2至 第2247的核巧酸-序列表中序列3的从第3167至第5471的核巧酸)-(外显子5至外显子18); (iv)(外显子1至外显子4)-(序列表中序列3的从第392至第2247的核巧酸-序列表中序列3 的从第4167至第5471的核巧酸)-(外显子5至外显子18); (V)(外显子1至外显子4)-(序列表 中序列3的从第392至第727的核巧酸-序列表中序列3的从第2229至第5471的核巧酸)-(外 显子5至外显子18); (Vi)(外显子1至外显子4)-(序列表中序列3的从第392至第727的核巧 酸-序列表中序列3的从第5117至第5471的核巧酸)-(外显子5至外显子18); (ViiK外显子1 至外显子4)-(序列表中序列3的从第392至第727的核巧酸-序列表中序列3的从第3167至第 5471的核巧酸)-(外显子5至外显子18); W及(ViiiK外显子1至外显子4)-(序列表中序列3 的从第392至第727的核巧酸-序列表中序列3的从第4167至第5471的核巧酸)-(外显子5至 外显子18)。
[0034] 在本说明书中，包含上述内含子4的片段的杂交肝细胞生长因子基因被命名为"肝 细胞生长因子-X"，上述肝细胞生长因子-X包含具有序列表中序列4至序列表中序列10的核 巧酸序列的肝细胞生长因子-X2、肝细胞生长因子-X3、肝细胞生长因子-X4、肝细胞生长因 子-X5、肝细胞生长因子-X6、肝细胞生长因子-X7及肝细胞生长因子-X8。在本发明中，优选 地，利用肝细胞生长因子-X7。在W往的PCT/KR03/000548中曾报告本发明中的"肝细胞生长 因子异构体"、"肝细胞生长因子-X"及"肝细胞生长因子-X7"等，上述专利文献的公开内容 全部插入于本说明书作为参照。
[0035] 在本说明书中可利用的肝细胞生长因子异构体的氨基酸或核巧酸序列解释为还 包含与野生型人类肝细胞生长因子异构体的序列呈现实质等同性的氨基酸或核巧酸序列。 上述实质等同性是指W使野生型人类肝细胞生长因子的异构体的氨基酸或核巧酸序列最 大限度地与任意的其他序列相对应的方式进行排比，在利用本领域中通常利用的算法分析 已排比的序列的情况下，意味着呈现最少80%的同源性，更优选地，呈现最少90%的同源 性，最优选地，呈现最少95%的同源性的氨基酸序列或核巧酸序列。用于序列比较的排比方 法公知于本领域中。在 Smith and Waterman,Adv.Appl.Math.2:482(1981) ;Needleman and Wunsch,J.Mol.Bio.48:443(1970);化arson and Lipman,Methods in Mol.Biol.24:307-31(1988);Higgins and Sha;rp,Gene 73:237-44(1988);Higgins and 化arp,CABIOS 5: 151-3(1989);Co;rpet et al.,Nuc.Acids Res.16:10881-90(1988);Huang et al., Comp.Appl.BioSci.8:155-65(1992)及化arson et al. ,Meth.Mol.Biol.24:307-31(1994) 中公开有排比的多种方法及算法。在NCBI Basic Local Alignment Search Tool(BL AST) (Altschul et al.，J.Mol.Biol.215:403-10(1990))在NBCI(National Center for Biological Information)等中可接近，可与网上的biastp、blasm、blastx、tblastn及 tblastx等的序列分析程序联动来利用。BLSAT可在ht1:p: //www.ncbi .nlm.n;Lh. gov/BLAST/ 中连接。利用上述程序的序列同源性比较方法可在ht化://www. ncbi . nlm. nih. gov/BLAST/ blast_help.htm I中进行确认。
[0036] 在本说明书中使用的术语"预防"是指通过本发明的组合物的给药抑制肌萎缩性 侧索硬化症或延迟肌萎缩性侧索硬化症的发展的所有行为。
[0037] 在本说明书中使用的术语"治疗"是指(a)肌萎缩性侧索硬化症的发展的抑制、（b) 肌萎缩性侧索硬化症的减轻或者(C)肌萎缩性侧索硬化症的去除。
[0038] 本发明的组合物可通过抑制神经细胞中的神经突起增生及生长W及运动神经细 胞的生长及调亡来预防或治疗肌萎缩性侧索硬化症。
[0039] 本发明的组合物可通过在基因治疗领域中通常公知的多种运载方法适用于生物 体内。
[0040] 在本发明的一实施例中，本发明的聚核巧酸包含于裸脱氧核糖核酸(naked DNA) 或基因运载体。作为基因运载体的例，包含质粒、载体及病毒载体。
[OOW (i)质粒（载体）
[0042] 作为运载本发明的聚核巧酸的运载体，可利用质粒(载体）。优选地，包含于载体的 聚核巧酸存在于适当的表达组件内。优选地，在上述表达组件中，聚核巧酸与启动子操作性 地相连接。
[0043] 在本说明书中，术语"操作性地相连接"是指核酸表达调节序列（例：启动子、信号 序列或转录调节因子结合位置的阵列）与其他核酸序列之间的功能性结合，由此上述调节 序列调节上述其他核酸序列的转录和/或翻译。
