性的抑制作用。良好的特异性能够减少金纳米棒应用时的毒副作用，更好的发挥其功能。
[0058]实施例4细胞迀移实验
[0059]实验材料:transwell小室购自Corning公司；多聚甲醛以及结晶紫溶液购自谷歌生物公司。实验方法:
[0060](I)细胞迀移实验是利用孔径为8 μΜ的transwell小室实施的。
[0061](2)将经聚乙二醇修饰的金纳米棒处理后的细胞消化重悬(聚乙二醇修饰的金纳米棒的浓度为Oug/mL, 50ug/mL和100ug/mL)，接种4X 14细胞于transwell小室的上室，培养基的血清浓度为0.5%。
[0062](3)下室加入700 μ L含I %血清浓度的培养基。
[0063](4)在孵箱孵育12h后弃去培养基，将小室用多聚甲醛固定20分钟。
[0064](5)将上室膜上层的细胞用棉签擦去，继而用结晶紫对细胞进行染色15分钟。
[0065](6)迀移至膜下层的细胞用倒置显微镜观察并拍照分析。
[0066]实验结果:
[0067]结果如图3所示，A，B, C分别为Oug/mL组，50ug/mL组和100ug/mL组，D为该结果的统计图表，可见聚乙二醇修饰的金纳米棒处理后的细胞迀移能力呈现浓度梯度型降低。由于新生血管形成是一个复杂的过程，细胞的迀移在这个过程中起着重要作用，而细胞迀移实验可以在体外很好的模拟细胞的迀移能力。该结果表明聚乙二醇修饰的金纳米棒可以明显抑制人视网膜血管内皮细胞的迀移，阻断视网膜新生血管形成的过程。
[0068]实施例5细胞管样形成实验
[0069]实验材料:Matrigel基质胶购自美国BD公司。
[0070]实验方法:
[0071](I)用无血清培养基将Matrigel基质胶稀释至浓度为5mg/mL并混勾，将50uL稀释好的基质胶加入96孔板孔中，在37°C孵箱中孵育40分钟使基质胶变为固态。
[0072](2)将聚乙二醇修饰的金纳米棒处理后的细胞消化重悬(聚乙二醇修饰的金纳米棒的浓度为Oug/mL，50ug/mL和100ug/mL)，将含I X 14细胞的100 μ L培养基加入铺有基质胶的96孔板中并孵育3小时。
[0073](3)管样形成的结构用倒置显微镜观察并拍照分析。
[0074]实验结果:
[0075]结果如图4所示，Α, B, C分别为Oug/mL组，50ug/mL组和100ug/mL组，D为该结果的统计图表，可见聚乙二醇修饰的金纳米棒可以抑制人血管内皮细胞的管样结构形成并呈浓度依赖性。细胞管样形成实验是体外模拟血管形成的成熟实验，血管内皮细胞在适当浓度的Matrigel基质胶上可以形成管样的结构。该结果表明聚乙二醇修饰的金纳米棒可以抑制管样结构的形成，进而阻断视网膜新生血管的形成。
[0076]对比例I
[0077]其制备方法同实施例1，不同之处在于，合成金纳米棒生长所需种子液时，合成好的种子放置于29度水浴锅2小时后使用，合成种子及反应液使用的金(HAuCl4)浓度为20mM。该制备方法合成金纳米棒形状见图5A。该方法合成得到的金纳米棒长径较短，球形颗粒多，金纳米棒的纯度较低。
[0078]对比例2
[0079]其制备方法同实施例1，不同之处在于，合成种子及反应液使用的金(HAuCl4)浓度为20mM。该制备方法合成金纳米棒形状见图5B。该制备方法合成的金纳米棒长径较短，长短不一，有较多的球形颗粒。
[0080]对比例3
[0081]其制备方法同实施例1，不同之处在于，合成金纳米棒生长所需种子液时，合成好的种子放置于29度水浴锅2小时后使用。该制备方法合成金纳米棒形状见图5C。该制备方法合成的金纳米棒长径合适，然而球形颗粒仍较多，金纳米棒的纯度较低。
