；
[0119] (3)基质液：将α -CCA溶于含0. 1% TFA的50% ACN溶液中，制成饱和溶液，离必， 取上清；
[0120] (4)仪器检测条件：反射检测方式；飞行管长3m ;氮激光器；波长337nm，加速电压 20KV;反射电压23KV。
[012。 妨操作步骤；分别取1 μ L上述纯化多肤（1)和似的样品，各自与1 μ L的饱和 基质上清液混合等体积混合，分别取1 μ L点在样品祀上，送入离子源中进行检测。
[0122] 结果，测得所得服Ρ90 α -1抗原表位肤（1)的分子量为1899. 1，服Ρ90 α -1抗原表 位肤（2)的分子量为2483. 5,与理论分子量1898. 9U2483. 39 -致，证明合成多肤即为目的 产物。
[0123] 2.通过多肤序列测定分别鉴定所得服Ρ90 α -1抗原表位肤（1)和（2)的序列。
[0124] (1)原理；多肤氨基酸序列分析的基本原理是Edman降解，是一个循环式的化学反 应过程。包括Η个主要的化学步骤；（1)偶联；异硫氯酸苯醋与蛋白质和多肤的N-端残基 反应，形成苯氨基硫甲醜（PTC)衍生物，即PTC-肤。（2)环化裂解；PTC-肤环化裂解。（3) 转化；喔哇岭丽苯氨（AT幻转化为苯异硫尿氨基酸（PTH-氨基酸）。留在溶液中的减少了 一个氨基酸残基的肤再重复进行上述反应过程，整个测序过程现在都是通过测序仪自动进 行。
[01巧](2)仪器；美国ABI公司491型蛋白质/多肤N-末端氨基酸序列分析仪
[0126] (3)试剂原料
[0127] 异硫氯酸苯醋PITC，可购自sigma公司
[012引正庚焼，可购自国药集团化学试剂有限公司
[0129] Η甲胺TM水溶液，可购自国药集团化学试剂有限公司
[0130] TFA( Η氣己酸，可购自sigma公司）
[0131] 己酸己醋，可购自国药集团化学试剂有限公司
[0132] 氯了焼，可购自sigma公司
[013引己腊，可购自国药集团化学试剂有限公司
[0134] (4)测定
[0135] 按仪器说明书进行。
[013引结果；经鉴定，所得服Ρ90α-1抗原表位肤（1)和似的序列分别为：
[0137] (1) Y-P-R-D-RA-D-P-R-P-G-S-P-S-E-A-S 和
[0138] (2)Y-R-G-I-D-E-D-D-P-T-A-D-D-T-S-A-A-V-T-E。
[0139] 该结果与目标合成肤段一致。
[0140] 实施例2 ;分别将实施例1所得的服P90 α -1抗原表位肤（1)和似与载体蛋白 连接W制备HSP90Q-1抗原（1)和（2)，利用所得抗原（1)和（2)分别免疫动物，从而利用 抗原（1)制备特异性的单克隆抗体和多克隆抗体，并且利用抗原（2)制备特异性的单克隆 抗体和多克隆抗体。
[0141] 1.抗原的制备；用抓Β 度is-diazotizedbenzidine dichloride)法将服Ρ90 α-1 肤段（1)和似分别与载体蛋白KLH(钥孔血藍蛋白）（得自sigma公司）连接制备成 HSP90 α -1抗原（1)和似。
[014引取服Ρ90 α -1 肤段（1)或似 10.0 mg，用 1ml 0. 1Μ PBS 缓冲液（ρΗ7. 4)溶解；KLH lOmg，用0. 2Μ测酸盐缓冲液（pH 9. 0) 20ml溶解；然后将两者混合，冷却至(TC，取抓BClz 110 μ L，室温下反应1.化，透析过夜后分装，-2(TC保存。
[0143] 在本实施例中，PBS缓冲液的配方为；0. 2mol/L的胞2册〇4 81ml加0. 2mol/L的 NaH2P〇4 19ml混合而成。
[0144] 测酸盐缓冲液的配方为；0. 05mol/L测砂80ml，加 0. 2mol/L测酸20ml混合而成。
[0145] 2.免疫动物制备单克隆抗体：
