g削皮、切片，麦麸25g加适量自来水煎煮30min，纱 布滤过，滤液加7. 5g的琼脂，7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，补加自来水至 500mL，121°C 高压灭菌 30min ;
[0040] (2)液体培养基配制：土豆100g削皮、切片，麦麸25g加适量自来水煎煮30min，纱 布滤过，滤液加7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，补加自来水至500mL，121°C 高压灭菌30min ;
[0041] (3)发酵菌种的准备：桦褐孔菌接种到斜面培养基上，28°C培养5-7d，此时菌丝生 长密集，用接种针挑取Icm2的菌块接种到装有液体培养基的培养瓶中，放摇床中培养，摇床 转速130r/min，28°C培养15d，使之产生大量大小均匀、如"珍珠状"的菌球，得菌球液。
[0042] (4)发酵基质的准备：将六味地黄丸组方药材干燥处理后，粉碎至绿豆般颗粒，每 瓶装200g于固体发酵瓶内，加水制成含水量50% -65%的发酵基质，盖瓶塞，装瓶并121°C 高压灭菌Ih备用；
[0043] (5)双向固体发酵：无菌操作，每个固体发酵瓶内接种菌球液IOmL左右，将发酵瓶 置于26°C -28Γ发酵室培养，待菌丝长满瓶后，继续发酵30d，终止发酵，掏瓶，收集药性菌 质。
[0044] (6)药性菌质后处理：收集的药性菌质及时于50°C温度下干燥。
[0045] 实施例4
[0046] (1)斜面培养基配制：土豆100g削皮、切片，麦麸25g加适量自来水煎煮30min，纱 布滤过，滤液加7. 5g的琼脂，7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，补加自来水至 500mL，121°C 高压灭菌 30min ;
[0047] (2)液体培养基配制：土豆100g削皮、切片，麦麸25g加适量自来水煎煮30min，纱 布滤过，滤液加7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，补加自来水至500mL，121°C 高压灭菌30min ;
[0048] (3)发酵菌种的准备：桦褐孔菌接种到斜面培养基上，28°C培养5-7d，此时菌丝生 长密集，用接种针挑取Icm2的菌块接种到装有液体培养基的培养瓶中，放摇床中培养，摇床 转速130r/min，28°C培养15d，使之产生大量大小均匀、如"珍珠状"的菌球，得菌球液。
[0049] (4)发酵基质的准备：将葛根药渣干燥处理后，粉碎至绿豆般颗粒，每瓶装200g于 固体发酵瓶内，加水制成含水量50% -65%的发酵基质，盖瓶塞，装瓶并121°C高压灭菌Ih 备用；
[0050] (5)双向固体发酵：无菌操作，每个固体发酵瓶内接种菌球液IOmL左右，将发酵瓶 置于26°C -28Γ发酵室培养，待菌丝长满瓶后，继续发酵30d，终止发酵，掏瓶，收集药性菌 质。
[0051] (6)药性菌质后处理：收集的药性菌质及时于50°C温度下干燥。
[0052] 实施例5
[0053] (1)斜面培养基配制：土豆100g削皮、切片，麦麸25g加适量自来水煎煮30min，纱 布滤过，滤液加7. 5g的琼脂，7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，补加自来水至 500mL，121°C 高压灭菌 30min ;
[0054] (2)液体培养基配制：土豆100g削皮、切片，麦麸25g加适量自来水煎煮30min，纱 布滤过，滤液加7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，补加自来水至500mL，121°C 高压灭菌30min ;
[0055] (3)发酵菌种的准备：桦褐孔菌接种到斜面培养基上，28°C培养5-7d，此时菌丝生 长密集，用接种针挑取Icm2的菌块接种到装有液体培养基的培养瓶中，放摇床中培养，摇床 转速130r/min，28°C培养15d，使之产生大量大小均匀、如"珍珠状"的菌球，得菌球液。
[0056] (4)发酵基质的准备：将葛根芩连汤药渣干燥处理后，粉碎至绿豆般颗粒，每瓶装 200g于固体发酵瓶内，加水制成含水量50% -65%的发酵基质，盖瓶塞，装瓶并121°C高压 灭菌Ih备用；
[0057] (5)双向固体发酵：无菌操作，每个固体发酵瓶内接种菌球液IOmL左右，将发酵瓶 置于26°C _28°C发酵室培养，待菌丝长满瓶后，继续发酵30d，终止发酵，掏瓶，收集药性菌 质。
