固体培养基包括以下质量份的组分:葡萄糖20质量份、胰蛋白胨20质量份、酵母粉10质量份、琼脂0.75质量份、水I 000质量份，控制所述乳酸菌增殖培养基的pH值为7.0，然后121 °C灭菌20 min制备所得。
[0038]在本实施例中，所述基础发酵培养基包括以下质量浓度的组分:酵母粉3g/L、蛋白胨5g/L，牛肉膏2g/L、MnS040.005g/L、NaCl 2g/L,K2HPO4 3g/L,MgSO4 0.02g/L;培养温度为40°C，初始pH值为7.0，转速210r/min，发酵时间48h ；所述种子液的接种量为6%，在10ml的基础发酵培养基中加入6ml的种子液。此基础发酵培养基的生物量0D600达到19.23，芽孢形成率为75 %，有效提升了中药材的利用率。
[0039]实施例5
本发明公开了一种中药微生态制剂，以中药超微粉作为发酵培养基的主要成分，以凝结芽孢杆菌作为生产菌，采用发酵工艺制备所得，所述中药超微粉包括粒径I?60μπι的黄芪、女贞子和淫羊藿组合物。其具体制备方法包括以下步骤:
S1、分离纯化，将黄芪、女贞子和淫羊藿粉碎得到为粒径I?60μπι的中药超微粉，中药超微粉中黄芪45份，女贞子35份，淫羊藿25份，把中药超微粉加入到无菌试管中，加入蒸馏水进行灭菌，震荡摇匀，静置后取上层清液体加入到分离培养基中，37 °(:静置培养，然后从80°C水浴5 min后用生理盐水稀释到10—1?10—8分别转接到乳酸菌增殖培养固体平板上，37°C培养，待菌落长出；
52、接斜面活化，将分离的菌种转接到种子斜面的固体培养基，40°C培养24 h,备用；
53、种子液的制备，取S2步活化后的菌种，接入装有乳酸菌增殖培养基的容器中，控制温度为40 °C, 180 r/min搅拌培养18 h，得到种子液；
54、发酵培养，将S3步制的种子液，接入盛有发酵培养基的容器中，，控制温度、空气流量、搅拌转速及罐压培养即可得到中药微生态制剂发酵液；
55、成分提取，采用超滤、纳滤分离纯化S4步所得的发酵液，得到提取浓缩液；
56、造粒成型，在S5步所得的浓缩液中加入活性添加物，喷雾干燥法，直接制粒，即可得到最终的中药微生态制剂。
[0040]在本实施例中，所述分离培养基包括以下质量份的组分:胰蛋白胨10质量份、牛肉膏10质量份、梓檬酸二钱2质量份、乙酸钠5质量份、酵母粉5质量份、葡萄糖5质量份、磷酸二氢钾2质量份、吐温80 I质量份、碳酸钙20质量份、硫酸镁0.58质量份、硫酸锰0.25质量份、α-甲基葡萄糖苷10质量份、山梨酸钾I质量份、水1000质量份，控制所述分离培养基的pH值6.2?6.5然后121 °C灭菌20 min制备所得。
[0041]在本实施例中，所述乳酸菌增殖培养基包括以下质量份的组分:葡萄糖20质量份、胰蛋白胨20质量份、酵母粉10质量份、水1000质量份，控制所述乳酸菌增殖培养基的pH值为7.0，然后121 °C灭菌20 min制备所得。
[0042]在本实施例中，所述固体培养基包括以下质量份的组分:葡萄糖20质量份、胰蛋白胨20质量份、酵母粉10质量份、琼脂0.75质量份、水I 000质量份，控制所述乳酸菌增殖培养基的pH值为7.0，然后121 °C灭菌20 min制备所得。
[0043]在本实施例中，所述基础发酵培养基包括以下质量浓度的组分:麸皮4g/L、豆柏粉1.5g/L，NaCl 0.5g/L,K2HP044g/L,MnSO4 30.8mg/L；培养温度为37°C，初始pH值为7.0，转速180r/min，发酵时间56h;所述种子液的接种量为4%，在10ml的基础发酵培养基中加入4ml的种子液。此基础发酵培养基的生物量0D600达到19.68，芽孢形成率为80 %，有效提升了中药材的利用率。
[0044]以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制;凡本行业的普通技术人员均可按说明书所示和以上所述而顺畅地实施本发明；但是，凡熟悉本专业的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，可利用以上所揭示的技术内容而作出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变等，均仍属于本发明的技术方案的保护范围之内。
【主权项】
