305);和专利之五，使用源自 地衣芽孢杆菌和/或枯草杆菌的蛋白酶，通过非PH值稳态(non-pH-stat)技术将乳清蛋白水 解至15%-30%(葡萄糖当量;DE)，然后从截留分子量大于10,000的超滤膜获得透过液（日 本专利No. 3，167，723);且除了这些专利和专利申请，本发明包括其他专利和未审的公开专 利。
[0046] 乳清蛋白的蛋白水解物可通过以下五个步骤制备。下面的步骤（1)到（5)描述了乳 清蛋白水解物的制备方法。
[0047] (1)将作为干燥产品的、蛋白质含量约为90% (w/w)的乳清蛋白分离物(WPI，戴维 斯克国际食品有限公司），溶解在蒸馏水中，以提供8% (w/v)的蛋白质浓度，从而得到蛋白 质水性溶液。
[0048] (2)将所述水性溶液在85 °C下加热2min使蛋白质变性。热处理的水性溶液的pH约 为 7.5。
[0049] (3)然后，加入2.4L相对于蛋白质（底物）的浓度为2.0 % (w/w)的碱性蛋白酶(酶， 诺维信），将水性溶液保持在55°C下进行水解3小时。
[0050] (4)随后，加入相对于蛋白质（底物)浓度为3.0% (w/w)的源于猪的胰蛋白酶PTN 6. OS(酶，诺维信日本有限公司），将水性溶液保持在55°C下进行水解3小时。换句话说，总的 水解时间为6小时。完成这些水解反应后，水性溶液的pH大约在7.0。
[0051] (5)将乳清蛋白水解物离心（20,000\8，10分钟），使用截留分子量为10,000的超 滤膜处理（Millipore Corporation,Ultrafree MC) 〇
[0052] 在制备蛋白质水解物的方法中，关于蛋白质水解的制备方法，例如，选择预热、酶 底物的比例(E/S)、pH、水解温度以及水解时间作为五个参数进行优化。预热:65-90°C，E/S: 0.01-0.2，水解温度:30-65°C，水解时间：3小时至小于20小时。
[0053] 用于制备蛋白水解物的酶的实例包括以下来自诺和诺德的酶：
[0054] (1)内切蛋白酶
[0055] 源于地衣芽孢杆菌:碱性蛋白酶
[0056] 源于缓慢芽孢杆菌(B. Ientus):益瑞蛋白酶 [0057] 源自枯草芽孢杆菌：中性蛋白酶(Neutrase)
[0058]源于细菌:复合蛋白酶
[0059]源于猪胰脏:PTN(胰蛋白酶）
[0060] (2)外切蛋白酶
[0061]源于米曲霉:风味蛋白酶 [0062]源于猪或牛内脏:羧肽酶
[0063] 除了上述酶的例子，包括源于动物的胰酶、胃蛋白酶、源于植物的木瓜蛋白酶、菠 萝蛋白酶、源于微生物的内切蛋白酶和外切蛋白酶(例如，乳酸菌、酵母菌、霉菌和分枝杆 菌）、它们未精制的纯化原料和细菌匀浆。此外，当组合用酶时，源于地衣芽孢杆菌的碱性蛋 白酶和源于猪胰脏的PTN(胰蛋白酶)的组合经常被使用。
[0064] 本发明的蛋白水解物包括:酶水解物，超滤后的保留液或透过液，和表现相似活性 的市售乳蛋白水解物。例如，本发明的蛋白水解物可以使用截留分子量为1 〇，〇〇〇的超滤膜 的保留液。例如，截留分子量为10，〇〇〇的超滤膜的保留液可用作本发明的蛋白水解物。
[0065] 乳蛋白的结合率可以通过添加乳蛋白水解物的量进行调节，乳蛋白结合率可依据 加入的其他成分(发酵乳蛋白、含油酸的脂肪和油、乳磷脂、大豆卵磷脂、异麦芽酮糖或类似 物），癌症病人的病理、症状、年龄、体重，使用目的或类似情况，进行适当调整。具体地，添加 乳蛋白水解物的量的实例包括每IOOmL营养组合物0.9-5 . Og，优选0.9-3 . Og，更优选1.0-2.5g，更优选1.2-2. Og，但不限于这些范围。
[0066] 1-2发酵的乳蛋白
[0067]发酵乳(使用发酵剂(starter)如乳酸菌通过发酵液态奶得到的任何产品，所述液 态奶通过混合一种或多种家畜奶，如牛奶、水牛奶、山羊奶、绵羊奶、或马奶和/或乳原料，如 部分脱脂乳、脱脂乳、还原全脂乳(reduced whole milk)、还原脱脂乳、还原部分脱脂乳、黄 油、它们的奶油或类似物而制备)可作为本发明中发酵乳蛋白的来源。例如，新鲜奶酪、天然 奶酪、酸奶和乳清干酪包含在本发明的发酵乳中。另外，本发明的奶酪，指的是那些通过使 用乳酸菌对乳、酪乳或奶油进行发酵而获得的那些，或通过加入酶至乳、酪乳或奶油而获得 的凝乳，其中乳清被去除，且凝固或陈化的存在是无关紧要的。