一种桦褐孔菌的中药材或中药渣的双向固体发酵方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及中药生物技术领域，具体是一种桦褐孔菌的中药材或中药渣的双向固 体发酵方法。
【背景技术】
[0002] 桦褐孔菌 Inonotus obliquus (Ach. ex Pers. ) Pilcit 是一种珍稀药用真菌，16-17 世纪以来，东欧、俄罗斯、波兰、芬兰等民间广泛利用它来防治各种疑难杂症，如各种癌症、 心脏病、糖尿病等。动物实验及临床表明：桦褐孔菌无毒副作用，具有抗癌、治疗糖尿病、预 防艾滋病、抗衰老、增强免疫力等功能。用于肿瘤、糖尿病、心血管系统疾病、抗衰老的预防 和治疗，因此桦褐孔菌在医药、食品、保健品等领域具有广阔的应用前景和开发价值，市场 需求量不断加大。然而，目前桦褐孔菌野生资源枯竭，人工驯化栽培尚未成功，液体发酵的 发酵条件要求严格、发酵过程容易染菌、设备投资过大、且干物质含量低、生产成本高，致桦 褐孔菌资源匮乏。
[0003] 中药渣来源于加工中药原料药的生产企业、中药饮片的加工与炮制以及含中药成 分的轻化工产品企业等，全国中药渣的年排放量达3000余万吨。中药渣一般被视为废物抛 弃，如采用堆放填埋焚烧等方式处理，造成了资源的极大浪费和严重的环境污染。目前，中 药渣综合利用领域具有明显局限性，基本上是围绕农业（种植业、养殖业）方向的居多，其 次是造纸业，但成功范例极少，多属探索性初步研究，特别是中药渣再利用在医学上的研究 更是凤毛麟角。
[0004] 庄毅教授等首先创建"双向固体发酵"并付诸实践，将药用真菌接种在中药材或中 药渣的药性基质上，在特定条件下进行固体发酵，产生具有新成分、新功效的药性菌质，由 于"药性基质"不但可以提供真菌所需营养，同时真菌的酶也可分解中药材或中药渣的组织 成分，从而产生新的成分与功效，因此称"双向发酵"，这就是药用真菌新型（双向性）固体 发酵，简称双向发酵。双向固体发酵所需资源丰富、方法简便、成本低廉、效果显著，药用真 菌新型双向性固体发酵工程为中药新药研究开辟了一个新领域，即菌物药，药性菌质将成 为我国拥有自主知识产权新药的一个重要来源（参见：庄毅，中药的一个新领域。中药新药 与临床药理。1992, 3 (2) :49-51)。
[0005] 药用真菌新型双向性固体发酵工程的理论基础、发酵组合的设计、菌质的药理筛 选等内容可参见文献（庄毅，药用真菌新型（双向型）固体发酵工程。中国食用菌，2002， 21(4) :3_6)。已表明运用该技术产生的药性菌质有良好药效，主要表现在增效、扩大应用、 解毒等方面（参见：1、药用真菌新型固体发酵工程与槐芪菌质的研制.中国药学杂志， 2004,39(3) :175-178 ;2、雷公藤解毒持效双向发酵工艺的建立.菌物学报，2010,（02): 294-299 ;3、灵芝双向发酵雷公藤的解毒持效作用，中草药，2009,（12) :1925-1929 ;4、药用 真菌新型（双向性）固体发酵工程对雷公藤解毒持效的初步研究，中国中药杂志，2009， (16) :2083-2087。）
[0006] 目前尚无文献报道桦褐孔菌的中药材或中药渣双向固体发酵技术及其药性菌质 的药理学作用，基于目前桦褐孔菌资源匮乏，中药渣的大量产生，亟需解决桦褐孔菌的资源 短缺问题，并为中药渣的有效再利用开辟新途径。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供一种桦褐孔菌的中药材或中药渣的双向固体发酵方法，获 取具有良好的抗氧化作用、降糖作用和免疫调节等作用的药性菌质，以解决上述【背景技术】 中提出的问题。
[0008] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
[0009] 一种桦褐孔菌的中药材或中药渣的双向固体发酵方法，具体步骤包括：发酵基质 的准备，即对药性基质的处理；发酵菌种桦褐孔菌的处理；将桦褐孔菌接种于药性基质上； 进行双向固体发酵；收集药性菌质。
[0010] 作为本发明进一步的方案：所述药性基质在处理时，对药性基质进行粉碎，加入水 使其含水量为50-65%，装瓶并121°C高压灭菌lh。 toon] 作为本发明进一步的方案：所述发酵菌种的处理方法是将桦褐孔菌进行活化后， 并于28°C条件下扩增培养14-16d，扩增培养的方法是采用液体培养基摇瓶培养。
[0012] 作为本发明进一步的方案：所述双向固体发酵的发酵条件为温度范围 26°C -28°C，发酵天数为 40-60d。
[0013] 作为本发明进一步的方案：所述药性基质是指中药材或中药渣。
