Ii型大麻素受体激动剂在制备治疗新生儿脑出血药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及新生儿脑出血药物领域，具体而言，涉及II型大麻素受体激动剂在制 备治疗新生儿脑出血后促进神经再生、神经前体细胞分化、神经干细胞增殖以及降低脑积 水药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 早产儿生发基质-脑室内出血(GM-IVH)是新生儿颅内出血最常见的类型，主要与 早产儿存在胚胎生发层基质有关，临床上往往缺乏明显或特异的神经系统症状和体征，其 早期诊断和确诊有赖于影像学检查。GM - IVH可引起脑室周围出血性梗死、出血后脑积水、 脑白质软化、小脑出血性损伤等并发症，是导致新生儿死亡和存活者预后不良的主要原因。
[0003] 现有的治疗手段一般采用手术的方式进行治疗，治疗费用昂贵，并且容易造成其 他组织的破坏;还未见有效的改善其并发症的治疗药物。
[0004] 有鉴于此，特提出本发明。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供II型大麻素受体激动剂在制备治疗新生儿脑出血后促进 神经再生、神经前体细胞分化、神经干细胞增殖以及降低脑积水药物中的应用。
[0006] 为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
[0007] II型大麻素受体激动剂在制备治疗新生儿脑出血药物中的应用。
[0008] 本发明通过在体实验发现，II型大麻素受体激动剂在新生儿脑出血后可促进小胶 质细胞的静止态，大量分泌脑源性神经营养因子(brain-derived nervous factor，BDNF)， 促进室管膜下区及海马齿状回神经干细胞分化、增殖，同时保持小胶质细胞大量突起的存 在，这些突起与神经元以及神经纤维的直接作用参与神经网络的重新整合以及损伤后修 复。
[0009] 本发明细胞实验表明：JWH133具有促进神经干细胞(NSCs)球细胞球向星型胶质细 胞、神经元前体细胞等方向分化的作用。
[0010] VII型胶原酶(0.3U)诱导出生后7天(P7)Sprague-Dawley(S_D)大鼠GMH模型作为 研究载体。腹腔注射JWH133可显著增加海马齿状回区tujl (神经元前体细胞标志物）的表 达，且不影响幼鼠血压，体温以及血常规等，安全无副作用。以JWH133为活性成分可制备成 治疗出血性脑卒中的药物。
[0011] 进一步地，II型大麻素受体激动剂在制备治疗新生儿脑出血后促进神经再生、神 经前体细胞分化以及神经干细胞增殖药物中的应用。
[0012] 另外，将实验发现，腹腔注射JWH133可显著低GMH诱导的脑积水。
[0013] 进一步地，II型大麻素受体激动剂在制备治疗新生儿脑出血后脑积水药物中的应 用。
[0014] 可见，II型大麻素受体激动剂具有促进新生儿神经再生、神经前体细胞分化以及 神经干细胞增殖的作用，另外还能显著降低GMH诱导的脑积水。
[0015] 具体地，II型大麻素受体激动剂应用于治疗新生儿脑出血，特别是由新生儿脑出 血引起的脑积水和神经再生、分化以及神经干细胞的增殖功能受损的症状。
[0016] 新生儿脑出血的治疗方法，包括给予受试者有效量的II型大麻素受体激动剂。
[0017] 给药方式可以为口服、静脉注射或者是透皮渗透方式，施加于需要治疗的患者，具 体可根据病人的病情、年龄等，由医师决定。
[0018] 米诺环素是一种广谱抗菌的四环素类抗生素，能与tRNA结合，达到抑菌的效果。米 诺环素比同类药物具有更广的抗菌谱，具有抑菌活性。
[0019] 经试验发现，II型大麻素受体激动剂与米诺环素配合使用，米诺环素能显著增加 II型大麻素受体激动剂的血脑屏障的透过率，并增加抗炎作用治疗效果。优选地，所述药物 还包括米诺环素。
[0020] 优选地，在所述药物中，II型大麻素受体激动剂与米诺环素的重量比例为2-3:45。
[0021] 具体地，II型大麻素受体激动剂和米诺环素联合应用于治疗新生儿脑出血，特别 是由新生儿脑出血引起的脑积水和神经再生、分化以及神经干细胞的增殖功能受损的症 状。
[0022] 新生儿脑出血的治疗方法，包括给予受试者有效量的II型大麻素受体激动剂和米 诺环素。
[0023] 给药方式可以为口服、静脉注射或者是透皮渗透方式，施加于需要治疗的患者，具 体可根据病人的病情、年龄等，由医师决定。
[0024] 根据临床的要求，药物可制成各种剂型。进一步地，所述药物还包括药学上可接受 的辅料。
[0025] 进一步地，所述药学可接受的辅料包括稀释剂、赋形剂、崩解剂、填充剂、粘合剂、 润滑剂、矫味剂、表面活化剂、稳定剂中的任一种或多种组合。
[0026] 进一步地，所述赋形剂包括甘露醇、乳糖、淀粉、右旋糖酐、微晶纤维素中的任一种 或多种组合。
[0027] 进一步地，所述崩解剂包括聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟 丙甲基纤维素中的任一种或多种组合。
[0028] 进一步地，所述润滑剂包括滑石粉、硬脂酸镁中的任一种或两种组合。
[0029] 进一步地，所述药物的剂型包括注射剂、针剂、片剂、冲剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂中 的任一种。
[0030] 本发明中涉及的稀释剂如水等;填充剂如淀粉、蔗糖等;粘合剂，如淀粉浆、糊精、 糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、 羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等;表面 活化剂如阳离子型、阴离子型、两性离子型和非离子型;稳定剂如硬脂酸镉、硬脂酸锌、二巯 基乙酸异辛酯二正辛基锡、二月桂酸二正丁基锡等等。
