y = 0. 103x+0. 0248 (r = 0. 9985) 〇
[0079] 2、含量测定：
[0080] 取样品lmg/mL的样品0. 5mL，按制作标准曲线的方法进项样品含量测定，通过计 算得乙酸乙酯，正丁醇，粗多糖，水层提取物的总三萜含量分别为：34.40mg/g，26.44mg/g， 3. 69mg/g，4. 08mg/g，可以看出：乙酸乙酯和正丁醇的三萜类含量远高于粗多糖和水层提取 物。
[0081] 二、药性菌质不同溶剂提取部位的抗氧化作用：
[0082] I、DPPH自由基清除活性测定：
[0083] 于试管中加入140 μ mol/LDPPH乙醇溶液2mL，再加入ImL测试样品，混合并充分振 荡。室温下黑暗处静置30min，于517nm处测定吸光值。对照组以蒸馏水代替样品液，样品 对照组以乙醇代替DPPH，其余均加入均相同，同条件下测定吸光值，以Vc为阳性对照，平行 二次实验。请参阅图1，清除率由如下方程计算：
[0085] 式中：A。-对照（蒸馏水）实验吸光度
[0086] Ax-多糖样品液的吸光度
[0087] Ax。-背景实验吸收（反应体系中无 DPPH)
[0088] 由图1可以明显看出，对DPPH自由基清除率由大到小依次为VO乙酸乙酯提取物 >正丁醇提取物〉水层提取物〉粗多糖〉石油醚提取物，乙酸乙酯和正丁醇部位对DPPH自 由基有较大的清除作用，水层提取物、粗多糖清除作用较弱，石油醚层的清除率基本为0。
[0089] 2、羟基自由基清除活性测定：
[0090] 反应体系（4mL)包括：lmL样品，7mmol/L的FeSO4溶液lmL，ImL水杨酸乙醇溶液 (7mmol/L)，0. 3mLH202(0. 012% )，H2O2最后加入以启动整个反应。反应体系在37°C条件下 温育30min，然后在3000r/s条件下离心10min。最后在510nm处检测吸光度，以Vc作为阳 性对照。请参阅图2,清除率由下方程计算： CN 105176844 A 说明书 7/12 页
[0092] 式中：A。-对照（蒸馏水）实验吸光度
[0093] Ax-多糖样品液的吸光度
[0094] Ax。-背景实验吸收（反应体系中无 H2O2)
[0095] 由图2可以明显看出，对OH自由基清除率由大到小依次为VO乙酸乙酯提取物〉 正丁醇提取物〉水层提取物~粗多糖〉石油醚提取物，乙酸乙酯和正丁醇部位对OH自由基 有较大的清除作用，水层提取物、粗多糖清除作用较弱，石油醚层的清除率基本为〇。
[0096] 3、FRAP法测定样品的抗氧化能力：
[0097] FRAP标准曲线制作：按50 μ L间隔量从0~400 μ L加入I. 5mmol/LFeS04溶液， 不足400 μ L的蒸馏水补足，再加入300mmol/L、PH3. 6的醋酸盐缓冲液4 μ L，lOmmol/L的 TPTZ溶液400 μ L，摇匀后37°C反应lOmin，以400 μ L蒸馏水代替I. 5mmol/L的FeSO4溶液 作为空白，于593nm测吸光度。吸光度值（A)为横坐标，Fe2+浓度（μπι〇1/υ为纵坐标，得 到FRAP标准曲线并求出其回归方程：
[0098] FRAP 值=C (Fe2+) ( μ mol/L) = aA+b (公式 3)，
[0099] y = 1446. 2χ-49. 419 (r = 0. 9982)(公式 4)。
[0100] 采用FRAP法测定样品的抗氧化能力，分别取0. 4mL浓度分别为500,400, 300, 200， 100 μ g/mL的样品溶液与3. OmL的FRAP工作液（0. 3mol/L、PH3. 6的乙酸钠缓冲液，IOmmol/ L的TPTZ和20mmol/L的三氯化铁以体积比10:1:1混合）混勾，静置10min，于593nm处测 定OD值，以蒸馏水替换FeCl3溶液作空白，同法操作。以Vc作阳性对照，实验平行3次。请 参阅图3,吸光值代入FRAP标线求出对应的FRAP值。
[0101] 由图3可知乙酸乙酯和正丁醇组分的抗氧化能力（FRAP值）的整体趋势明 显高于水层提取物和粗多糖，通过计算，乙酸乙酯组分的总抗氧化能力，即FRAP值为 (1. 82±0· 03)mmol/L(FeS04 ·7Η202相当量）；正丁醇为（0· 8375±0· 04)mmol/L(FeS04 ·7Η202相当量），粗多糖和水层提取物分别为（〇. 176±0. 02)mmol/L (FeSO4 · 7Η202相当量）、 (0· 199±0.04)mmol/L(FeSO4 · 7H202相当量），石油醚的为 0。