[0058] (6)药性菌质后处理：收集的药性菌质及时于50°C温度下干燥。
[0059] 实施例6
[0060] (1)斜面培养基配制：土豆100g削皮、切片，麦麸25g加适量自来水煎煮30min，纱 布滤过，滤液加7. 5g的琼脂，7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，补加自来水至 500mL，121°C 高压灭菌 30min ;
[0061] (2)液体培养基配制：土豆100g削皮、切片，麦麸25g加适量自来水煎煮30min，纱 布滤过，滤液加7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，补加自来水至500mL，121°C 高压灭菌30min ;
[0062] (3)发酵菌种的准备：桦褐孔菌接种到斜面培养基上，28°C培养5-7d，此时菌丝生 长密集，用接种针挑取Icm2的菌块接种到装有液体培养基的培养瓶中，放摇床中培养，摇床 转速130r/min，28°C培养15d，使之产生大量大小均匀、如"珍珠状"的菌球，得菌球液。
[0063] (4)发酵基质的准备：将六味地黄丸药渣干燥处理后，粉碎至绿豆般颗粒，每瓶装 200g于固体发酵瓶内，加水制成含水量50% -65%的发酵基质，盖瓶塞，装瓶并121°C高压 灭菌Ih备用；
[0064] (5)双向固体发酵：无菌操作，每个固体发酵瓶内接种菌球液IOmL左右，将发酵瓶 置于26°C -28Γ发酵室培养，待菌丝长满瓶后，继续发酵30d，终止发酵，掏瓶，收集药性菌 质。
[0065] (6)药性菌质后处理：收集的药性菌质及时于50°C温度下干燥。
[0066] 药理学实验
[0067] -、药性菌质活性部位的提取和含量测定：
[0068](一）药性菌质活性部位的提取：
[0069] 醇提物的萃取分离：取药性菌质粗粉1kg，按1:12 (m/v)的比例，加入80%乙醇回 流提取（lh/次，提取3次）。将提取后的药渣晾干留用，提取液合并后减压回收溶剂，得乙 醇浸膏132. lg。将乙醇浸膏混悬于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别减压回 收溶剂，真空干燥得石油醚提取物I. 2g，乙酸乙酯提取物21. 6g，正丁醇提取物39. 3g，水层 提取物53. 7g。
[0070] 水提醇沉提取粗多糖：醇提后的药渣按1:10 (m/v)的比例加蒸馏水回流提取（lh/ 次，提取3次），合并提取液减压回收溶剂至适量，加乙醇至最终浓度75 %，4°C静置24h，弃 上清，将所得沉淀真空干燥，得粗多糖，苯酚-硫酸法测定多糖含量。
[0071] (二）药性菌质不同溶剂提取部位的总多酚含量测定：
[0072] 1、标准曲线制作：
[0073] 精密称取没食子酸标准品约lmg，溶解并定容至IOmL容量瓶得标准品溶液。精密 吸取0,0. 25,0. 5,0. 75,1. 00,1. 25,1. 50mL的标准品溶液于25mL试管中，分别加3mL的福 林酸，摇勾，静置30s，各加12%的Na2CO3溶液6. OmL，蒸馏水定容至25mL，25°C避光静置2h， 以OmL的样品作空白760nm测OD值。以没食子酸标准品含量（μ g)为横坐标，吸光度为纵 坐标，绘制标准曲线并求出其回归方程：y = 〇. 〇〇45x+0. 0202(r = 0. 9995)。
[0074] 2、含量测定：
[0075] 取样品1.0 mL，采取以上制作标准曲线的方法，测定各组分中总多酚的含量，以没 食子酸计。通过计算得到乙酸乙酯和正丁醇组分所含多酚含量分别为78. 84mg/g、53. 96mg/ g ;水层提取物和粗多糖多酚含量分别为5. 51mg/g、15. 29mg/g，明显低于乙酸乙酯和正丁 醇部位。
[0076](三）药性菌质不同溶剂提取部位的总三萜含量测定：
[0077] 1、标准曲线制作：
[0078] 精密称取白桦脂醇对照品，用无水乙醇溶解，配成质量浓度为160 μ g/mL的标准 溶液，精确吸取〇. l、〇. 2、0. 3、0. 4和0. 5mL分别置于5mL容量瓶中，在100°C水浴中蒸干，加 入0. 3mL新制的5%香草醛-冰乙酸溶液和0. 6mL高氯酸摇勾，70°C水浴保温15min，再用 冰水冷却并放至室温，加入冰乙酸容至5mL，摇勾，以无水乙醇作空白对照，在550nm处测吸 光值以白桦脂醇质量（μ g)为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线并求出其回归方程：