快速检测番鸭细小病毒的试纸条的制作方法
【技术领域】
[0001] 本实用新型涉及免疫化学检测技术领域。更具体地说，本实用新型涉及一种快速 检测番鸭细小病毒的试纸条。
【背景技术】
[0002] 番鸭细小病毒病（MuscovyduckparvovirusDiseaseJDH))，是由番鸭细小病毒 (Muscovyduckparvovirus，MDPV)引起的，以腹泻、喘气和软脚为主要临诊症状的一种急 性、败血性传染病，该病主要发生于3周龄以内的番鸭，故又称三周病，其主要临床症状是 呼吸困难、厌食、腹泻、脱水及迅速消瘦。由于该病传播快，发病率、死亡率都很高，给番鸭养 殖造成重要经济损失。
[0003] 番鸭细小病毒病最早于20世纪80年代中后期出现于我国福建和法国西部 Brittany地区，现已广泛分布。由于MDPV属细小病毒，对环境抵抗力强，65°C加热30min对 其滴度无影响，对乙醚等有机溶剂不敏感，对胰酶和PH3稳定，难于从环境中消除，极大影 响了我国养鸭业的健康发展。
[0004] 及时、快速诊断MDro，是有效控制MDro的前提。目前MDro的诊断主要有常规实 验室检测和分子生物学两大类方法。常规方法主要有病毒分离鉴定和MDPV抗体的血清学 检测，包括琼脂免疫扩散试验（AGP)、血清中和实验、ELISA等方法。分子生物学方法主要有 PCR和核酸探针技术等。MDPV的病毒分离培养、AGP、IFA、ELISA、PCR和核酸探针等检测技 术操作复杂，需要昂贵的仪器设备、过程较长、耗时费力，需要特定仪器设备和专业技术人 员操作，很难在基层普及，不能满足生产一线或疫病现场的快速诊断需要。技术非常重要而 迫切。
[0005]鉴于以上描述，亟待有一种快速检测禽番鸭细小病毒感染设备及技术的产生。 【实用新型内容】
[0006] 本实用新型的一个目的是提供一种快速检测番鸭细小病毒的试纸条，并提供至少 后面将说明的优点。
[0007] 本实用新型还有一个目的是提供一种结果显示直观、准确、快速检测MDPV的试纸 条，与其他检测方法相比，该试纸条特异性强、灵敏度高、操作简便、结果显示快速，检测成 本低廉。
[0008] 为了实现根据本实用新型的这些目的和其它优点，本实用新型提供了一种快速检 测番鸭细小病毒的试纸条，包括：
[0009] 支撑层、吸附纤维层、金标抗体纤维层、纤维素膜层及吸水层，其中吸附纤维层、金 标抗体纤维层、纤维素膜层及吸水层顺次搭接粘贴在支撑层上；
[0010] 番鸭细小病毒试纸的检测印迹线，其为包被的抗番鸭细小病毒的单克隆抗体或多 克隆抗体的检测印迹线且设置在所述纤维素膜层上；
[0011] 番鸭细小病毒试纸的对照印迹线，其为包被的羊抗鼠免疫球蛋白G或兔抗鼠免疫 球蛋白G的对照印迹线且设置在所述纤维素膜层上，且与所述番鸭细小病毒试纸的检测印 迹线定距间隔排列；
[0012] 其中，所述金标抗体纤维层上附着有与所述检测印迹线对应的以胶体金标记的抗 番鸭细小病毒单克隆抗体或多克隆抗体。
[0013] 优选的是，其中，在所述吸附纤维层、金标抗体纤维层及吸水层上端面分别敷设保 护膜，且在所述吸附纤维层上端面保护膜上设置样品标记线，所述样品标记线与所述吸附 纤维层和所述金标抗体纤维层交界处的水平距离为0. 3~0. 7cm。
[0014] 优选的是，其中，所述番鸭细小病毒试纸的检测印迹线设置在所述纤维素膜层且 靠近所述金标抗体纤维层的一端。
[0015] 优选的是，其中，所述番鸭细小病毒试纸的检测印迹线与所述羊抗鼠免疫 球蛋白G或兔抗鼠免疫球蛋白G的对照印迹线的排列组合为"II"、"//"、"++"、
'I中任一种。
[0016] 优选的是，其中，所述纤维素膜层由硝酸纤维素、纤维素、羧化纤维素或聚偏二氟 乙稀制成。
[0017] 优选的是，其中，所述吸附纤维层由玻璃棉、尼龙纤维或聚酯纤维制成。
