表 45]
[0387]
[0388J [表 46]
[0389]
[0390] [表 47]
[0391] Lu〇7Z」
[0393]
[0394] [表 49]
[0395]
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[表 50]
[0397]
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[0399]
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[0400] [表 52]
[0401]
[0402] [表 53]
[0403]
[0404] [表 54]
[0405]
[0406] [表 55]
[0407]
[0408] [表 56]
[0409]
[0410] 实施例57 4-{[N-(4-羧基-3,3-二甲基丁基)-N-[2-(3-氯苯基)-2-[4-(2_苯基乙 基)苄氧基]乙基]氨基]甲基}苯甲酸
[0411] 将参考例115(206mg)溶解于THF(2.0mL)，加入乙酸（57yL)，在室温下搅拌10分钟。 接着加入三乙酰氧基硼氢化钠(254mg)后，在相同温度下搅拌19小时。加入饱和碳酸氢钠水 溶液搅拌后，用乙酸乙酯萃取。减压下馏去溶剂，用硅胶柱色谱（10~40%乙酸乙酯/己烷） 精制残渣，得到无色油状物质的产物(292mg)。将产物(285mg)溶解于甲醇-THF混合溶液(3: 1，4. OmL)，加入2.5mo 1 /L氢氧化钠水溶液（0.9mL)，在60 °C下搅拌3小时。冷却至室温，用 lmol/L盐酸调节至pH4后，用氯仿萃取。减压下馏去溶剂，用硅胶柱色谱(5%~15%甲醇/氯 仿)精制残渣，得到白色无定形的标题化合物(199mg)。
[0412] 1H-NMR(DMS0-D6)5：7.80(2H,dJ = 8.1Hz),7.41-7.14(15H,m),4.55(lH,ddJ = 6·5,5·3Ηζ)，4.34(lH，d，J= 11.7Hz)，4· 27(lH，d，J= 11.7Hz)，3.70(lH，d，J= 14.5Hz)， 3.63(lH，d，J=14.5Hz)，2.85(4H，s)，2.78(lH，dd，J=13.3,6.5Hz)，2.56(lH，dd，J=13.3， 5.3Hz)，2.48-2.42(2H，m)，2.01(2H，s)，1.45-1.38(2H，m)，0.85(6H，s).ESI-MS Found:m/z 629(M+H)+
[0413]将使用对应的参考例的化合物用与实施例57相同的方法制造的实施例58和实施 例59的化合物示于表57。
[0414][表 57]
[0415]
[0416] 实施例60 4-{[N-(4-羧丁基)-N-[2-[3-(2-苯基乙基）苄氧基]-2-苯基乙基]氨 基]甲基}苯甲酸
[0417] 将参考例105(230mg)溶解于乙腈（6.0mL)，加入碳酸钾（199mg)、5-溴戊酸甲酯 (167μυ、碘化钠(22mg)，加热回流下，搅拌23小时。冷却至室温，减压下馏去溶剂后，用水将 残渣悬浮，用乙酸乙酯萃取。用无水硫酸钠干燥后，减压下馏去溶剂。用硅胶柱色谱（10~ 50%乙酸乙酯/己烷)精制残渣，得到无色油状物质的产物（258mg)。将产物（250mg)溶解于 甲醇-THF混合溶液(3:1，5. OmL)，加入lmol/L氢氧化钠水溶液(2.5mL)，在室温下搅拌18小 时。减压下馏去溶剂，用lmol/L盐酸将残渣调节至pH4后，用甲醇-氯仿混合溶液（1:9)萃取。 用无水硫酸钠干燥后，减压下馏去溶剂，用硅胶柱色谱(5%~15%甲醇/氯仿)精制残渣，得 到白色无定形的标题化合物(208mg)。
