向其中加入0.Ig 4-琉乙基S甲 氧基硅烷，升溫至90°C，在回流揽拌下反应2地。反应完毕后，分别用甲醇和水洗涂=次，然 后放于50°C烘箱中烘干待用。然后将上述产物放于一 lOOmLS颈瓶中，向其中加入50mL无 水甲苯，0.Olg偶氮二异下腊（AIBN)并缓慢加入1.0血4-乙締基化晚。升溫至60°C，在揽 拌下反应30h。反应结束后，分别用水和甲醇洗涂数次，然后放于50°C真空干燥箱中烘干。 保留产品待用。 W48] 本发明制备的化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性复合微球为通过4-琉乙基S甲氧基硅烷偶 联而成，引入了-S-原子，通过琉基-締点击反应将4-乙締基化晚固定在磁性基质上，在本 发明所应用的条件下硫原子和乙締基化晚通过相互作用，可W得到对位偶联的磁性复合微 球，结果如图5所示。 W例实施例2 :
[0050] W 3-乙締化晚为配基分离抗体的吸附介质的制备
[0051] W化3〇4@Si化磁性复合微球为基质，选择最佳粒径的磁性纳米粒子并对其进行改 性（选用200皿左右的磁性复合微球），W MEP为配基制备对抗体具有特异性吸附作用的 化3〇4@Si〇2-MEP磁性复合微球，制备过程如下：首先砰取适量二氧化娃磁性微球于一干燥的 100血S颈瓶中，向其中加入50血无水甲苯，向其中加入0.1 g 4-琉乙基S甲氧基硅烷，升 溫至90°C，在回流揽拌下反应2地。反应完毕后，分别用甲醇和水洗涂=次，然后放于50°C 烘箱中烘干待用。然后将上述产物放于一 lOOmL S颈瓶中，向其中加入50mL无水甲苯， 0.0 lg偶氮二异下腊（AIBN)并缓慢加入1. 0血3-乙締基化晚。升溫至60°C，在揽拌下反 应30h。反应结束后，分别用水和甲醇洗涂数次，然后放于50°C真空干燥箱中烘干。保留产 品待用。 阳化引 间位的化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性复合微球为通过4-琉乙基立甲氧基硅烷偶联而成， 引入了 -S-原子，通过琉基-締点击反应将3-乙締基化晚固定在磁性基质上，在所应用的 条件下硫原子和3-乙締基化晚相互作用，得到间位偶联的磁性复合微球。 阳〇5引实施例3
[0054] W 2-乙締化晚为配基分离抗体的吸附介质的制备 阳化5] W化3〇4@Si化磁性复合微球为基质，选择最佳粒径的磁性纳米粒子并对其进行改 性（选用200皿左右的磁性复合微球），W MEP为配基制备对抗体具有特异性吸附作用的 化3〇4@Si〇2-MEP磁性复合微球，制备过程如下：首先砰取适量二氧化娃磁性微球于一干燥的 100血S颈瓶中，向其中加入50血无水甲苯，向其中加入0.1 g 4-琉乙基S甲氧基硅烷，升 溫至90°C，在回流揽拌下反应2地。反应完毕后，分别用甲醇和水洗涂=次，然后放于50°C 烘箱中烘干待用。然后将上述产物放于一 lOOmL S颈瓶中，向其中加入50mL无水甲苯， 0.0 lg偶氮二异下腊（AIBN)并缓慢加入1. 0血2-乙締基化晚。升溫至60°C，在揽拌下反 应30h。反应结束后，分别用水和甲醇洗涂数次，然后放于50°C真空干燥箱中烘干。保留产 品待用。
[0056] 邻位的化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性复合微球为通过4-琉乙基S甲氧基硅烷偶联而成， 引入了 -S-原子，通过琉基-締点击反应将2-乙締基化晚固定在磁性基质上，在所应用的 条件下硫原子和MEP在通过相互作用，得到邻位偶联的磁性复合微球。
[0057] 实施例4 : 阳05引对应用本发明制备的化3〇4@Si化-S-MEP磁性复合微球进行了磁学性质测试。在 本发明中，我们采用溶胶凝胶法制备了均一的化化纳米粒子，并对其进行了包覆，制备了 化3〇4@Si〇2微球和化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性复合微球。其纳米性质通过超导量子干设磁测量 系统（S卵ID)在298K下分别测试，图6是Fe3〇4J的〇4@Si〇2微球和化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性复 合微球的磁滞回线，施加的外磁场是从-250000e到2500006。样品在外加磁场的作用下，达 到饱和时的磁化强度随着包覆厚度的增加逐渐减小，化3〇4的磁化强度为约为66. 48emu/g， 化3〇4@Si〇2的磁化强度约为61. 25emu/g左右，而化3〇4@Si〇2@MEP的磁化强度约为58. 13emu/ 邑。
