。每隔一天称量食物摄入 量，每三天记录体重，和记录死亡小鼠的数量。
[0150] 40只小鼠用于C26实体肿瘤研究，每组20只。每笼有五只小鼠，笼内放置了两个特 制的粉末食物给食器，每个装有大约40g的食物。小鼠可随意进食。每隔一天称量肿瘤体积 和食物摄入量，每三天记录体重。接种后14天，小鼠以颈脱位法处死，并收集眼部血液。解剖 出肿瘤，测量肿瘤体积，称量肿瘤重量，然后，肿瘤组织固定在10%中性福尔马林中，用于病 理组织学检查。
[0151] 肿瘤体积计算公式：
[0152] v(cm3) =a*b2/2(a =长直径（cm) ;b =短直径（cm))
[0153] 肿瘤生长抑制率（％ )=(对照组平均肿瘤体积-试验组合物组平均肿瘤体积）X 100 % /对照组平均肿瘤体积，或
[0154] 肿瘤生长抑制率（％ )=(对照组平均肿瘤重量-试验组合物组平均肿瘤重量）X 100 % /对照组平均肿瘤重量
[0155] 疗效标准:两组肿瘤重量(或肿瘤体积)平均值的差异是P<0.05的统计上显著性。
[0156] 5.统计分析
[0157] 使用统计软件SPSS 11.5版进行数据分析。在S-180肿瘤研究中，两组的平均生存 时间和累积生存率用存活分析对数秩检验进行比较。在C26肿瘤研究中，两组的平均肿瘤质 量和平均肿瘤体积用学生t检验进行比较。P<0.05被认为是统计上显著的。
[0158] III 结果
[0159] 1.小鼠 S-180腹水肿瘤研究
[0160]在试验组合物组的小鼠的平均存活为13.0±0.3天(平均值土标准误差），在AIN-93M组的小鼠的平均存活为12.4±0.4天。两组在平均存活方面或累计生存率方面无显著差 异(P>0.05，存活分析对数秩检验）（表6，表7)。存活曲线表明，试验组合物组小鼠的存活率 高于对照组，并且两条曲线在任何时间点不交叉，说明试验组合物组的小鼠的存活时间趋 于长于对照组（图1，图2)，尽管没有显著差异。
[0161] 2.小鼠 C26实体肿瘤研究
[0162] 2.1食物摄入量和体重
[0163] 在整个实验期间，试验组合物组的荷瘤小鼠的平均食物摄入量为2.60±0.49g/ 鼠/天，对照组的荷瘤小鼠的平均食物摄入量为3.37±0.45g八鼠/天(表8)。两组的食物摄入 量无显著差异(P>〇.〇5)(图2)。两组的体重变化也没有显著差异(P>0.05)(图3)。
[0164] 2.2肿瘤重量和肿瘤体积
[0165] 如表8所示，试验组合物组的小鼠平均肿瘤重量是1.36±0.54g，对照组的平均肿 瘤重量是1.83±0.89g，有显著性差异(P〈0.05)。根据肿瘤重量计算的试验组合物组的肿瘤 生长抑制率是25.59%。
[0166] 同样地，试验组合物组的小鼠平均肿瘤体积是1.868±0.844g，对照小鼠的平均肿 瘤体积是2.582±1.055g。在第4、7、11天，测得的试验组合物组的平均肿瘤体积全部显著地 大于对照组(P〈〇.05)。根据肿瘤体积计算的试验组合物组的肿瘤生长抑制率是27.65% (表 9,图 4,图 5)。
[0167] 2.3肿瘤病理
[0168] 在肿瘤结构解剖期间，观察到试验组合物组的肿瘤完整性更好，有清晰的边缘，容 易剥离。与此相反，AIN-93M组的肿瘤似乎已经侵入周围组织，很难剥离。
[0169] 病理检查显示：试验组合物组的肿瘤边缘光滑，癌细胞和出血性病灶分布在边缘 区域;在中心区域，深度染色细胞密集生长(图6A)，这些具有深度染色细胞核的癌细胞大小 和形状不同（图6B)。AIN-93M对照组的肿瘤边缘不清晰，可以看到大面积的出血（图6C);癌 细胞扩散，坏死明显，且被出血包围（图6D)。
[0170] 病理检查结果表明，试验组合物组的恶性肿瘤比对照组的那些侵入性更小，表明 试验组合物在某种程度上对肿瘤具有抑制作用。
[0171] A.试验组合物组:试验组合物组的肿瘤边缘整齐光滑，癌细胞扩散，可以看到伊红 样的均质物质（即，出血）。在中心区域可以看到深度染色癌细胞。
[0172] B.试验组合物组:在中心区域，癌细胞密集生长，细胞有不同的大小和形状，可以 看到小面积均质的伊红样的物质（即，出血）。（右上方，高倍放大:各种不同形状和大小的癌 细胞，细胞核被深度染色。HE X 400)
[0173] C.对照组:肿瘤边缘不一致，有大面积均质的伊红样的物质（即，出血）。
[0174] D.对照组:癌细胞扩散，坏死病灶可见，且被均质的伊红样的物质（即，出血)包围。
[0175] 表6