[0044] 在本发明中，与聚核巧酸序列相结合的启动子可在动物细胞中，优选地，在哺乳动 物细胞中，更优选地，在人类细胞中启动，来调节核巧酸序列的转录，包含来源于哺乳动物 病毒的启动子及来源于哺乳动物细胞的基因组的启动子，例如，包含巨细胞病毒（CMV， cytome galo virus)启动子、腺病毒晚期启动子、痘苗病毒7.5K启动子、SV40启动子、单纯 瘤疹病毒化SV)的tk启动子、呼吸道合胞体病毒(R SV)启动子、EF化启动子、金属硫蛋白启 动子、e-肌动蛋白启动子、人类白细胞介素（IU-2基因的启动子、人类干扰素（IFN)基因的 启动子、人类白细胞介素-4基因的启动子、人类淋己毒素基因的启动子及人类粒细胞巨隧 细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因的启动子，但并不限定于此。更优选地，在本发明中利用的 启动子为来源于人巨细胞病毒化CMV)的即刻早期（IE,immediately early)基因的启动子 或延伸因子巧FHa启动子，最优选地，从人巨细胞病毒即刻早期基因的启动子/增强子及外 显子1整体序列至外显子2的ATG起始密码子之前的5 非翻译区（UTR，untranslated region)。
[0045] 在本发明中利用的表达组件可包含聚腺巧化序列，例如，包含牛生长激素终止子 (Gimmi，E.R.，et al. ,Nucleic Acids Res.17:6983-6998(1989))、来源于SV40的聚腺巧化 序列（Schek，N，et al.，Mol. Cell Biol. 12:5386-5393( 1992))、HIV-lpolyA(Klasens, B.I.F.，et al. ,Nucleic Acids Res.26:1870-1876(1998))、e-球蛋白polyA(Gil,A.，et al,Cell 49 : 399-406( 1987))^HSV TK poIyA( Co Ie,C.N. and T.P.Stacy, Mol .Cell .Biol. 5: 2104-21 13( 1985))或多瘤病毒polyA(Batt ,D.B and G.G.Carmichael, Mol. Cell. Biol. 15:4783-4790(1995))，但并不局限于此。
[0046] 根据本发明的优选实例，作为聚核巧酸的运载体，可利用pCK、pCP、pVAXl或pCY载 体，更优选地，可利用pCK载体。在WO 2000/040737中详细公开有上述pCK载体，上述专利文 献的公开内容全部插入于本说明书作为参照。
[0047] (ii)逆转录病毒
[0048] 逆转录病毒将自身的基因插入于宿主的基因组，可运载大量的外源遗传物质，且 可受到感染的细胞的频谱广，因而多用作基因传递载体。
[0049] 为了构建逆转录病毒载体，本发明的聚核巧酸序列插入于逆转录病毒基因组来代 替逆转录病毒的序列，从而生产无法复制的病毒。为了生产病毒粒子，包含gag、pol及env基 因，但构建无长末端重复序列化TR，long terminal repeatWW序列的包装细胞株(Mann et al. ,Cell，33:153-159( 1983))。若向上述包装细胞株移入包含本发明的聚核巧酸序列、 长末端重复序列及4序列的重组质粒，则4序列可实现重组质粒的核糖核酸(RNA)转录体的 生产，上述转录体由病毒包装，病毒向培养基排出（Nicolas and Rubinstein"Ret;roviral vectors ,"In:Vectors:A survey of molecular cloning vectors and their uses , Ro化iguez and Denhardt(eds.) ,StonehanKButterworth,494-513( 1988))。收集包含重组 逆转录病毒的培养基，并进行浓缩，来利用为基因传递系统。
[(K)加]发表了利用第二代逆转录病毒载体的基因传递。Kasahara等(Science，266:1373-1376( 1994)制备了Molony Muline巧址emia病毒的变异体，其中，将促红细胞生成素巧PO， eryt虹opoietin)序列插入于包膜部位，来生产了具有新的结合特性的嵌合蛋白质。本发明 的聚核巧酸序列也可根据如上所述的第二代逆转录病毒载体的构建战略搭载于逆转录病 O
[0051] (iii)腺病毒
[0052] 腺病毒由于具有中间程度的基因组大小、操作的便利性、高的滴度、广泛的祀细胞 及优秀的感染性，因而多利用为基因传递载体。基因组的两个末端包含l〇〇-2(K)bp的反向末 端重复序列（ITRanverted terminal r邱eat)，运是在脱氧核糖核酸复制及包装中必须的 顺式作用元件。基因组的El区域巧IA及E1B)对调节转录细胞及宿主细胞基因的转录的蛋白 质进行编码。E2区域化2A及E2B)对参与病毒脱氧核糖核酸复制的蛋白质进行编码。
[0053] 在当前已开发的腺病毒载体中，多利用缺少El区域的无法复制的腺病毒。另一方 面，E3区域通常在腺病毒载体中被去除，从而提供外源基因被插入的位置(TMmmappaya, B.et al.,Cell,31:543-551(1982);及Riordan,J.R.et al.，Science，245:l〇66-1073 (1989))。因此，优选地，本发明的聚核巧酸序列插入于缺失的El区域化IA区域和/或ElB区 域)或E3区域。并且，上述核巧酸序列还可插入于已缺失的E4区域。在本说明书中，与病毒基 因组序列相关地使用的术语"缺失"不仅指相应的序列完全缺失，而且还指相应的序列部分 缺失。并且，腺病毒可包装至野生型基因组的约105%，因而还可追加包装约化M^osh-Choiulhury et al. ,EMBO J. ,6:1733-1739(1987))。因此，插入于腺病毒的上述的外源序列 还可追加地与腺病毒的基因组相结合。
[0054] 腺病毒