[0059] 应用本发明制备的化^@Si〇2-S-MEP磁性复合微球在外加磁场的作用下，实现快 速分离，此过程在一分钟之内即可完成，说明我们合成的复合微球具有很好的超顺磁性，可 W用磁性分离的方法将磁性颗粒与溶液快速分离。 W60] 实施例5
[0061] 应用本发明的化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性复合微球对丫-丙种球蛋白和HSA的静态吸 附等溫线
[0062] 吸附选择性是评价吸附剂性能不可缺少的因素。在血清中，存在很多种蛋白。其主 要包括=种：白蛋白、球蛋白和纤维蛋白原，由于纤维蛋白原含量较少且实验室条件有限， 在本方法中不进行研究。我们对血清中存在的主要蛋白，免疫球蛋白和白蛋白的吸附性能 进行了研究，探讨了本发明的化3〇4@Si化-S-MEP磁性复合微球的对抗体的选择吸附性能。 阳06引首先，准确称取两份键合MEP的化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性复合微球lOmg，将其分别放 于两个5mL离屯、管中，吸取200 y L 丫-丙种球蛋白和服A标准溶液（lOmg/mL)分别注入到 两个离屯、管中，然后用PBS(20mmol/L K&PO"抑为7. 4,0. 5mol/L化C1)溶液稀释至4血。 在25°C下进行缓慢震荡吸附，并每隔30min进行磁分离并吸取一定量上清液在595nm处进 行蛋白含量的测定。 W64] 由实验结果可W看出：MEP磁性吸附剂可W特异性的吸附目标蛋白丫-丙种球蛋 白，并对杂蛋白HSA基本不吸附。通常情况下，肥1C配基对目标蛋白的作用力主要包括疏水 作用力、特异性作用力、静电排斥、范德华力及氨键作用力等，在优化条件下，MEP对HSA的 疏水作用力很弱，基本不被吸附，IgG由于其强的疏水作用力及特异性的结合力，在吸附条 件下作用力仍然很强，可W被大量吸附。因而，在优化条件下，本实验制备的磁性基质在模 拟的血清中可W实现特异性的捕获目标蛋白的目的，结果如图7所示。 W65] 实施例6
[0066] 应用本发明的化3〇4@Si〇2-S-MEP磁性复合娃球对丫-丙种球蛋白和HSA在不同盐 浓度条件下的吸附情况的比较
[0067] 蛋白质在理想的疏水电荷诱导吸附剂上保留时，应该只与蛋白质与吸附剂间的疏 水作用力有关，但在实际上，往往有不同程度的偏离，运种反常行为可能是由于疏水电荷诱 导吸附剂具有离子交换的性质造成的，在疏水电荷诱导吸附剂上除了疏水作用外还有微弱 的范德华力，氨键和静电作用力等存在，虽然HCIC具有非盐依赖性，但是为了避免运些作 用力对疏水作用力的影响，本实验测定了化C1浓度从0. 5moL/L至3. Omol/L时，盐浓度对 吸附平衡的影响。 W側分别称取四份lOmg键合MEP的化3〇4@Si〇2@MEP磁性复合微球，并分别放于四个 2血离屯、管中，然后，分别向四个离屯、管中加入100 y L 丫-丙种球蛋白标准溶液（lOmg/mL)， 将20mmol/L抑=7. 4的憐酸盐缓冲液中化Cl的浓度分别调节为0. 5mol/L，1. Omol/L， 2. 0mol/L，3. Omol/L，分别补加不同化Cl浓度的PBS溶液分于四个离屯、管中至2血，置于摇 床中25°C下恒溫缓慢震荡3.化，然后进行磁分离，留取每个吸附上清液于4°C冰箱保存，参 比液为不含蛋白质的空白缓冲液，用紫外-分光光度计在595nm下测定各体系吸附蛋白质 后的吸光度，HSA的测试方法同丫-丙种球蛋白。
[0069] 从附图8可W看出，当化C1浓度从0.5mol/L变至3. Omol/L时，丫 -丙种球蛋白 和HSA的吸附量也随之增加，丫-