[0018] 优选的是，其中，所述支撑层由不吸水的硬质塑胶片或硬纸条制成。
[0019] 优选的是，其中，所述吸水层由吸水纸制成。
[0020] 优选的是，其中，所述金标抗体纤维层由玻璃棉、尼龙纤维或聚酯纤维制成。
[0021] 本实用新型至少包括以下有益效果：
[0022] (1)检测特异性强，敏感性高。本实用新型提供的试纸条以胶体金印迹线高亲和力 的特异性单抗/多抗为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无共价键形成， 二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标对单抗/多抗的特异性和亲和力影响很 小，且具有较高的印迹线率。本实用新型的试纸条具有较高的特异性和敏感性，可检测到 2ng的相应病毒的蛋白。
[0023] (2)操作简便，快速。本实用新型的试纸条在使用时无需附加任何其它仪器和试 剂，只要将其测试端插入待检样品液中30秒左右，5分钟左右即可判定检测结果。
[0024] (3)结果显示直观、准确。本实用新型的试纸条以显示棕红色的检测印迹线和对照 印迹线作为检测的阳性和阴性印迹线，即在纤维素膜上显示两条棕红色印迹线，表示在被 检测样品中有病毒检出，结果为阳性；在纤维素膜上只显示一条棕红色对照印迹线C，表示 在被检测样品液中未检出病毒，结果为阴性。结果判定直观、准确，简单明了，不易出现假阴 性和假阳性误判。
[0025] (4)减少投资和检测成本。本实用新型的试纸条在使用时，不需另配其它仪器、设 备和试剂，节省大量仪器、设备和附加试剂费用；专业和非专业人士均可随时随地进行现场 检测，无需支付专家诊断检查费或送样品去诊断室的路费，节省检测成本，检测费用低。
[0026] (5)应用范围广，便于普遍推广应用。本实用新型提供的试纸条操作简单，成"一 步式"或"傻瓜式"，而且方便携带和保存，能满足不同层次人员的需要，包括专业化验、海关 检疫、卫生防疫、质量监测、畜产品加工、集约化养殖到个体养殖等，具有广阔的市场前景和 较好的经济、社会效益。
[0027] (6)本实用新型根据ELISA的基本原理，用免疫层析试纸检测病毒，利用微孔滤膜 的渗滤浓缩和毛细管作用，将抗原-抗体反应由ELISA的传统液相环境转到固相滤膜上快 速进行，并采用胶体金印迹线代替酶印迹线，凭肉眼直接观察胶体金的显色状况，即时获得 检测结果，因此该方法比ELISA等血清学方法更为简便、快速。
【附图说明】
[0028] 图1为本实用新型的剖面示意图；
[0029] 图2为本实用新型的俯视示意图。
【具体实施方式】
[0030] 下面结合附图对本实用新型做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明 书文字能够据以实施。
[0031]〈实施例1>
[0032] 图中1为以塑胶薄片条制成的支撑层，2为以玻璃棉制成的吸附纤维层，3为附着 有胶体金标记的抗番鸭细小病毒单克隆抗体的玻璃棉制成的金标抗体纤维层，4为硝酸纤 维素膜制成的纤维素膜层，5为由吸水纸制成的吸水层，将编号2、3、4、5各层依次粘贴在支 撑层1上，彼此拼接的交界处纤维互相交叉渗透。在纤维素膜层4上，以抗番鸭细小病毒多 克隆抗体免疫球蛋白G溶液标记检测印迹线6,代号T，以羊抗鼠免疫球蛋白G或兔抗鼠免 疫球蛋白G溶液标记对照印迹线7,代号C;检测印迹线与对照印迹线的排列形式为" | | "。 如图2所示，8-1为覆盖在吸附纤维层2和金标抗体纤维层3上面的测试端的白色保护膜， 在吸附纤维层2和金标抗体纤维层3交界处对应的白色保护膜上偏向于吸附纤维层2 -侧 0. 5cm处印有样品标记线9,样品标记线的右端印有箭头及MAX字样，位于手柄端的