rfT，Isg20，Ifn4等抗病毒基因的下调，并进一步阐述了相关免疫机理。
[0016]本发明发明人发现RXR介导的固有免疫响应在水泡型口炎病毒感染过程中的的宿主防御中不可或缺；并率先证明了在水泡型口炎病毒感染的宿主防御中，RXR依赖性COX感受通路有着关键性的作用。
[0017]综上所述，本发明发明人证实了 COX感受通路以RXR依赖的方式对宿主免疫防御系统中的抗病毒基因存在抑制作用，进一步证实了 RXR在筛选Ifni3，Isgl5，Gbp-1, 0as2，Ι???, Isg20，Ifn4激动剂中的用途。
[0018]【附图说明】:
图1显示为RXR表达调控宿主细胞对VSV感染的易感性:U)巨噬细胞给予VSV (感染4小时)、HSV-1或MHV668 (感染8小时)，QRT-PCR检测RXR mRNA表达(感染复数=1);⑶巨噬细胞给予poly 1:C( lug/ml)病毒转染，或给予poly dA: dT感染，4小时后QRT-PCR检测RXR mRNA表达；(O野生型RAW细胞(模拟)以及RAW264.7细胞使其转染pBABE空载体(空)和转染pBABE -人RXR载体(hRXRa )，其产物的RXR蛋白表达；(Z?)RAW264.7细胞转染hRXRa，对照组细胞(空)感染VSV(*PFU/ μ L)(感染复数=0.01)，第14小时收集上清液，用菌斑实验计数病毒滴度；(RXR a WT和RXR缺乏F9的胚胎癌细胞系(RXR a nul I)中RXR蛋白的表达；(/ORXR a WT和RXR a null中感染VSV (*PFU/ μ L)通过菌斑实验计数上清液中不同特定时间点的病毒滴度(感染复数=0.01);(仍通过逆转录感染，RXRa null与hRXRa或与pBABE空载体重组。三个独立的RXR过度表达群体的建立。hRXRa I (popl)、hRXRa 2 (pop2)、hRXRa 3 (pop3),在这些细胞系以及野生型细胞中RXR表达由免疫印迹实验证实，非特异性条带(NS)作为对照组；(A RXR a null与hRXR a或与pBABE空载体重组，二者均感染VSV (*PFU/ μ L)(感染复数=0.01)在第12小时收集上清液，其病毒滴度由菌斑实验测定。
[0019](A) (β) (C) m (70 {H)的数据表现为均数土标准差(n=3)，上图作为其代表性实验。在三个独立的实验中得到相似的结果.ΑΡ< 0.05且** Ρ< 0.01 (t检验)，(C)iE)(仍的数据证实三个独立实验的代表。
[0020]图2显示为RXR特异性激动剂可以促进VSV感染，而其特异性拮抗剂可以减轻VSV 感染:(A) RAW264.7 细胞经过 RXR 特异性配体(LG268 10nM) (AGN194204 10nM)或DMSO预处理16小时。接着细胞感染VSV (*PFU/yL)(感染复数=0.01 )，在第14小时收集上清液。其病毒滴度由菌斑实验测定；(B) RAW264.7细胞给予天然RXR配体，9顺式维甲酸(9cRA)或给予HX531或给予DMS0，三组均预处理16小时后感染VSV (*PFU/ μ L)(感染复数=0.01)在第14小时收集上清液。其病毒滴度由菌斑实验测定；(C) RAW264.7细胞经过RXR特异性配体(LG268 10nM) (AGN194204 (10nM))或DMSO预处理，接着细胞感染VSV-GFP。这三个独立的实验中，VSV-GFP感染的细胞第9小时其代表图(B-F亮视野)；(仍WT 细胞以及 RXR a null 给予 DMSO 或 AGN194204 (10nM) 16 小时后，感染 VSV (*PFU/μ L)12小时(感染复数=0.01)其病毒滴度由菌斑实验测定；(幻RXRa null与hRXRa或与pBABE空载体重组，给予DMSO或AGN194204 (10nM) 16小时后，感染VSV (*PFU/yL)(感染复数=0.01) 12小时其病毒滴度由菌斑实验测定；(/0人RXR过度表达的RAW264.7细胞(RAW264.7 RXR)给予DMS0、9cRA、HX531后，感染复制不充分的VSV假病毒编码VSV-G荧光素酶受体(VSV-G-1uc)，其产物在第24小时收集，荧光素酶活力被定量分析。RLU表达结果数据表现为:均数土标准差，** P < 0.01 (t检验)，数据显示三个独立实验的实验结果；(G) RAW264.7细胞表达pBABE抑制或人RXR给予DMSO或9cRA预处理后感染VSV (Imol),在实验第8小时收集其细胞上清液，VSG-G蛋白水平通过免疫印迹法测定。微管蛋白作为一种加载控制器被检测出来。数据代表了 3个独立的实验结果；iH) RAW264.7细胞感染VSV(感染复数=0.01)，基因组VSV RNA与第2小时和第4小时定量分析。