[014引 2. 1.取上述制备的服P90 α -1抗原（1)和（2)(免疫原）分别与等体积的弗氏完 全佐剂（购自上海源聚生物公司）充分混合后，免疫Ba化/c小鼠，50 μ g抗原/化皮下多 点注射。4周后测血清效价，选择免疫反应性好的小鼠再加强免疫；取抗原与等体积的不完 全弗氏佐剂（购自上海源聚生物公司）充分混合后，抗原剂量25 μ g/只，皮下多点注射，加 强免疫的次数为6次，每次间隔2-3周，融合前另外连续加强免疫两次，每次间隔1-2周，之 后取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞按常规方法用50% PEG (MW4000)(购自中原化工公司）介 导进行融合，并用HAT条件培养基（购自sigma公司）选择培养。融合后放入0?培养箱中 37°C培养9~11天后，孔内出现较大的细胞克隆。11天开始用间接化ISA进行筛选。对初 筛阳性的孔利用有限稀释法进行4次克隆化培养（即使筛选后的细胞大量分裂繁殖），之后 扩增细胞、冻存、制备腹水。
[0147] 2. 2.将Ba化/c小鼠用降植焼（购自sigma公司）0. 5ml/只处理，一周后腹腔接种 杂交瘤细胞2X 1〇6个/只，10天后收集腹水。
[0148] 2. 3.测定抗体效价：用间接化ISA方法测定利用HSP90 α -1抗原（1)制备的单克 隆抗体（1)的效价，结果显示单抗的效价达到1:32000 W上。
[0149] 利用服Ρ90 α -1抗原（2)制备的单克隆抗体（2)的效价也利用相同的方法进行测 定，其效价也达到1:32000 W上。
[0150] 3.免疫动物制备多克隆抗体：
[0151] 3. 1.选用Η个月龄、体重约为化g左右的新西兰白兔作为免疫动物。基础免疫中， 将l-2mg上述制备的服P90 α -1抗原（1)和（2)(免疫原）分别与等体积的完全弗氏佐剂 (购自上海源聚生物公司）混合-充分乳化后在兔子背部进行多点皮下注射。每隔4周加 强免疫一次，加强免疫6次，抗原与不完全弗氏佐剂（购自上海源聚生物公司）充分乳化 后，W 100 μ g/只于背部多点皮下注射。末次加强免疫后第10天颈动脉放血，分离血清。 [015引 3. 2.测J定抗体效价；用间接ELISA法测定利用服P90 α -1抗原（1)巧[|备的多克隆 抗体（1)的效价，结果显示抗体效价达到1:32000 W上。
[015引利用HSP90 α -1抗原似制备的多克隆抗体似的效价也利用相同的方法进行测 定，其效价也达到1:32000 W上。
[0154] 3. 3.取血及分离血清：颈动脉插管取血，分离血清。
[0155] 4.分离纯化抗体；硫酸倭沉淀后，再经Protein G(购自sigma公司）亲和纯化。
[0156] 5.抗体分装后冻干，低温保存。
[0157] 实施例3 ;人服P90 α -1单克隆抗体（1)和似的特异性鉴定
[015引 W ELISA进行检测。分别W人服Ρ90α -1蛋白、S-100B蛋白、神经元特异性帰醇 化酶NSE (均购自上海联硕公司）为检测抗原包被化ISA板，通过化ISA分别检测所制备的 HSP90 α -1单克隆抗体（1)和（2)与该人服P90 α -1蛋白的特异性反应，W正常BALB/c小 鼠血清作阴性对照，PBS液作空白对照。
[0159] 结果；HSP90 α -1单克隆抗体（1)和似分别只与HSP90 α -1反应为阳性 (Ρ/Ν〉2. 1)，而与S-100B蛋白、神经元特异性帰醇化酶NSE反应为阴性，说明本发明的 HSP90Q-1单克隆抗体（1)和（2)分别具有特异性。
[0160] 实施例4 ;人服Ρ90 α -1多克隆抗体（1)和似的特异性鉴定
[0161] 利用与上述鉴定单克隆抗体特异性相同的方法进行鉴定。
[0162] 结果显示：服Ρ90 α -1多克隆抗体（1)和似分别与服Ρ90 α -1反应为阳性 (Ρ/Ν〉2. 1)，而与S-100B蛋白、神经元特异性帰醇化酶NSE反应为阴性，说明本发明的 HSP90Q-1多克隆抗体（1)和（2)分别具有特异性。
[0163] 实施例5 ;利用服Ρ90 α -1单克隆抗体和服Ρ90 α -1多克隆抗体制备服Ρ90 α -1体 外诊断试剂盒。
[0164] 在本实施例中，将实施例2中利用HSP90 α -1抗原表位肤（1)制备的单克隆抗体 (1)作为