具有42个W上的不同的血清型及A-F的亚群。其中，属于亚群C的腺病毒类 型5为用于取得本发明的腺病毒载体的最优选的起始物质。众所周知的是，腺病毒类型5的 生物化学及遗传信息。借助腺病毒运载的外源基因W与附加体相同的方式进行复制，由此 对宿主细胞的遗传毒性非常低。因此，判断为利用腺病毒基因传递系统的基因治疗安全。
[0055] (iv)腺相关病毒(AAV)载体
[0056] 腺相关病毒可使非分裂细胞感染，并具有可感染于多种细胞的能力，因而适合作 为本发明的基因传递系统。在美国专利第5139941号及第4797368号中详细公开有腺相关病 毒载体的制备及用途的详细的说明。
[0057] 在La化Ce et al,Viology,162:48：M86(1988)，Zhou et al.，Exp.Hematol.(NY), 21:928-933(1993)，Walsh et al，J.Clin.Invest.,94:1440-1448(1994)及Flotte et al. ,Gene Therapy ,2:29-37(1995)中公开有作为基因传递系统的腺相关病毒的研究。最 近，腺相关病毒载体作为囊包性纤维症的治疗剂正在实施临床I。
[0058] 典型地，在腺相关病毒中，两个腺相关病毒末端重复使位于旁边的包含目的基因 序列的质粒(Mc^Lau曲Iin et Virol.,62:1963-1973(1988)及Samulski et al., J.Virol. ,63:3822-3828(1989))W及包含无末端重复的野生型腺相关病毒编码序列的表 达质粒(McCady et al.，J.Virol. ,65:2936-2945(1991))- 同转化而制备。
[0059] (V)其他病毒载体
[0060] 其他多种病毒载体也可利用于向生物体内运载本发明的聚核巧酸序列。来源于牛 痘病毒（Puhlmann M.et al.,Human Gene !"Iierapy 10:649-657(1999) ;Ridgeway," Mammalian expression vectors ,"In : Vectors : A survey of molecular cloning vectors and their uses . Rodriguez and Denhardt,eds.Stoneham:Butterworth,467-492(1988);Baichwal and Sugden,"Vectors for gene transfer derived from animal DNA viruses: Transient and stable expression of transferred genes,"In: Kucherlapati R,ed.Gene transfer.New York:Plenum Press,117-148(1986)及Coupar et al.,Gene,68:1-10(1988))、慢病毒（Wang G.et Clin.Invest.104(ll):R55-62 (1999))或单纯瘤疹病毒（Chamber R.，et al.，Proc.化tl.Acad.Sci USA 92:1411-1415 (1995))的多种载体也可利用为向细胞内运载上述聚核巧酸的运载系统。
[0061] (vi)脂质体
[0062] 脂质体借助分散于水相的憐脂自动形成。在N i C O 1 a U及S e n e， Biochim.Biophys.Acta,721:185-190(1982)及化colau et al.,Methods Enzymol.,149: 157-176(1987)中公开有作为利用脂质体向细胞内成功地运载外源脱氧核糖核酸分子的 例。本发明的包含聚核巧酸序列的脂质体可通过内吞、向细胞表面的吸附或与等离子细胞 膜的融合等的机制与细胞相互作用来向细胞内运载聚核巧酸序列。
[0063] 在本发明中，在本发明的聚核巧酸序列搭载于裸重组脱氧核糖核酸分子或质粒 (载体）的情况下，可利用微细注入法（Capecchi，M.R. ,Cell ,22:479( 1980)及化rland和 Weinhaub ,J. Cell Biol. 101:1094-1099( 1985))、憐酸巧沉淀法（Graham,F. L. et al., Virology ,52:456( 1973)及 Chen 和 Okayama, Mol. Cell.Biol. 7 :2745-2752( 1987))、电穿孔 法（Neumann,E.et al.,EMBO J.,1:841(1982)及 I'ur-Kaspa et al.,Mol.Cell Biol.,6: 716-718( 1986))、脂质体介导转染法（Wong, T.K.et al. ,Gene ,10 :87( 1980) ;Nicolau 及 Sene,Biochim.Biophys.Acta,721:185-190(1982)及Nicolau et al.,Methods Enzymol., 149:157-176( 1987))、二乙基氨乙基(DEAE)-右旋糖酢处理法(Gopal, Mol. Cell Biol.，5: 1188-1190 (1985))及基因轰击（Yang et al.，Proc.化 tl. Acad. Sci. ,87:9568-9572 (1990))方法向细胞内移入聚核巧酸序列。
[0064] 在本发明的聚核巧酸序列基于病毒载体制备的情况下，可根据该领域中公知的多 种病毒感染方法向细胞内运载聚核巧酸序列。在上述的引用文献中记载有利用病毒载体的 宿主细胞的感染。