1.一种中药微生态制剂，其特征在于:以中药超微粉作为发酵培养基的主要成分，以凝结芽孢杆菌作为生产菌，采用发酵工艺制备所得，所述中药超微粉包括粒径I?60μπι的黄芪、女贞子和淫羊藿组合物。2.根据权利要求1所述中药微生态制剂，其特征在于:中药超微粉中按质量份计黄芪20?60份，女贞子20?40份，淫羊藿20?40份。3.—种中药微生态制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤: S1、分离纯化，将黄芪、女贞子和淫羊藿粉碎得到为粒径I?60μπι的中药超微粉，把中药超微粉加入到无菌试管中，加入蒸馏水进行灭菌，震荡摇匀，静置后取上层清液体加入到分离培养基中，接入凝结芽孢杆菌35?37 °(:静置培养，然后在60?80 °C水浴5 min后用生理盐水稀释到10—1?10—8分别转接到乳酸菌增殖培养固体平板上，37 °C培养，待菌落长出； S2、接斜面活化，将分离的单菌落转接到种子斜面的固体培养基，30?40°C培养12-.36 h，备用； S3、种子液的制备，取S2步活化后的菌种，接入装有乳酸菌增殖培养基的容器中，控制温度为40 °C, 160?200 r/min搅拌培养16?24h，得到种子液；S4、发酵培养，将S3步制的种子液，接入盛有发酵培养基的容器中，，控制温度、空气流量、搅拌转速及罐压培养即可得到中药微生态制剂发酵液； S5、成分提取，采用超滤、纳滤分离纯化S4步所得的发酵液，得到提取浓缩液； S6、造粒成型，在S5步所得的浓缩液中加入活性添加物，喷雾干燥法，直接制粒，即可得到最终的中药微生态制剂。4.根据权利要求3所述的中药微生态制剂的制备方法，其特征在于:所述分离培养基包括以下质量份的组分:胰蛋白胨10质量份、牛肉膏10质量份、梓檬酸二钱2质量份、乙酸钠5质量份、酵母粉5质量份、葡萄糖5质量份、磷酸二氢钾2质量份、吐温80 I质量份、碳酸I丐20质量份、硫酸镁0.58质量份、硫酸猛0.25质量份、水1000质量份，控制所述分离培养基的pH值6.2?6.5然后121 °C灭菌20 min制备所得。5.根据权利要求4所述的中药微生态制剂及其制备方法，其特征在于:所述分离培养基还包括以下质量份的组分:α-甲基葡萄糖苷10质量份、山梨酸钾I质量份。6.—种权利要求4所述中药微生态制剂的制备方法，其特征在于:所述乳酸菌增殖培养基包括以下质量份的组分:葡萄糖20质量份、胰蛋白胨20质量份、酵母粉10质量份、水.1000质量份，控制所述乳酸菌增殖培养基的pH值为7.0，然后121 °C灭菌20 min制备所得。7.根据权利要求6所述中药微生态制剂的制备方法，其特征在于:所述固体培养基包括以下质量份的组分:葡萄糖20质量份、胰蛋白胨20质量份、酵母粉10质量份、琼脂0.75质量份、水I 000质量份，控制所述乳酸菌增殖培养基的pH值为7.0，然后121 °C灭菌20 min制备所得。8.根据权利要求7所述中药微生态制剂的制备方法，其特征在于:所述基础发酵培养基包括以下质量浓度的组分:蔗糖10 g/L、蛋白胨10 g/ L、磷酸氢二钠2 g/、磷酸二氢钠2g/ L，所述基础发酵培养基的pH为7.0;所述种子液的接种量为2%，在10ml的基础发酵培养基中加入2m I的种子液。9.根据权利要求7所述中药微生态制剂的制备方法，其特征在于:所述基础发酵培养基包括以下质量浓度的组分:酵母粉3g/L、蛋白胨5g/L，牛肉膏2g/L、MnS04 0.005g/L、NaCl.2g/L,K2HPO4 3g/L,MgSO4 0.02g/L;培养温度为40°C，初始pH值为7.0，转速 180?210r/min，发酵时间36?48h ；所述种子液的接种量为6%，在10ml的基础发酵培养基中加入6ml的种子液。10.根据权利要求7所述中药微生态制剂的制备方法，其特征在于:所述基础发酵培养基包括以下质量浓度的组分:麸皮4g/L、豆柏粉1.5g/L，NaCl 0.5g/L,K2HPO4 4g/L,MnSO4.30.8mg/L;培养温度为37 °C，初始pH值为7.0，转速180r/min，发酵时间56h;所述种子液的接种量为4%，在I OOml的基础发酵培养基中加入4ml的种子液。
【专利摘要】本发明公开了一种中药微生态制剂及其制备方法，所述中药微生态制剂以中药超微粉作为发酵培养基的主要成分，以凝结芽孢杆菌作为生产菌，采用发酵工艺制备所得，所述中药超微粉包括粒径1～60μm的黄芪、女贞子和淫羊藿组合物，所述中药超微粉中黄芪20～60份，女贞子20～40份，淫羊藿20～40份；其制备方法包括菌种分离纯化、接斜面活化、种子液的制备、发酵培养、成分提取、造粒成型等步骤。本发明的中药微生态制剂及其制备方法具有药效好、提取效率高和药材利用率高的特点。
【IPC分类】A61P1/00, A61K35/742, A61K36/638
【公开号】CN105641059
【申请号】
【发明人】蒋顺进, 刘宗新, 方文棋
【申请人】广东容大生物股份有限公司
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年2月3日