[0176] 表6两组中S180荷瘤小鼠的平均存活天数
[0178] P >0.05,存活分析对数秩检验
[0179] 表7
[0180] 表7两组中S180荷瘤小鼠的累积存活率
[0182] P>0.05,存活分析对数秩检验
[0183] 表8
[0184] 表8 C26肿瘤重量和肿瘤抑制率
[0186] *与对照组相比P<0.05
[0187] 表9
[0188] 表9不同时间下C26肿瘤体积和肿瘤抑制率
[0191] *与对照组相比P<0.05
[0192] 总结
[0193] 两种常用的小鼠肿瘤模型S-180腹水肿瘤模型和C26小鼠实体肿瘤模型，被用来初 步评估试验组合物是否能够抑制小鼠肿瘤生长。结果表明试验组合物组的S-180荷瘤小鼠 的平均生存时间没有明显长于对照组小鼠（P>〇.05);在C26小鼠肿瘤模型中，试验组合物能 抑制肿瘤生长。
[0194] 工业应用
[0195] 本发明的营养组合物对患有结肠癌实体肿瘤的病人有用，如抑制结肠癌实体肿瘤 生长和降低恶性肿瘤的侵犯。
【主权项】
1. 适用于肿瘤病人的营养组合物，包含:作为蛋白质的乳蛋白水解物和发酵乳蛋白；作 为脂质的含油酸的油和乳磷脂和/或大豆卵磷脂;和作为碳水化合物的异麦芽酮糖。2. 如权利要求1所述的营养组合物，其特征在于，所述乳蛋白选自由下述所组成的组： 酪蛋白、乳蛋白浓缩物(MPC)、乳清蛋白浓缩物(WPC)、乳清蛋白分离物(WPI)、α-乳白蛋白、 β-乳球蛋白和乳铁蛋白。3. 如权利要求1所述的营养组合物，其特征在于，在lOOmL所述组合物中，所述乳蛋白水 解物的量为〇.9g-5.0g。4. 如权利要求1所述的营养组合物，其特征在于，所述乳蛋白水解物可通过用来自地衣 芽孢杆菌(Bac illuslichenif omus)的碱性蛋白酶和来自猪胰脏的胰蛋白酶，水解乳清蛋白 分离物(WPI)获得。5. 如权利要求4所述的营养组合物，其特征在于，所述乳蛋白水解物是通过用分离分子 量为10，000的超滤膜进一步处理获得的渗透物。6. 如权利要求1所述的营养组合物，其特征在于，所述发酵乳蛋白源自奶酪。7. 如权利要求6所述的营养组合物，其特征在于，所述奶酪是夸克奶酪。8. 如权利要求1所述的营养组合物，其特征在于，在lOOmL所述组合物中，所述发酵乳蛋 白的量为〇.5g-6.0g。9. 如权利要求1所述的营养组合物，其特征在于，在lOOmL所述组合物中，所述异麦芽酮 糖的量为4g_15g。10. 如权利要求1所述的营养组合物，其特征在于，所述脂质中油酸的量为总脂肪酸组 成的30%或更多。11. 肿瘤生长的抑制方法，所述方法包括对需要其的患者施用有效量的营养组合物，所 述营养组合物包含:作为蛋白质的乳蛋白水解物和发酵乳蛋白；作为脂质的含油酸的油和 乳磷脂和/或大豆卵磷脂;和作为碳水化合物的异麦芽酮糖。12. 如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述患者患有结肠实体肿瘤。13. 如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述组合物是口服或管饲(肠内）营养物。14. 肿瘤治疗或减小的方法，所述方法包括对需要其的患者施用有效量的营养组合物， 该营养组合物包含:作为蛋白质的乳蛋白水解物和发酵乳蛋白；作为脂质的含油酸的油和 乳磷脂和/或大豆卵磷脂;和作为碳水化合物的异麦芽酮糖。15. 如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述肿瘤是结肠实体肿瘤。16. 如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述组合物是口服或管饲(肠内）营养物。
【专利摘要】用于抑制肿瘤生长的营养组合物，包含：作为蛋白质的乳蛋白水解物和发酵乳蛋白；作为脂质的含油酸的油和乳磷脂和/或大豆卵磷脂；作为碳水化合物的异麦芽酮糖。作为口服或管饲营养物，所述组合物可用于抑制肿瘤(癌症)患者的肿瘤生长。
【IPC分类】A61K38/01, A23L33/125, A23L33/17, A23L33/00, A23L33/21, A23L33/115, A61P35/00
【公开号】CN105705037
【申请号】
【发明人】佐佐木一, 纪再思, 坪井洋, 王健, 丁训诚, 李卫华
【申请人】株式会社明治, 纪再思
【公开日】2016年6月22日
【申请日】2013年7月31日