[0065] 在本发明的优选实例中，本发明的基因运载体为载体。
[0066] 在本发明的一具体例中，本发明的载体为质粒，最优选地，可利用pCK载体。作为包 含利用PCK载体的表达肝细胞生长因子的两种W上的异构体的单一聚核巧酸的重组载体的 例，可例举pCK-肝细胞生长因子X7，如上所述，其在PCT/KR99/000855及PCT/KR03/000548中 详细记载。
[0067] 本发明的组合物可包含在药剂学上接受的载体。包含于本发明的组合物的药剂学 上接受的载体通常用于制剂，包含乳糖、葡萄糖、薦糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、 憐酸巧、藻酸盐、明胶、娃酸巧、微晶纤维素、聚乙締化咯烧酬、纤维素、水、糖浆、甲基纤维 素、径基苯甲酸甲醋、径基苯甲酸丙醋、滑石、硬脂酸儀及矿物油等，但并不限定于此。本发 明的药剂学组合物除了上述成分之外，还可包含润滑剂、润湿剂、甜味剂、香味剂、乳化剂、 悬浮剂、防腐剂等。适当的药剂学上接受的载体及制剂详细记载于Remington' S Pharm aceutical Sciences(19th ed.,1995)中。
[0068] 优选地，本发明的药剂学组合物W非口服的方式给药，例如，可利用静脉内给药、 腹腔内给药、皮下给药、皮内给药、脊髓内给药、脊髓腔内给药、脑室内给药、脑实质内给药、 头盖腔内给药、肌肉内给药或局部给药的方法进行给药。最优选地，可给药到肌肉内、脊髓 内、脊髓腔内、脑室内、脑实质内及头盖腔内。
[0069] 本发明的药剂学组合物能够W注射的方式制剂化来给药。本发明的药剂学组合物 的适当的给药量可根据制剂化方法、给药方式、患者的年龄、体重、性别、病态、给药时间、给 药途径、排泄速度及反应灵敏性等因素而多样，一般熟练的医生可容易确定对希望的治疗 有效的给药量并开处方。
[0070] 根据本发明的优选实例，本发明的肝细胞生长因子的异构体分别W化g至2500mg 的给药量进行给药，对上述异构体进行编码的聚核巧酸分别W化g至2500mg的给药量进行 给药。当上述肝细胞生长因子的异构体或对其进行编码的聚核巧酸的给药超过一次来反复 时，给药量可每次相同或不同。
[0071] 本发明的药剂学组合物可根据本发明所属技术领域的普通技术人员能够容易实 施的方法利用药剂学上接受的载体和/或赋形剂来制剂化，从而可制备成单位容量形态或 W放入大容量容器内的方式制备。此时，剂型可W为油或水性介质中的溶液、悬浮液或乳化 液形态，或者也可W为浸膏剂、粉剂、颗粒剂、片剂或胶囊剂形态，还可包含分散剂或稳定 剂。
[0072] 根据本发明的另一实施方式，本发明提供肌萎缩性侧索硬化症的预防或治疗方 法，上述肌萎缩性侧索硬化症的预防或治疗方法包括将将组合物给药到哺乳动物的步骤， 上述组合物包含肝细胞生长因子的两种W上的异构体或对上述异构体进行编码的聚核巧 酸作为有效成分。
[0073] 在本发明的一实例中，本发明的肝细胞生长因子的两种W上的异构体包含全长型 肝细胞生长因子及缺损的变异型肝细胞生长因子。
[0074] 在本发明的一具体例中，本发明的全长型肝细胞生长因子包含序列表中序列1的 氨基酸序列，本发明的缺损的变异型肝细胞生长因子包含序列表中序列2的氨基酸序列。
[0075] 在作为本发明的肌萎缩性侧索硬化症的预防或治疗方法的情况下，由于是包括将 作为本发明的一实施方式的肌萎缩性侧索硬化症预防或治疗用药学组合物进行给药的步 骤的方法，因而为了避免本说明书过于复杂，省略重复内容的记载。
[0076] 发明的效果
[0077] 归纳本发明的特征及优点如下：
[0078] (a)本发明提供肌萎缩性侧索硬化症的预防或治疗用药学组合物。
[0079] (b)本发明提供肌萎缩性侧索硬化症的预防或治疗方法。
[0080] (C)若利用本发明的组合物或方法，则可通过抑制胚胎神经细胞中的神经突起增 生、生长及运动神经细胞的生长及调亡，来预防或治疗肌萎缩性侧索硬化症。
【附图说明】
[0081] 图1表示本发明一实施例的对胚胎神经细胞的神经突起增生产生的pCK-肝细胞生 长因子X7的影响。
[0082] 图2表示本发明一实施例的对胚胎神经细胞的生长产生的pCK-肝细胞生长因子X7 的影响。
[0083] 图3表示本发明一实施例的在小鼠运动神经细胞中pCK-肝细胞生长因子X7对细胞 生长产生的影响。
[0084] 图4曰、图4b表示本发明一实施例的在小鼠运动神经细胞中pCK-肝细胞生长因子X7 对细胞调亡产生的影响。
[0085] 图5表示本发明一实施例的在氧化应激培养条件下对小鼠运动神经细胞的生存产 生的pCK-肝细胞生长因子X7的效果。
[0086] 图6曰、图6b表示本发明一实施例的在氧化应激培养条件下对小鼠运动神经细胞的 细胞调亡产生的pCK-肝细胞生长因子X7的效果。
[0087] 图7表示本发明一实施例的在传递G93A突变形态的h超氧化物歧化酶1的细胞中 pCK-肝细胞生长因子X7对细胞生长产生的影响。
[0088] 图8表示本发明一实施例的在肌萎缩性侧索硬化症小鼠中pCK-肝细胞生长因子X7 对小鼠的握力产生的影响。
【具体实施方式】
[0089] W下，通过实施例对本发明进行更加详细的说明。运些实施例仅用于更加具体地 说明本发明，根据本发明的要旨，本发明的范围并不受运些实施例的限制，运对于本发明所 属技术领域的普通技术人员来说是显而易见的。
[0090] 实施例
[00川实施例1:确认在胚胎神经细胞化mbry