一种用于移植供肺灌流的肺灌流液及其制备方法
【专利摘要】本发明提供了一种用于移植供肺灌流的肺灌流液及其制备方法，可以提供良好的肺保护和复苏作用，能够满足移植供肺的灌流和保存需要；同时灌流时间较长，在经本发明的肺灌流液6小时灌流后的供肺仍然能够保有良好的肺顺应性和氧合能力；最后，本发明的制备方法简单，原材料容易获得且经济实惠，适合在一般的实验室或医院推广应用。
【专利说明】
-种用于移植供肺灌流的肺灌流液及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明设及医学生物技术领域，尤其设及一种用于移植供肺灌流的肺灌流液及其 制备方法。
【背景技术】
[0002] 肺移植化ung化ansplantation,LTx)已经成为药物或外科手术无法治疗的终末 期肺疾病的标准治疗方式。目前符合标准的供体肺数目已经无法满足移植需求，造成部分 患者在等待供肺的过程中死亡。目前可改善供肺短缺现状的方法中，离体肺灌注化X Vivo Lung Perfusion，E化P)是应用于肺移植领域一种延长供肺保存时间和修复供肺损伤的技 术。EVLP可W即时评估供体肺功能，为药物甚至基因治疗提供平台，改善"边缘供肺" (Marginal Donor Lungs)功能，增加了符合移植条件移植肺的数量，在一定程度上缓解了 供肺缺乏的现状。Steen等用基于perfadex液的灌流液应用于改善"边缘供肺"功能，3例"边 缘供肺"通过EVLP灌注(61~121min)后成功移植。由于国外优质的灌流液配方保密，国内的 肺灌流液的配方及配置工艺并不能满足移植供肺灌流的需要，肺保护和复苏作用不强，灌 流时间短是通常存在的问题。
【发明内容】
[0003] 本发明为解决现有技术中的上述问题提出的一种配制简单，同时肺保护和复苏作 用，且灌流时间长的用于移植供肺灌流的肺灌流液及其制备方法。
[0004] 为了实现上述技术目的，本发明所采取的技术措施为：
[0005] -种用于移植供肺灌流的肺灌流液，由纯化水、右旋糖巧20、氯化钢、氯化钟、硫酸 儀、无水憐酸氨二钢、憐酸二氨钟、葡萄糖、氯化巧、白蛋白、硝酸甘油、甲强龙、肝素钢、头抱 挫嘟钢及缓冲剂配置而成。
[0006] 为了进一步优化上述技术方案，本发明所采取的技术措施还包括：
[0007] 优选地，本发明的肺灌流液在配制中，W1L纯化水作为溶剂计，内含有40-60g右旋 糖巧20、6-10g氯化钢、0.2-0.6g氯化钟、0.09-0 . Ig硫酸儀、0.04-0.05g无水憐酸氨二钢、 0.06-0.07g憐酸二氨钟、0.8-0.9g葡萄糖、0.05-0.07g氯化巧、30-60g白蛋白、l-4mg硝酸甘 油、200-300mg甲强龙、4000-6000U肝素钢及0.4-0.6g头抱挫嘟钢，并使用Tri S-HC1缓冲剂 调节抑至7.4-7.6。。
[000引更加优选地，上述肺灌流液的配制中，W1L纯化水作为溶剂计，内含有50g右旋糖 巧20、8g氯化钢、0.4g氯化钟、0.098g硫酸儀、0.046g无水憐酸氨二钢、0.06?憐酸二氨钟、 0.9g葡萄糖、0.06g氯化巧、50g白蛋白、2mg硝酸甘油、250mg甲强龙、5000U肝素钢及0.5g头 抱挫嘟钢，使用Tris-肥1缓冲剂调节抑至7.5。
[0009] 另一方面，本发明还提供一种如权利要求1所述的用于移植供肺灌流的肺灌流液 的制备方法，包括W下步骤：
[0010] 步骤1，基本液的配制
[0011] 取右旋糖酢加热溶于纯化水中，依次加入氯化钢、氯化钟、硫酸儀、无水憐酸氨二 钢、憐酸二氨钟和葡萄糖，使用化is-肥1缓冲剂调抑至7.4-7.6,使用细菌滤器过滤，补入纯 化水定容，得到基本液；
[0012] 步骤2,预灌流液的配制
[0013] 向步骤1中得到的基本液中依次加入氯化巧、白蛋白及硝酸甘油，使用Tris-肥1缓 冲剂调抑至7.4-7.6，使用细菌滤器过滤，得到预灌流液；
[0014] 步骤3,制备肺灌流液
[0015] 向步骤2中得到的预灌流液加入甲强龙、肝素钢及头抱挫嘟钢得到用于移植供肺 灌流的肺灌流液。
[0016] 上述的制备方法中，步骤1中基本液的配制优选为:为取50g右旋糖酢20加热溶于 纯化水中，依次加入8g氯化钢、0.知氯化钟、0.09?硫酸儀、0.046g无水憐酸氨二钢、0.063g 憐酸二氨钟和0.9g葡萄糖，使用化i S-肥1缓冲剂调pH至7.4-7.6，使用细菌滤器过滤，补入 纯化水定容至1000ml，得到基本液。
[0017] 上述的制备方法中，步骤2中步骤2中预灌流液的配制为向所述步骤1中得到的基 本液中依次加入0.06g氯化巧、50g白蛋白及2mg硝酸甘油，使用Tr i S-肥1缓冲剂调抑至7.4- 7.6，使用细菌滤器过滤，得到预灌流液。
[0018] 上述的制备方法中，步骤3中制备肺灌流液为向所述步骤2中得到的预灌流液加入 250mg甲强龙、5000U肝素钢及0.5g头抱挫嘟钢得到用于移植供肺灌流的肺灌流液。