[0082]上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式不受上述实施例的限制。其他任何不脱离本发明之精神和原理下所作的变形，均应认为是本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种聚乙二醇修饰的金纳米棒，其特征在于，所述的金纳米棒的纵横比是5.0，并用分子量为5000的巯基化聚乙二醇与金纳米棒中的金结合。2.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰的金纳米棒，其特征在于，所述的金纳米棒的纵径为 77.48 ±6.468nm，横径为 15.45 ± 1.079nm。3.根据权利要求1或2所述的一种聚乙二醇修饰的金纳米棒，其特征在于，所述的金纳米棒，是用以下方法制备得到的: A、用种子生长法合成金纳米棒: 合成金纳米棒生长所需种子液为5-15mM HAuCl4溶液、1mM NaBH4溶液和10mM的CTAB溶液； 金纳米棒生成所需反应液为10mM的CTAB溶液、0.92M的硫酸溶液、1mM的硝酸银溶液、10mM的维生素C溶液和1mM的HAuCl4溶液； B、聚乙二醇修饰金纳米棒 将分子量为5000的巯基化聚乙二醇溶入到步骤A制得的金纳米棒中，28至30°C水浴中反应，得到聚乙二醇修饰的金纳米棒。4.权利要求1所述的聚乙二醇修饰的金纳米棒的制备方法，按照下述步骤进行: A.金纳米棒合成 首先，合成金纳米棒生长所需种子液:配置5-15mM HAuCl4溶液，1mM NaBH4S液以及10mM的十六烷基三甲基溴化铵溶液；将0.2毫升HAuCl4溶液加入到7.5毫升的CTAB中，利用涡旋振荡器混匀，并加水补齐至9.4毫升，接着将冰冷的0.6毫升NaBH4溶液加入到上述液体中，利用涡旋振荡器混匀30秒；合成好的种子放置于28-30°C水浴中2小时以上，3小时以内； 其次，配置金纳米棒生成所需反应液:配置10mM的CTAB溶液、0.92M的硫酸溶液、1mM的硝酸银溶液、10mM的维生素C溶液以及1mM的HAuCl4溶液；向锥形瓶中分别加入100毫升CTAB溶液、5毫升HAuCl4溶液、I毫升硝酸银溶液、2毫升硫酸溶液及0.8毫升的维生素C溶液，并混匀2分钟；再向锥形瓶中加入0.24毫升种子溶液，利用涡旋振荡器混匀2分钟；最后将该锥形瓶置于29度水浴锅12小时，离心终止反应，得到金纳米棒； B.聚乙二醇修饰金纳米棒 取20mg分子量为5000的巯基化聚乙二醇溶入到10mL金纳米棒中，涡旋振荡器混匀，置于29度水浴锅中反应8小时；离心终止反应，并用双蒸水洗涤3次，最后重悬于双蒸水中，得到聚乙二醇修饰的金纳米棒。5.根据权利要求4所述的聚乙二醇修饰的金纳米棒的制备方法，其特征在于，步骤A中配置1mM HAuCl4溶液；所述合成好的种子放置于29°C水浴中2小时30分钟。6.如权利要求1所述的聚乙二醇修饰的金纳米棒在制备抑制新生血管生成药物中的应用。7.根据权利要求6所述的聚乙二醇修饰的金纳米棒在制备抑制新生血管生成药物中的应用，其特征在于，所述抑制新生血管生成药物为特异性的抑制视人网膜血管内皮细胞增殖的药物。8.根据权利要求6所述的聚乙二醇修饰的金纳米棒在制备抑制新生血管生成药物中的应用，其特征在于，所述抑制新生血管生成药物为可抑制人血管内皮细胞的管样形成的 OlK S/s f Π<Γ*>α V S660ZT—I90T—Iδ
【专利摘要】本发明具体涉及一种聚乙二醇修饰的金纳米棒的制备方法及在制备抑制新生血管生成药物中的应用，属于医药技术领域。本发明利用种子生长法来合成纳米金棒。金含量的高低可以影响最终金纳米棒的长短及纯度，本发明经过探索合成出来长纵横比、高纯度的纳米金棒。本发明制备了毒性低的、聚乙二醇包裹的金纳米棒，并评估了其作为靶向药物治疗视网膜新生血管性疾病的可能性。
【IPC分类】B22F9/24, B82Y40/00, B82Y30/00, B22F1/00
【公开号】CN105170993
【申请号】
【发明人】赵世红, 宋洪元, 郭婷
【申请人】中国人民解放军第二军医大学
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年9月15日