白粗提物等与本方法制备的磁性复合微球按照一定比例混合，在缓冲溶液存 在的情况下于室溫下振荡吸附一小时，待特异性抗体与相应的免疫球蛋白结合后，分别用 清洗液和洗脱液洗掉非特异性结合的抗体和杂蛋白，最后采用特定的洗脱液洗脱特异性吸 附的免疫球蛋白，得到特异性的IgG或I巧。
[0016] 1、W乙締基化晚为配基，对抗体具有选择性吸附的的磁性复合微球的制备方法：
[0017] (1化eA纳米粒子的制备
[0018] 首先采用水热法，W化CI3.6&0为原料，加入4.Og聚乙二醇阳G1000和14. 4g醋 酸钢，揽拌溶解后转移至50mLTeflon-lined的不诱钢反应蓋中，封装好放于程序控溫箱中 200°C反应12h，制备出尺寸均匀且分散性良好的化3〇4磁性纳米磁流体。冷却后分别用乙 醇、水等反复洗涂制备的磁流体。制备出尺寸均匀且分散性良好的化3〇4磁性纳米材料。然 后放于60°C的真空干燥箱中干燥化。最后，将干燥好的化3〇4磁性纳米颗粒分散于无水乙 醇中，W防止其磁聚。
[0019] 似化化@Si〇2磁性复合微球的制备
[0020] 将（1)中制备的化3〇4磁性纳米材料为核，W TE0S为娃源采用溶胶凝胶法制备尺 寸可控的核壳结构的化3〇4@Si〇2磁性复合微球。其制备过程如下：取适量乙醇分散的磁流 体（含700mg化化)，磁分离后用去离子水洗涂S次挑余去乙醇，然后加入0.1mol/L的肥1 溶液50mL，超声30min，W中合电荷，随后，用去离之水洗涂数次，然后转入500血的洁净的 S颈瓶中，加入4:1无水乙醇和去离子水，超声lOmin，开启机械揽拌，缓慢加入5mL 28% 畑3 ? H20,30°C揽拌15min，再缓慢加入4mL TE0S，滴加完毕后于30°C下揽拌反应化。反应 结束后，用无水乙醇洗涂六次，磁分离，最后，将所得的产物于60°C下真空干燥8h，备用，如 附图1所示。 阳OW做W乙締基化晚为配基的化化@Si〇2-S-MEP磁性复合微球的制备
[0022] W化3〇4@Si〇2磁性复合微球为基质，砰取适量的磁性复合微球，加入溶剂无水甲 苯，再加入适量4-琉乙基二甲氧基硅烷揽拌回流反应24h，制得含琉基的化3〇4@Si化磁性复 合微球。向清洗干燥后的含琉基的化3〇4@Si化磁性复合微球中加入无水甲苯，W偶氮二异 下腊（AIBN)为引发剂，并缓慢加入适量4-乙締基化晚揽拌反应30h，清洗干燥制得化3〇4@ Si化-S-MEP磁性复合微球，如附图5所示。
[0023] 本发明所制备的化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性复合纳米粒子是一种疏水电荷诱导磁性吸 附剂，是将磁性纳米粒子的超顺磁学性和疏水电荷诱导色谱的配基MEP对抗体具有特异性 的吸附性能相结合，制备的一种对抗体具有选择性吸附的新型生物功能化的磁性复合纳米 材料。该材料既有很好的超顺磁性，又表现出对抗体吸附的特异性，可用于抗体的快速分离 与制备。
[0024] 本发明的有益效果体现在：
[0025] 1、针对现有技术中，下游生产免疫球蛋白操作周期长的问题，提供了具有特异性 吸附的磁性基质，实现了快速分离。
[00%] 2、针对下游生产中，原料处理复杂的问题，本方法一步纯化的所需原料仅为简单 离屯、去除脂肪产物，不需盐析除杂蛋白。
[0027] 3、针对下游生产所用的蛋白A亲和色谱纯化免疫球蛋白的问题，提供了简单、经 济、快速的分离纯化方法。
[0028] 4、针对下游生产所面临的纯化抗体易失活的问题，本方法采用疏水电荷诱导吸附 剂，提供了 一种溫和的抗体纯化方法。
【附图说明】
[0029] 图1是Fe3〇4@Si〇2磁性复合微球的制备
[0030] 图2是Fe3〇4磁性纳米粒子沈M和Fe 3〇4@Si〇2磁性复合微球和TEM图
[0031] 图3是化3〇4@Si〇2-S磁性复合微球合成路线图 阳0巧图4是Fe3〇4@Si〇2接枝MEP磁性复合微球合成路线图 阳〇3引 图5是Fe3〇4@Si〇2-S-MEP磁性复合微球合成路线图