[0418] 1H-NMR(DMS0-D6)5：7.80(2H,dJ = 8.1Hz),7.35-7.08(16H,m),4.55(lH,ddJ = 7· 1，5·5Ηζ)，4.32(lH，d，J=11.9Hz)，4.26(lH，d，J=11.9Hz)，3.73(lH，d，J=14.6Hz)， 3.65(lH，d，J= 14.6Hz)，2.83(4H，s)，2.80(lH，dd，J= 13.0,7.1Hz)，2.57(lH，dd，J= 13.0， 5·5Hz)，2·46-2·40(2H，m)，2·10-2·06(2H，m)，1·40-1·34(4H，m).ESI-MS Found:m/z 566(M +H) +
[0419] 将使用对应的参考例的化合物用与实施例60相同的方法制造的实施例61和实施 例62的化合物不于表58和表59。
[0420] [表 58]
[0421]
[0424] 对本发明化合物，通过下述试验例来测试对sGC的活化作用。
[0425] [试验例1 ] sGC活化作用的最大化能力
[0426] 试验中使用人sGCa亚基和β亚基、小鼠环化核苷酸门控通道(CNGA2)稳定表达的中 国仓鼠卵巢细胞(CH0-K1细胞）。
[0427] 将人sGC和小鼠 CNGA2稳定表达的CH0-K1细胞在37°C下在加入了 10% (v/v)胎牛血 清(FBS)、青霉素（100U/mL)、链霉素（10(^8/111〇、6418(25(^8/1^)、博来霉素（25(^8/1^)的 F-12培养基中进行培养。细胞悬浮在培养液中，接种于96孔板后，在37 °C下培养24小时。用 分析缓冲液1 (140mmol/L氯化钠、5mmol/L氯化钾、0 · 5mmol/L氯化镁、0 · 01mmol/L氯化|丐、 1〇111111〇1凡葡萄糖、0.41]1111〇1凡硫酸镁、1〇1]1111〇1/1^4-(2-羟基乙基）哌嗪-1-基乙磺酸、1254 mol/L苯磺唑酮、pH7.4)清洗后，加入将作为荧光Ca2+指示剂的Fura2-AM以5ymol/L的浓度溶 解在分析缓冲液1中而成的指示剂溶液，在37 °C下培养60分钟。除去培养液，用分析缓冲液1 清洗后，加入试验化合物溶液，在室温下培养10分钟。在荧光测定装置(FlexStationll， Molecular Devices公司）中设置平板，以激发波长340nm和380nm、检测波长510nm，以由各 激发波长得到的荧光强度比的形式测定细胞内钙浓度。
[0428] 应予说明，如下制备试验化合物溶液，即，将各试验化合物以成为10mm〇l/L的方式 溶解于DMS0后，以试验浓度为ΙΟμ mol/L的方式用分析缓冲液2(140mmol/L氯化钠、5mmol/L 氯化钾、Ο · 5mmol/L氯化镁、lmmol/L氯化|丐、lOmmol/L葡萄糖、Ο · 4mmol/L硫酸镁、lOmmol/ L4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基乙磺酸、125ymol/L苯磺唑酮、100μ mol/L异丁基甲基黄嘌呤、10 μπιο 1 /L 1H-[ 1，2，4]-Τ?悉二唑[4，3-a]喹喔啉-1-酮（以下称为0DQ)，pH7 · 4)进行稀释而制 备。在进行不含0DQ时的评价时，从分析缓冲液2除去0DQ，实施相同的评价。对照溶液使用 DMS0稀释溶液代替试验化合物溶液。
[0429] 对于试验化合物的活性，由添加试验化合物溶液时的sGC活性相对于添加对照溶 液时的sGC活性的增加率（％ )表示，通过将添加试验化合物时的荧光强度比除以对照溶液 的荧光强度比，减去添加对照溶液时的sGC活性(100% )来计算。
[0430] 将试验结果示于表60。
[0431] [表 60]
[0432]
