鼠50只，按SPSS软件处理所得随机数字表分为5组，即银肩灵 方组，PS0RI-CM01组，甲氨蝶呤组，迪银片组和空白对照组，每组10只，雌雄各半。空白对 照组给予等容积生理盐水，给药剂量按照不同种属动物间等效剂量的公式换算，银肩灵、 PS0RI-CM01、甲氨蝶呤、迪银片给药量为30g/kg，30g/kg，迪银片组0. 026g/kg。给药容积为 0.2mL/10g，小鼠灌胃给药，每日1次，连续灌胃14d。甲氨蝶呤组以小鼠质量lmg/kg腹腔注 射给药3次，隔日一次，用药期间，每次给药前称重调整给药量。末次给药后24h，脱椎处死 小鼠，取背面距尾根2cm处皮肤长条，甲醛固定，石蜡包埋，HE染色，光镜下观察鼠尾鳞片颗 粒层形成。凡是一个鳞片有连接成行的颗粒层细胞者，称为有颗粒层的鳞片，计数连续100 个鳞片中有颗粒层鳞片数，统计处理结果。
[0083] (3)实验结果
[0084] 银肩灵方、PS0RI-CM01等四组与空白对照组比较差异显著（P < 0. 01);银肩灵方 组及PS0RI-CM01组统计学上无明显差异（P > 0.05)，两组分别与甲氨蝶呤组比较，差异无 统计学意义（P > 〇. 05);与迪银片组比较优于迪银片组，且有显著性差异（P < 0. 01)。
[0085] (4)结论通过给药造模，镜下观察PS0RI-CM01与银肩灵方及中西药物对促进颗 粒层形成的作用。结果发现PS0RI-CM01可明显诱导小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成，提示 PS0RI-CM01同原方一样，对小鼠鼠尾鳞片颗粒层的形成有明显的促进作用，PS0RI-CM01可 能是通过改善银肩病角化不全等病理状态来发挥药效作用。
【主权项】
1. 一种治疗银肩病中药口服液的质量控制方法，其特征在于，该方法包括以下步骤： (1) 用薄层色谱法鉴别该药物中药材赤芍，包括： a. 供试样品的制备：取本品口服液IOmL倒入分液漏斗，加乙醇10mL，振摇提取3次，合 并提取液，水浴蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解，取上清液作为供试品溶液； b. 对照药材溶液的制备：取赤芍对照药材粉末0. lg，加乙醇10mL，超声提取30分钟， 滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇ImL使溶解，作为赤芍对照药材溶液； c. 赤芍薄层色谱鉴别：照薄层色谱法试验，分别吸取对照药材溶液和样品溶液各 2 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、甲酸的质量比例为 40 : 5 : 10 : 0.2作为展开剂，展开，取出，晾干，喷5%香草醛溶液显色，在105°C加热至 斑点显色清晰，白光下检视； (2) 用薄层色谱法鉴别该药物中药材土茯苓，包括： a. 供试样品的制备：取本品口服液10mL，放入分液漏斗，加乙醇10mL，振摇提取3次， 合并提取液，水浴蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解，取上清液作为供试品溶液； b. 对照药材溶液的制备：取土茯苳对照药材lmg，加甲醇20mL，超声提取30min，提取液 滤出，挥干，加甲醇ImL溶解作为对照药材溶液，取落新妇苷对照品lmg，甲醇溶解制成Img/ mL对照品溶液； c. 土茯苓薄层色谱鉴别：依照薄层色谱法试验，分别吸取土茯苓对照药材溶液-落新 妇苷对照品溶液-供试样品3种溶液2 μ L，0. 5 μ L，1 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以甲苯、乙酸乙酯、甲酸的质量比例为13 : 32 : 9作为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3% AlCl3溶液，放置20分钟后，置紫外光灯下检视； (3) 用高效液相色谱法测定药物中绿原酸、异嗪皮啶、芍药苷、落新妇苷和黄杞苷的含 量，包括： a. 高效液相色谱条件=Inertsil 0DS-3色谱柱，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流 动相为甲醇A-甲酸水，梯度洗脱为0~IOmin 30 % A -35 % A、10~45min 35 % A -45% A、45 ~60min 45 % A - 75 % A，平衡时间 15min，流速(λ 8mL/min，进样量 10 μ L，柱温 24°C， PDA检测器采集范围：190~400nm ;检测波长330nm和230nm ; b. 供试品溶液的配制：取PS0RI-CM01处方剂量，常规水煎提取，前2次，每次1小时， 第3次45分钟，合并提取液，用纱布过滤，减压回收得粗提液，加去离子水定容至每毫升药 液含Ig原药，用去离子水稀释5、10和15倍备用； c. 对照品溶液的制备：精密称取绿原酸、异嗪皮啶、芍药苷、落新妇苷和黄杞苷5种对 照品各2mg，分别加甲醇配制不同倍数质量浓度的对照品溶液； d. 线性关系考察：分别精密吸取上述不同浓度的5种混合对照品溶液，高效液相色谱 仪进样10 μ L，以测得的响应信号和浓度进行线性回归，得到5种标准品的回归方程； e. 测定法：分别精密吸取对照品和供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪测定。2. 根据权利要求1所述的一种治疗银肩病中药口服液的质量控制方法，该方法供试品 溶液为水提液，具体方法为：取PS0RI-CM01处方剂量，常规水煎提取，前2次，每次1小时， 第3次45分钟，合并提取液，用纱布过滤，减压回收得粗提液，加去离子水定容至即每毫升 药液含Ig原药，用去离子水稀释5、10、15倍。3. 根据权利要求1所述的一种治疗银肩病中药口服液的质量控制方法，其特征在于： 该方法用于提取方法相同的PS0RI-CM01片剂，颗粒剂或药物组成含有肿节风、赤芍、土茯 苓药材的复方。4. 根据权利要求1所述的一种治疗银肩病中药口服液的质量控制方法，其特征在于： 所述的提取液用II型ZTC 1+1天然澄清剂澄清： 所述的II型ZTC1+1天然澄清剂：它是一种以天然多糖为原料制成的天然高分子物 质，由A、B两个组分组成，A组分为黄褐色可溶性固体粉末或浅褐色液体，主要含淀粉酶，配 成1%的水溶液使用；B组分为浅黄色可溶性固体粉末或浅褐色液体，主要含淀粉酶的复合 酶，用1 %醋酸配成1 %浓度的溶液使用。5. 根据权利要求1所述的一种治疗银肩病中药口服液的质量控制方法，其特征在于， 含量测定方法中：供试品稀释5倍，过0. 22 μ m滤膜，10 μ L进液相色谱仪、绿原酸的含量 为：17. 31 μ g/ml、异嗪皮啶的含量为：9. 96 μ g/mL、芍药苷的含量为：438. 45 μ g/mL、落新 妇苷的含量为：157. 07 μ g/mL、黄杞苷的含量为：71. 42 μ g/mL。6. 根据权利要求1所述的一种治疗银肩病中药口服液的质量控制方法，其特征在 于：所述的薄层色谱法鉴别赤芍和土茯苓中，赤芍以三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：甲酸为 40 : 5 : 10 : 0.2作为展开剂，5%香草醛溶液显色，土茯苓以甲苯：乙酸乙酯：甲酸为 13 : 32 : 9作为展开剂，3% AlCl3显色。
【文档编号】G01N30/90GK105891404SQ201510031414
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2015年1月18日
【发明人】卢传坚, 王冬梅, 朱伟
【申请人】广东省中医院