[0031] 本发明提供的药物的剂型按照本领域的常规方法制备即可。如为了将本发明的有 效成分制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩 解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖 醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等;湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等;粘合剂可 以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维 素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、 聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷 酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、 十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石 蜡、聚乙二醇等。
[0032] 还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双 层片和多层片。
[0033] 如：为了将给药单元制成胶囊剂，可以将本发明的有效成分与稀释剂、助流剂混 合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制 成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、黏合 剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。
[0034] 又如:为将本发明的有效成分制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们 的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、PH调节剂、渗透压调节剂。增溶 剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β_环糊精等;PH调节剂可以是磷酸盐、醋酸 盐、盐酸、氢氧化钠等;渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如 制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。
[0035] 此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加 剂。
[0036] 优选地，所述药物的剂型为注射剂。有效活性成分可以制成水溶液或粉剂等适用 于注射用的药物形式，方便快捷，易于使用。
[0037] 注射剂在使用时可进行静脉滴注或肌肉注射，一般1天1次，7天为一个疗程。
[0038] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0039] (1)本发明通过在体实验发现，II型大麻素受体激动剂具有促进新生儿神经再生、 神经前体细胞分化以及神经干细胞增殖的作用，另外还能显著降低GMH诱导的脑积水。
[0040] (2)本发明还发现，II型大麻素受体激动剂与米诺环素配合使用，米诺环素能显著 增加II型大麻素受体激动剂的血脑屏障的透过率，增加治疗效果。
[0041 ] (3)本发明还提供了药物的各种剂型，以便于应用。
【附图说明】
[0042] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0043] 图1为本发明实施例1中不同组别SD大鼠头颜MRI检测图；
[0044] 图2为本发明实施例1中不同组别免疫组织化学染色结果检测图、海马区细胞数目 的柱形图以及标志物蛋白MAP-2的表达结果图；
[0045] 图3为本发明实施例2中不同组别免疫组化荧光双标染色图；
[0046] 图4为本发明实施例3中不同组别用药3天后幼鼠脑水含量变化柱形图；
[0047]图5为本发明实施例4中JWH133与米诺环素配合使用7天后神经元数目的显微图和 柱形图。
【具体实施方式】
[0048] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体 条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为 可以通过市售获得的常规产品。
[0049] 实施例1
[0050] II型大麻素受体选择性激动剂(JWH133)对胶原酶诱导新生鼠脑出血的影响
[00511 VII型胶原酶诱导新生7天(P7)SD大鼠脑出血伴脑室出血(GMH/IVH)模型。使用立 体定位仪微量栗入胶原酶方法，进针坐标为嘴侧1.8mm，右侧1.5mm，针尖突破硬脑膜后进针 2.8mm。设置假手术组（即未经手术的正常SD大鼠）、生理盐水组(术后腹腔注射等量生理盐 水）、11!1133治疗组(术后腹腔注射11!1133水溶液1.51^/1^，2次/天，共7天），每组10只动物。 [0052] 28天后对SD大鼠7. OT头颜MRI检查，结果如图1所示。
[0053]从图1可以看出，JWH133腹腔注射治疗可显著降低GMH诱导的脑积水。
[0054]再另设以上组别，每组6只动物，在用药最后一天，即第7天经腹腔注射Brdu(溴脱 氧尿苷，100mg/kg，处死前2小时1次，共3次），再经心脏关注固定、取脑切片，进行免疫组织 化学染色检查，结果如图2所示。
[0055] 从图2中可以看出，JWH133治疗后大鼠海马区细胞增殖显著增加（图2A、2B)，且较 生理盐水组大鼠有更多的海马S0X2以及tuj