本试验体系中，如果sGC被活化，贝lj细胞内cGMP浓度上升，由于与其伴随的CNGA2的 开口而引起细胞内Ca2+浓度上升。因此，可以测定sGC活化作为细胞内Ca 2+浓度的变化。0DQ 是对血红素结合性的铁原子特异性的氧化剂，在存在0DQ的情况下血红素的铁原子被氧化， 因此不发生血红素依赖性的sGC的活化。因此，在不存在0DQ的情况下，能够评价包括血红素 依赖性活化的最大的sGC活化作用，在存在0DQ的情况下，能够评价血红素非依赖性的sGC活 化作用。应予说明，在存在0DQ的情况下和不存在0DQ的情况下，包括作为比较例的西那西呱 在内，任一试验化合物均在ΙΟμ mol/L以上的浓度时sGC活性显示最大值并为一定，因此将10 μ mol/L的活性值作为各试验化合物的sGC活性最大化能力(Emax)。
[0434] 如表60所示，可知本发明化合物都是在存在0DQ的情况下使sGC活性显著增加，血 红素非依赖性的直接性sGC活化剂。另外，可知本发明化合物与西那西呱相比，存在0DQ的情 况下、不存在0DQ的情况下的任一情况下Emax都大，与西那西呱相比具有优异的sGC活化作 用。
[0435] [试验例2]血管松弛作用评价
[0436] 通过下述试验例对本发明的代表性化合物测试血管松弛作用。试验中，在戊巴比 妥(30mg/kg)麻醉下将大鼠（雄性，SD)从心脏上部放血，摘出腹部大动脉。将腹部大动脉在 冰冷Krebs-Henseleit液(KH液）（118mmol/L氯化钠、4.7mmol/L氯化钾、1.2mmol/L硫酸镁、 1 · 2mmol/L磷酸二氢钾、25mmol/L碳酸氢钠、2.5mmol/L氯化|丐、10mmol/L葡萄糖，pH7.4)中 除去附着于血管周围的结缔组织。其后，制成长度2_的环状标本，固定于装满KH液的5mL器 官浴。KH液维持在37°C，通入95 %02和5 %⑶2混合气体。使标本在静息张力1 g下稳定1小时。 期间，更换2次KH液。标本的张力介由拾波器放大器记录于多通道记录仪。标 本稳定化后，用Ιμπιο?/L苯肾上腺素（Phe)引起收缩，进行各化合物的累积给药（0.001、 0.01、0.03、0.1、0.3、1、3、10、30、100、1000、1000011111〇1/1)。在进行含有000时的评价时，在 Phe给药10分钟前添加 ΙΟμ mol/L的0DQ，实施相同的评价。
[0437] EC5Q值采用Assay Explorer(Accelrys公司）利用4参数Logistic模型进行计算。应 予说明，试验化合物溶液是将各试验化合物以成为最终浓度的1000倍的方式溶解于DMS0而 得的。
[0438] 将试验结果示于表61。
[0439] [表 61]
[0440]
[0441 ] 如表61所示，本发明化合物的EC5Q比均低于西那西呱，可知与西那西呱相比，更是 血红素非依赖性的。
[0442] 产业上的可利用性
[0443] 本发明的4-氨甲基苯甲酸衍生物、其药学上可允许的盐或它们的溶剂合物具有血 红素非依赖性优异的sGC活化作用，因此作为可溶性鸟苷酸环化酶发挥作用的各种疾病，例 如心力衰竭、高血压症、肺动脉高压或缺血性心脏病等的治疗剂或预防剂是有用的。
【主权项】
1. 通式(I)表示的化合物、其药学上允许的盐或它们的溶剂合物，式中，Ar表示芳基或者含有氮原子、氧原子或硫原子的5-6元环的杂芳基； Y表不氨原子、Ci-Cs烷基、面代C1-C4烷基、氯基或面素原子； A表示可W取代有2个C1-C2烷基的C1-C3亚烷基链，该2个C1-C2烷基在C1-C3亚烷基链的同 一碳原子上取代，此外，2个C1-C2烷基可W-起形成含有C1-C3亚烷基链的1个碳原子的C3-C5 的饱和控环； X表不氨原子或面素原子； V表示氧原子或亚甲基链； R表示选自下式的基团，在此，Ri、R哺R3各自独立地表示氨原子、面素原子、可W具有取代基的Ci-Cs烷基、&-C6 烷氧基、C3-C6环烷基、C3-C6环烷氧基、面代C1-C4烷基、在芳香环上可W具有取代基的芳基、 在芳香环上可W具有取代基的芳氧基、在苯环上可W具有取代基的苄基、在苯环上可W具 有取代基的苯乙基、或在苯环上可W具有取代基的节氧基， W表示=CH-或氮原子， n表示1~3的整数，n为2W上时n个Ri可W彼此不同。