[0021]( A) {B) (I?) (B) {H )数据表现为均数土标准差(n=3)，上图作为其代表性实验。在三个独立的实验中得到相似的结果:*/"< 0.05且** P< 0.01 (t检验)。
[0022]图7显示为RXR a的表达和RXR配体激活增加了 RAW264.7细胞对VSV病毒的宿主易感性。
[0023]图8显示为13cRA增加宿主对VSV病毒感染的易感性。RAW264.7细胞转染pBABE空载体(空)和转染hRXR a，并对其给予DMS0、9cRA、13cRA 16小时预处理后，细胞感染VSV(*PFU/ μ L)(感染复数=0.01)。在上清液收集后，其病毒滴度由菌斑实验测定。数据表现为均数土标准差(η = 3)，上图作为其代表性实验。在三个独立的实验中得到相似的结果:*Ρ < 0.05且林P < 0.01 (t检验)ο
[0024]图3显示为配体激活RXR抑制多个抗病毒基因:U) RAW264.7细胞给予9cRA或给予DMS0，两组组均预处理16小时后转染poly I:C (lg/ml) 2小时，提取其RNA，制作Affimetrix430.2芯片检测基因表达；(扔RAW264.7细胞给予9cRA或给予DMSO或给予HX531，三组均预处理16小时后转染poly 1:C( lg/ml )，转染后2小时，提取其RNA，并通过半定量PCR检测干扰素和Isgl5mRNA的表达；(O抗病毒激活干扰素诱导因子的表达，通过半定量PCR检测m中样本的GbpU Isg20、Oas2和Irf7的mRNA表达；{D)干扰素α敲除的骨髓源性巨噬细胞给予9cRA或给予DMSO或给予HX531，三组均预处理16小时后转染lg/ml poly 1:C，并通过半定量PCR检测干扰素和Isgl5mRNA的表达。
[0025](B) (C) (D)数据表现为均数土标准差(η = 3)，上图作为其代表性实验。在三个独立的实验中得到相似的结果:*Ρ < 0.05且< 0.01 (t检验)参见图9和图7
图9显示为RXR配体的活化抑制I型干扰素的表达。J2骨髓源性巨噬细胞经过DMS0、9cRA (10nM)或HX531 (I μΜ)预处理16小时，紧接着转染I μ g/ml poly I:C 4小时，4小时后QRT-PCR检测Ifn β mRNA⑷和Ifn α 4 mRNA⑶表达；
图4显示为RXR过度表达通过下游RIG-1和TLR3信号通路抑制干扰素转录:(A)RAW264.7细胞转染干扰素启动子荧光素酶受体(IFNb-1uc)给予DMSO或给予9顺式维甲酸预处理9小时后，对其进行poly 1:C刺激。(5g/ml)poly 1:C刺激20小时后收集其产物，根据发光分析实验对荧光素酶活力进行检测；(B-F)干扰素β荧光素酶受体共转染标记载体或人RXR，表明RIG-1以及TLR3信号通路作用元件转染293细胞24小时后，可以检测出裂解产物中荧光素酶活性；(G)标记载体或人RXR与产生I型干扰素信号通路作用原件共转染293Τ细胞24小时后，随后转染细胞感染VSV-GFP 8小时(感染复数=0.01),应用流式细胞术来检测细胞中的VSV病毒。
[0026]GFP阳性的细胞比例表现为均数土标准差(η = 3)，代表了 3个不同的实验P〈0.01(t检验)参见图10。
[0027]图10显示为RXR过度表达抑制宿主细胞内I型干扰素基因生产通路的激活:(A)标记载体或人RXR转染HEK293T细胞24小时后，随后转染细胞感染VSV-GFP 8小时(感染复数=0.01)。应用流式细胞术来检测GFP阳性细胞。GFP阳性细胞为VSV感染细胞。(B-E)标记载体或人RXR与产生I型干扰素信号通路作用原件RIG-1 (B)、IPSl (C).TBKl (D)或IRFl ; (E)共转染HEK293T细胞24小时后，随后转染细胞感染VSV-GFP 8小时(感染复数=0.01)，应用流式细胞术来检测细胞中的VSV病毒。GFP阳性细胞为VSV感染细胞。数据代表三个实验。
[0028]图5显示为配体激活RXR诱导环氧合酶I产生但抑制环氧合酶2的产生:(AmRAW264.7细胞或J2骨髓源性巨噬细胞在特定的时间点给予DMSO或9cRA预处理后，转染lg/ml poly 1:C，2小时后提取其RNA并通过半定量PCR检测干扰素mRNA表达；(ORAW264.7细胞给予DMSO或9cRA预处理16小时后提取其RNA，制作Aff imetrix430.2基因芯片来检测基因表达；幻J2骨髓源性巨噬细胞在特定的时间点给予DMSO或9cRA