[0102] 实验结果表明本发明获得的药性菌质有较好的抗氧化作用，3个抗氧化实验中均 显示乙酸乙酯提取部位与正丁醇提取部位的的抗氧化活性明显高于粗多糖和水层提取物， 可能与乙酸乙酯、正丁醇部位的多酚及三萜类含量较高有关。
[0103] 三、药性菌质不同溶剂提取部位的降糖作用：
[0104] 1、药性菌质不同溶剂提取部位的α -淀粉酶抑制活性测定：
[0105] 请参阅图4,加样体系按下表进行，阿卡波糖做阳性对照；
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[0107] 由图4可知，粗多糖对α -淀粉酶抑制率与阳性对照阿卡波糖相比，差异显著，但 是要比乙酸乙酯提取部位、正丁醇提取部位、水层提取物、石油醚提取部位的抑制率高，且 差异有统计学意义（Ρ〈〇. 01)。
[0108] 2、药性菌质不同溶剂提取部位的α -葡萄糖苷酶抑制活性测定：
[0109] 试样管取 0· 2mL 质量浓度分别为 2. 0、L 0、0· 5、(λ 25、0· 125 和(λ 0625mg/mL 的试 样溶液（用pH6. 8、0. 2mol/L磷酸盐缓冲液配制）加至25mL试管中，分别加入0. 2mL比酶 活为3. 75U/mL的α -葡萄糖苷酶溶液及时混勾，再加入〇. 2mL浓度为6mmol/L的P-硝基 苯-α -吡喃葡萄糖苷溶液（磷酸盐缓冲液配制）混匀。对照管用0. 2mL磷酸盐缓冲液代 替试样溶液，本底管用〇. 2mL磷酸盐缓冲液代替P-硝基苯-α -吡喃葡萄糖苷溶液。37°C 恒温水浴30min，再加入6mLNa2C03终止反应，400nm处测吸光值，以阿卡波糖作阳性对照，请 参阅图5,得：
[0110] α -葡萄糖苷酶抑制率=[1 - (A试样一A本底）以对照]X 100% (公式5)。
[0111] 由图5可知，粗多糖对α-葡萄糖苷酶抑制率与阳性对照阿卡波糖相比，差异显 著，但是要比乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水层提取物、石油醚部位的抑制率高，且差异有统 计学意义（Ρ〈〇. 01)。
[0112] 实验结果表明本发明获得的药性菌质有较好的降糖作用。药性菌质不同溶剂提取 部位的降糖作用比较，粗多糖优于正丁醇部位、乙酸乙酯部位、水层提取物、和石油醚部位。
[0113] 四、药性菌质的免疫调节作用：
[0114] 1、实验材料和方法：
[0115] 由一、（药性菌质活性部位的提取和含量测定）（一）（药性菌质活性部位的提取 方法）获得的药性菌质粗多糖（JZPC)。
[0116] 药性菌质粗多糖纯化组分的制备：
[0117] Sevag法脱除蛋白质5%的多糖溶液与Sevag试剂等体积混合，振摇30min，4000r/ min离心5min，弃去变性蛋白层，上层水液同法操作，直到变性蛋白层消失。考马斯亮蓝法 测定蛋白质含量。
[0118] 透析去除小分子物质5 %脱蛋白的多糖溶液先自来水流水透析2天，再去离子水 透析1天，每3小时换次水。透析完后浓缩至适当体积，真空干燥得精制多糖，命名为JZPJ。
[0119] DEAE-S印haroseCL_6B柱层析分级纯化（0· 5%，W/V)菌质精制多糖上柱分离，依 次用去离子水、〇· lmol/L、0. 3mol/L、0. 5mol/L、0. 7mol/L、0. 9mol/L、l. 5mol/LNaCl 溶液洗 脱，体积流速I. 〇ml/min，每瓶5ml，苯酚-硫酸法跟踪检测。以瓶号数为横坐标，吸光值为 纵坐标绘制洗脱曲线，依洗脱曲线合并相同组分，再浓缩，透析后真空干燥，即得多糖纯化 组分 JZP1、JZP2、JZP3。
[0120] 小鼠脾淋巴细胞悬液的制备：小鼠处死后无菌操作，取脾脏制备细胞悬液，台盼蓝 染色并计数，活细胞数大于95 %，调整细胞浓度至4 X IO6Ail。
[0121] 小鼠脾淋巴细胞增殖实验（MTT法）：96孔板中每孔加入上述细胞悬液100 μ L ;试 样组每孔加入受试物使其终浓度为20、100、500、1000 μ g/mL ;空白对照组加入RPMI1640培 养液；ConA组每孔加入刀豆蛋白，终浓度为5 μ g/mL ;LPS组每孔加入LPS，终浓度10 μ g/ mL ;各组以RPMI1640培养液补足至20