通常使用保加利亚乳杆菌和 嗜热链球菌作为生产发酵乳的发酵剂，但不局限于此，且实例包括乳酸杆菌和双歧杆菌，如 乳酸链球菌、乳脂链球菌、醋酸乳酸双重链球菌、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、奠肠 球菌（Enterococcus fecal is )、干酪乳杆菌、瑞士乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌 (Lactobacillus rhamnosis)、植物乳杆菌、鼠乳杆菌(LactobaciIlus murinus)、罗伊氏乳 杆菌、短乳杆菌、加氏乳杆菌、长双歧杆菌、两岐双岐杆菌以及短双岐杆菌。此外，所使用的 微生物，如丙酸菌属，在生产发酵乳时，可组合使用。本发明的营养组合物可以用任何发酵 乳制成，但优选使用新鲜奶酪或酸奶制备，更优选使用夸克奶酪(quark)或酸奶制备。
[0068]新鲜奶酪有很多种，如乡村奶酪、夸克奶酪、纤丝奶酪、纽沙尔特干酪、奶油奶酪、 马苏里拉奶酪、意大利乳清奶酪以及马斯卡彭奶酪。夸克奶酪是一种未陈化(新鲜的）的奶 酪，脂肪含量低，具有新鲜风味和酸味的特点。生产夸克奶酪的典型方法描述如下。先对脱 脂乳巴氏杀菌，然后接种0.5-5%的发酵剂乳酸杆菌（主要是保加利亚乳杆菌和嗜热链球 菌)进行发酵。当溶液的PH值达到4.6的时候，形成凝乳，将所获得的凝乳冷却后用夸克奶酪 分离器将乳清离心分离。本发明的夸克组合物的实例为17-19% (w/w)的总固体含量，11-13% (w/w)的蛋白质，低于1% (w/w)的脂肪，2-8% (w/w)的碳水化合物和低于2% (w/w)的乳 糖。此外，使用凝乳酶凝固的奶酪也包括在本发明的夸克奶酪中。进一步，那些通过向脱脂 奶中加入乳球菌属的乳酸菌和乳脂菌(cremoris)和属于明串珠菌属菌种的混合培养液所 培养的、并去除了乳清的奶酪，也包括在本发明的夸克奶酪中。更进一步，那些通过使用刀 具切割以与上面的方法同样的方式获得的凝乳和加热发酵液分离乳清的奶酪，也包括在本 发明的新鲜奶酪中。
[0069]已知乳酸菌和其培养物上清液具有免疫调节功能。例如，已知乳酸乳球菌乳脂亚 种(Lactococcus lactis subsp.cremoris)和源于其培养物上清液的多糖可选择性地对转 化细胞(肿瘤、癌细胞等)有毒性（日本专利，公开号2009-256312)。
[0070]根据其他组分(乳蛋白水解物、含油酸的脂肪和油、乳磷脂、大豆卵磷脂、异麦芽酮 糖或类似物)的添加量、摄取对象的病理、症状、年龄、体重、以及使用目的等，适当调节发酵 乳蛋白的添加量。具体地，发酵乳蛋白添加量的实例包括，0.5-6g，优选2-6g，更优选2.5-4.5g的蛋白质每IOOmL营养组合物，但不限于这些范围。
[0071]日本部级条例(卫生福利部第52号条例，1951年12月27日）就奶和奶制品涉及的成 分标准，建立了 "禁止从分娩5天内的牛、山羊或绵羊挤奶"的规定，作为乳等通用的成分标 准和制备方法的准则。换句话说，该部级条例限制了初乳在乳制品中的使用。
[0072] 在本发明中，优选地，用于制备乳蛋白和发酵乳蛋白的水解物的乳是普通乳(或者 被称为成熟乳）。乳可能源自任何动物，如奶牛、水牛、山羊、绵羊、马、或人。
[0073] 2.脂质
[0074] 2-1.磷脂
[0075] 乳磷脂和源于大豆的卵磷脂或蛋黄卵磷脂的结合作为磷脂使用。乳磷脂也可单独 使用。在生物化学、医学和药理学领域，术语"卵磷脂"仅指代磷脂酰胆碱。然而在商业或工 业领域，卵磷脂作为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酸和其它磷脂混合物的 通用术语使用。在"日本食品添加剂的规范和标准（Japan's Specifications and Standards for Food Additives)"中，第七版（1999)，卵磷脂被定义为"从油籽或动物源获 得的物质，其主要成分是磷脂"。
[0076]乳磷脂包含鞘磷脂（sphingo yelin)(SM)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、 磷脂酰肌醇（PI)、磷脂酰丝氨酸（PS)和溶血磷脂酰胆碱（LPC)，并且仅存在于乳脂球膜 (MFGM)中。表 1 是 MFGM 磷脂级分的组成（Bulletin of Japan Dairy Technical Association,第50卷，第58-91 页，2000)。
[0077] 如表1所示，乳磷脂的特征是含有大量的鞘磷脂，所述鞘磷脂没有包含在大豆卵磷 脂内。
[0078] [表1]
[0080] 大豆卵磷脂
[0081] 虽然大豆卵磷脂作为天然食品添加剂，被广泛地用于食品和食品产品领域，但多 烯磷脂酰胆碱也被用作药物(用途:在慢性肝脏疾病中改善肝