[0034]图6是Fe3〇4、化化@Si〇2、化化@Si〇2-S-MEP粒子的磁滞回线（298K) 阳0对 图7是应用本发明的化化@Si〇2-S-MEP磁性复合微球对丫-丙种球蛋白和服A的 静态吸附等溫线
[0036]图8是应用本发明的化化@Si〇2-S-MEP磁性复合娃球对丫-丙种球蛋白和服A在 不同盐浓度条件下的吸附情况的比较
[0037] 图9是是应用本发明的化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性复合微球分离纯化人血清中免疫球 蛋白的电泳图，Lane 1 :标准IgG ;Lane 2 :标准HSA ;Lane 3 :血清原样；Lanes 4-7 :洗脱液 (pH 分别为 6、5. 5、5、4)
[0038] 图10应用本发明的化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性复合微球分离纯化鸡卵黄中免疫球蛋 白电泳图，Lane 1 :鸡蛋黄原样；Lanes 2-4 :洗脱液（抑分别为6、5. 5、5) ;Lanes 5-7 :洗脱 液（pH分别为4、3、2)
【具体实施方式】
[0039] W下通过实例对本发明作进一步的描述： 阳040] 实施例1 :
[0041] (1化eA纳米粒子的制备
[0042] 采用水热法制备出尺寸均匀且分散性良好的化3〇4磁性纳米材料。其大致过程下： 于干燥洁净的=颈瓶中加入适量化CI3 ? 6&0,再量取乙二醇加入=颈瓶中作为溶剂，机械 揽拌直至溶液呈黄色透明时，向其中加入4. Og阳G1000,14. 4g无水醋酸钢，机械揽拌使之 溶解。再将上述溶液转移至6个50mL的Teflon-lined的不诱钢反应蓋中，封装好放于程 序控溫箱中200°C反应12h，自然冷却至室溫。将冷却后所得的磁流体倒出，磁分离后用乙 醇洗涂数次（磁分离），再用=次水洗涂数次（磁分离），最后再用无水乙醇洗涂数次，磁分 离后放于60°C的真空干燥箱中干燥化。最后，将干燥好的化3〇4磁性纳米颗粒分散于无水 乙醇中，W防止其磁聚。 阳0创 似化化@Si〇2磁性复合微球的制备
[0044] 将（1)中制备的化3〇4磁性纳米材料为核，W TE0S为娃源采用溶胶凝胶法制备尺 寸可控的核壳结构的化3〇4@Si〇2磁性复合微球，其制备过程如下：取适量乙醇分散的磁流 体（含700mg化化)，磁分离后用去离子水洗涂S次挑余去乙醇，然后加入0.1mol/L的肥1 溶液50mL，超声30min，W中合电荷，随后，用去离之水洗涂数次，然后转入500mL的洁净的 S颈瓶中，加入4:1无水乙醇和去离子水，超声lOmin，开启机械揽拌，缓慢加入5mL28% 畑3 ? H20,30°C揽拌15min，再缓慢加入4mLTE0S，滴加完毕后于30°C下揽拌反应化。反应 结束后，用无水乙醇洗涂六次，磁分离，最后，将所得的产物于60°C下真空干燥8h，备用。
[0045] 通过上述实验方法，可进行尺寸可控的核壳结构的化3〇4@Si〇2磁性复合微球的制 备，该纳米复合微球的粒径可控制在50-1000nm。本次发明所采用的化3〇4纳米粒子粒径均 为200皿，Fe3〇4@Si化纳米粒子粒径均为为300-400皿，合成过程和粒径测试结果如图1和图 2所示。
[0046] (3) W 4-乙締化晚为配基分离抗体的吸附介质的制备
[0047]W化3〇4@Si化磁性复合微球为基质，选择最佳粒径的磁性纳米粒子并对其进行改 性（本次实践选用200nm左右的磁性复合微球），WMEP为配基制备对抗体具有特异性吸附 作用的化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性复合微球，制备过程如下：首先砰取适量二氧化娃磁性微球 于一干燥的lOOmLS颈瓶中，向其中加入50mL无水甲苯，