2. 根据权利要求1所述的化合物、其药学上允许的盐或它们的溶剂合物，其中，Ar是碳 原子数6~10的单环式或多环式的芳香族控基、或者含有氮原子、氧原子或硫原子的5~6元 环的杂芳基； 可W对Ri、R2和R3表示的烷基、芳基、芳氧基、苄基、苯乙基或节氧基取代的基团是选自 面素原子、C广Cs烷基、C广Cs烷氧基、C3-C6环烷基、C3-C6环烷氧基、Cs-Cio芳基、Cs-Ci日芳氧基、 苄基、苯乙基和节氧基的基团。3. 根据权利要求1所述的化合物、其药学上允许的盐或它们的溶剂合物，其中，Ar是碳 原子数6~10的单环式或多环式的芳香族控基、或者含有氮原子、氧原子或硫原子的5~6元 环的杂芳基； Ri、R哺R3各自独立地为氨原子；面素原子;可W取代有Ci-Cs烷氧基、C3-C6环烷基或C3-Cs环烷氧基的Ci-6烷基;Ci-Cs烷氧基;C3-C6环烷基;C3-C6环烷氧基；面代C1-C4烷基;在芳香环 上可W取代有面素原子、Ci-Cs烷基或氯基的Cs-Cio芳基;在芳香环上可W取代有面素原子、 Ci-Cs烷基或氯基的Cs-Cio芳氧基；在苯环上可W取代有面素原子或面代C1-C4烷基的苄基； 在苯环上可W取代有面素原子或面代C1-C4烷基的苯乙基;在苯环上可W取代有面素原子或 面代Cl-C4烷基的节氧基。4. 根据权利要求1~3中任一项所述的化合物、其药学上允许的盐或它们的溶剂合物， 其中，A为-C出-、-(C出)2-、-(C出)3-或W下结构，各结构中左端表示与簇基的键合部位。5. -种药物，其中，含有权利要求1~4中任一项所述的化合物、其药学上允许的盐或它 们的溶剂合物。6. -种药物组合物，其中，含有权利要求1~4中任一项所述的化合物、其药学上允许的 盐或它们的溶剂合物、W及药学上允许的载体。7. 根据权利要求1~4中任一项所述的化合物、其药学上允许的盐或它们的溶剂合物， 用于可溶性鸟巧酸环化酶参与的疾病的预防或治疗。8. 用于制造预防或治疗可溶性鸟巧酸环化酶参与的疾病的药物的权利要求1~4中任 一项所述的化合物、其药学上允许的盐或它们的溶剂合物的应用。9. 可溶性鸟巧酸环化酶参与的疾病的预防或治疗方法，其特征在于，将权利要求1~4 中任一项所述的化合物、其药学上允许的盐或它们的溶剂合物的有效量进行给药。
【专利摘要】本发明提供一种含有通式(1)表示的化合物、其药学上允许的盐或它们的溶剂合物的药物。通式(1)(式中，Ar表示芳基或者含有氮原子、氧原子或硫原子的5-6元环的杂芳基；Y表示氢原子、C1-C6烷基等；A表示可以取代有2个C1-C2烷基的C1-C3亚烷基链；X表示氢原子或卤素原子；V表示氧原子或亚甲基链；R表示选自下式的基团)表示的化合物、其药学上允许的盐或它们的溶剂合物。
【IPC分类】A61K31/197, C07D333/56, C07C255/54, C07C229/46, C07C229/38, A61K31/426, A61K31/275, C07D333/16, A61P11/00, A61K31/381, A61P43/00, C07D333/20, C07D277/24, A61P9/12, C07C255/59, A61P9/10
【公开号】CN105658621
【申请号】
【发明人】上元和广, 佐藤佳伦, 冈田直树, 饭森绘美子, 阴山真将
【申请人】东亚荣养株式会社
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2014年10月14日