[0014] 作为本发明进一步的方案：所述中药材或中药渣为葛根、葛根芩连汤组方药材、六 味地黄丸组方药材、葛根药渣、葛根芩连汤药渣或六味地黄丸药渣。
[0015] 作为本发明再进一步的方案：所述药性菌质是桦褐孔菌在含有中药材或中药渣的 药性基质上固体发酵而产生的菌质。
[0016] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：
[0017] 本发明将桦褐孔菌接种在中药材或中药渣药性基质上进行双向固体发酵，生产的 药性菌质无毒性，具有良好的抗氧化作用、降糖作用和免疫调节等作用，有效解决了珍稀药 用真菌-桦褐孔菌的资源短缺问题，并为中药渣的有效再利用开辟了新途径。
【附图说明】
[0018] 图1为菌质DPPH自由基清除率示意图。
[0019] 图2为菌质OH自由基清除率示意图。
[0020] 图3为不同溶剂提取组分的FRAP值随浓度的变化示意图。
[0021] 图4为不同溶剂提取部位的α-淀粉酶抑制率示意图。
[0022] 图5为不同溶剂提取部位的α -葡萄糖苷酶抑制率示意图。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合【具体实施方式】对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
[0024] 实施例1
[0025] (1)斜面培养基配制：土豆100g削皮、切片，麦麸25g加适量自来水煎煮30min，纱 布滤过，滤液加7. 5g的琼脂，7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，补加自来水至 500mL，121°C 高压灭菌 30min ;
[0026] (2)液体培养基配制：土豆100g削皮、切片，麦麸25g加适量自来水煎煮30min，纱 布滤过，滤液加7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，补加自来水至500mL，121°C 高压灭菌30min ;
[0027] (3)发酵菌种的准备：桦褐孔菌接种到斜面培养基上，28°C培养5-7d，此时菌丝生 长密集，用接种针挑取Icm2的菌块接种到装有液体培养基的培养瓶中，放摇床中培养，摇床 转速130r/min，28°C培养15d，使之产生大量大小均匀、如"珍珠状"的菌球，得菌球液。
[0028] (4)发酵基质的准备：将葛根干燥处理后，粉碎至绿豆般颗粒，每瓶装200g于固 体发酵瓶内，加水制成含水量50% -65%的发酵基质，盖瓶塞，装瓶并121°C高压灭菌Ih备 用；
[0029] (5)双向固体发酵：无菌操作，每个固体发酵瓶内接种菌球液IOmL左右，将发酵瓶 置于26°C -28Γ发酵室培养，待菌丝长满瓶后，继续发酵30d，终止发酵，掏瓶，收集药性菌 质。
[0030] (6)药性菌质后处理：收集的药性菌质及时于50°C温度下干燥。
[0031] 实施例2
[0032] (1)斜面培养基配制：土豆100g削皮、切片，麦麸25g加适量自来水煎煮30min，纱 布滤过，滤液加7. 5g的琼脂，7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，补加自来水至 500mL，121°C 高压灭菌 30min ;
[0033] (2)液体培养基配制：土豆100g削皮、切片，麦麸25g加适量自来水煎煮30min，纱 布滤过，滤液加7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，补加自来水至500mL，121°C 高压灭菌30min ;
[0034] (3)发酵菌种的准备：桦褐孔菌接种到斜面培养基上，28°C培养5-7d，此时菌丝生 长密集，用接种针挑取Icm2的菌块接种到装有液体培养基的培养瓶中，放摇床中培养，摇床 转速130r/min，28°C培养15d，使之产生大量大小均匀、如"珍珠状"的菌球，得菌球液。
[0035] (4)发酵基质的准备：将葛根芩连汤组方药材干燥处理后，粉碎至绿豆般颗粒，每 瓶装200g于固体发酵瓶内，加水制成含水量50% -65%的发酵基质，盖瓶塞，装瓶并121°C 高压灭菌Ih备用；
[0036] (5)双向固体发酵：无菌操作，每个固体发酵瓶内接种菌球液IOmL左右，将发酵瓶 置于26°C -28Γ发酵室培养，待菌丝长满瓶后，继续发酵30d，终止发酵，掏瓶，收集药性菌 质。
[0037] (6)药性菌质后处理：收集的药性菌质及时于50°C温度下干燥。
[0038] 实施例3
[0039] (1)斜面培养基配制：土豆100