加入0. 5血70 %己醇 清洗沉淀物，4°C，12000 X g离必5分钟，弃上清液，此步骤重复一次；得到的沉淀物自然风 干，加入20 μ L无菌超纯水回溶，电泳检测，-2(TC保存。
[001 引（2)PCR 扩增 本实施例同时检测RS16892496和RS7832552。每个SNP的检测需要一对上下游引物、 两条多态引物共4条PCR引物，共需要8条引物。每个SNP的检测需要做两管PCR扩增，为 防止出现假阳性之类的反应，衡量PCR是否成功，加设一管阴性对照组，共做5管PCR，所 述阴性对照组基因组模板及反应体系是一样的，但没有引物存在。
[0017] 根据不同的检测位点，用相应的引物按如下比例分别配制PCR反应体系： 2.5μ 110XPCR缓冲液，2μ 1 dNTPs，0.5u 1引物组，热启动Taq酶0. 15μ 1，基因组模板 80mg，添加超纯水至总体积为25 μ 1。
[0018] 将装有反应溶液的化pendorf试管放入ΑΒΙ 9700 PCR仪中，设置反应条件如下： 预变性 95°C 3min ;热循环 94°C 30s，6(TC 30s，72°C 30s，35 个循环；延伸 72°C 3min。反应 结束后，取出试管。
[001引由于5管PCR扩增反应是在同一台PCR仪上同步进行的，为了实现检测的高 效性、特异性，要求8条PCR引物的Tm值相近，为此需要先进行大量的DNA序列软件分析来 设计PCR引物，并通过大量的实验来进行Tm值的优化并确定设计的合理性，本试剂盒各基 因 SNP多态性的检测是既相对独立又相互联系的，不可分割。
[0020] (3 )琼脂糖凝胶电泳检测 将扩增后的产物进行琼脂糖电泳检测，过程如下；3g琼脂糖，加入lOOmL去离子水，微 波炉加热Imin，冷却到6(TC时加入5 μ L Goldview染色液，制成3%的琼脂糖凝胶。PCR产 物10 μ L与6 X T邸缓冲液0. 8 μ L混合上样，电压100V电泳15min。紫外灯下读取结果并 拍照，所得琼脂糖电泳检测图如图1所示。
[0021] 检测得到2个基因分型分析结果如下=
根据W上分型结果，该测试者的基因对基础代谢率的贡献值（Y)为： 2. 7巧.55=5. 25KG。依据是 RS16892496 GG〉TG/TT GG 型的 LBM 比 TT 和 TG 型的多 2. 7KG, RS7832552 TT型比TC和CC型的LBM多2. 55KG。然后依据W下公式： 男性；LBM = (0. 32810 * W) + (0. 33929 * H) - 29. 5336巧 女性：LBM =( 0.29569 * W) + (0.41813 * H) - 43. 2933巧 BMR=P 化cal/day)=370+(21. 6*LBM) 该测试者是男性，因此计算得出其BMR=1837kcal/day。对其日常生活中的能量消耗可 依据下表计算： 极少或不运动 Daily kilocalories needed = BMR X 1. 2 较轻度的锻炼（1 - 3 天 / 每周）Daily kilocalories needed = BMR X 1. 375 中度锻炼（3 - 5 天 / 每周）Daily kilocalories needed = BMR X 1. 55 重度锻炼化-7 天 / 每周）Daily kilocalories needed = BMR X 1. 725 极重度锻炼（每天两次）Daily kilocalories needed = BMR X 1. 9 如该男日常只从事较轻度的锻炼，则其每天的能量消耗大约为： 1723*1. 375=252化cal。
[0022] W上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用W限制本发明，凡在本发明的精神和 原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 基础代谢率基因检测试剂盒，包括盒体及盒体内单独存放的试剂，其特征在于：存 放的试剂包括： (1) 针对2个基因 SNP多态位点的PCR反应引物组： 针对SNP RS16892496的引物组： 5, -GTTGAAGAGCAAGCCCCCA-3' 5' -GTGACTTGTACCCACG-3' 5' -GAACCAATAATACTCTCCTC-3' 5' -CATTTGGAATGGAAAC-3' 针对SNP RS7832552的引物组： 5' -GTGATAGTGTGAGGTAC-3' 5' -GTTTATTAAGAGCATTCA-3' 5' -ATCTTTAAAGAATTCTAG-3' 5' -TGCATTGGATTTTG-3' (2) PCR扩增试剂； (3) 琼脂糖凝胶电泳分析试剂。2. 根据权利要求1所述的基础代谢率基因检测试剂盒，其特征在于：所述引物用量均 为 0· 5-1. Ομ 1〇3. 根据权利要求1所述的基础代谢率基因检测试剂盒，其特征在于：所述PCR扩增试 剂包括：10XPCR缓冲液，dNTPs，热启动Taq酶，基因组模板。4. 根据权利要求3所述的基础代谢率基因检测试剂盒，其特征在于：所述PCR缓冲液 包含：100mM Tris-HCl pH8.3,500mM KCl，15mM MgCl2。5. 根据权利要求3所述的基础代谢率基因检测试剂盒，其特征在于：所述PCR扩增 试剂用量为：l〇XPCR缓冲液2. 5μ 1，dNTPs2l·! 1，热启动Taq酶0. 1-0. 2μ 1，基因组模板 50-100ng〇6. 根据权利要求1所述的基础代谢率基因检测试剂盒，其特征在于：所述琼脂糖凝胶 电泳分析试剂包括：琼脂糖、TAE缓冲液、DNA分子量标准、DNA无毒染料和DNA上样缓冲 液。7. 根据权利要求6所述的基础代谢率基因检测试剂盒，其特征在于：所述DNA无毒染 料优选Biotium Gelred无毒染料。8. 根据权利要求1所述的基础代谢率基因检测试剂盒，其特征在于：首先依据基因分 型结果计算LBM相关基因对基础代谢率的总贡献值为各基因对基础代谢率贡献值之和，其 单位是公斤。9. 根据权利要求8所述的计算方法，其特征在于：各基因对体重的贡献值为依分型的 具体结果而定。10. 根据权利要求1、8和9,依据公式计算BMR，其特征在于该计算方法考虑到了基因的 影响。
【专利摘要】本发明提供了人体BMR（基础代谢率）基因检测试剂盒，该试剂盒包括盒体及盒体内单独存放的试剂，试剂包括：（1）针对2个基因SNP多态位点的PCR反应引物组（2）PCR扩增试剂（3）琼脂糖凝胶电泳分析试剂。本发明通过PCR引物的设计使多个PCR扩增反应可在同一台PCR仪上同步进行，对受测者的相关基因进行检测，并实现检测的高效性、特异性，分析得到其BMR的遗传因素，从而为受测者获得一个合适的健康方案，了解自身的代谢水平，指导其科学合理的运动强度和日常饮食管理，在健身运动和减肥中采取相应的策略避免对其无效甚至是有害的方法。
【IPC分类】C12Q1/68
【公开号】CN105671133
【申请号】
【发明人】李则轩, 范家成, 卢骏, 别茜, 张静静, 朱轶凡, 张舒, 邱嘉铭
【申请人】武汉白原科技有限公司, 湖北省体育科学研究所
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2014年11月17日...