[0019] 进一步地，上述细菌滤器的孔径优选为0.22皿。
[0020] 本发明采用上述技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
[0021] 本发明提供的用于移植供肺灌流的肺灌流液，首先可W提供良好的肺保护和复苏 作用，能够满足移植供肺的灌流和保存需要;其次灌流时间较长，在经本发明的肺灌流液6 小时灌流后的供肺仍然能够保有良好的肺顺应性和氧合能力；最后，本发明的制备方法简 单，原材料容易获得且经济实惠，适合在一般的实验室或医院推广应用。
【具体实施方式】
[0022] 本发明提供了一种用于移植供肺灌流的肺灌流液，由纯化水、右旋糖巧、氯化钢、 氯化钟、硫酸儀、无水憐酸氨二钢、憐酸二氨钟、葡萄糖、氯化巧、白蛋白、硝酸甘油、甲强龙、 肝素钢、头抱挫嘟钢及缓冲剂配置而成。
[0023] 下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，W使更好的理解本发明， 但是下述实施例并不限制本发明范围。
[0024] 具体实施例包括制备实施例和验证实施例，采用的实验仪器和试剂如下所示：
[00巧]纯水机(Millipore,德国）；电子分析天平（Sartorius，德国）；体外循环机(Josha H20，Maquet，德国）；麻醉机（Detax Ohmeda，美国）；呼吸机（Detax Ohmeda， Generalelectric，美国）真空累（SHZ-D(虹）型，上海）；一次性无菌过滤器（MF75,美国 nalgene)。
[00%]右旋糖巧-20、氯化钢、氯化钟、硫酸儀、憐酸氨二钢(无水）、憐酸二氨钟、葡萄糖， (购自上海凌峰化学试剂有限公司）。
[0027] Tris-HCl缓冲剂(购自 sigma公司），牛血清白蛋白（A化umin from bovine serum， BSA，sigma)。
[0028] 硝酸甘油注射液(北京益民药业有限公司），甲泼尼龙班巧酸钢(辉瑞制药），肝素 钢注射液（上海第一生化药业有限公司），注射用头抱挫嘟钢（珠海联邦制药股份有限公 司）。
[0029] 实施例一肺灌流液的制备
[0030] 采用下述步骤制备用于移植供肺灌流的肺灌流液
[0031] 步骤1，基本液的配制
[0032] 取50g右旋糖酢加热溶于纯化水中，依次加入8g氯化钢、0.?氯化钟、0.09?硫酸 儀、0.046g无水憐酸氨二钢、0.063g憐酸二氨钟和0.9g葡萄糖，使用Tris-肥1缓冲剂调抑至 7.5，使用孔径为0.22皿的细菌滤器过滤，补入纯化水定容至1000ml，得到基本液；
[0033] 步骤2,预灌流液的配制
[0034] 向步骤1中得到的基本液中依次加入0.06g氯化巧、50g白蛋白及2mg硝酸甘油，使 用Tr is-HCl缓冲剂调抑至7.4-7.6，使用孔径为0.22皿的细菌滤器过滤，得到预灌流液；
[0035] 步骤3,制备肺灌流液
[0036] 向步骤2中得到的预灌流液加入250m巧强龙、5000U肝素钢及0.5g头抱挫嘟钢得 到用于移植供肺灌流的肺灌流液。
[0037] 实施例二本发明的肺灌流液的猪肺灌流实验
[0038] 获取猪的供肺，气管插管并连接到呼吸机。肺动脉和左屯、耳直接插管并连接到灌 注回路。两根灌注管先放平，倒出里面的液体，然后看测压管是否充满液体，可W流入粗的 灌注管内，此时打开Ξ接头管与大气相同，调零后再开始加入灌流液，开始灌注，灌注使用 实施例一制备得到的肺灌流液。
[0039] 刚开始循环溫度为12-13Γ，当灌注液的溫度达到32°C，进行呼吸机通气，氧浓度 为0.21 %，W7ml潮气量/公斤开始，7次呼吸/分钟和5cmH20 PEEP频率，肺的灌注液的脱氧 将用氮气(86%)，二氧化碳(8%)，和氧的气体混合物中开始(6%)dI:E(吸/呼比）=1:2。每 小时做一次血气和一次肺通气，间隔30分钟。做血气前5分钟：即55分时把呼吸机设置为潮 气量TV 7一 10ml/kg，P邸P 5，RR(呼吸频率)7一 10,氧浓度从21%升逐渐到100%。做完血气 后把氧浓度调回21%。测定肺动脉氧分压、左房氧分压、计算肺动静脉氧分压差，测定肺动 脉压和左房压，计算肺循环阻力。
[0040] 本实施例中，利用本发明的肺灌流液灌流猪离体供肺，使用3个不同的猪离体供肺 共进行了 3次重复试验，均采用如实施例一制备的肺灌流液，均同时进行肺循环阻力和肺动 静脉的氧分压差测定，结果如下表所示：
[0041 ]表1 Ξ次灌流实验中肺循环阻力和肺动静脉的氧分压差测定
[0042]
[0043] 由上表可W看出，使用本发明的肺灌流液进行灌流，不但灌流时间可W维持较长， 同时肺循环阻力和肺动静脉氧分压差均能达到预期效果。
[0044] 本发明提供的用于移植供肺灌流的肺灌流液，首先可W提供良好的肺保护和复苏 作用，能够满足移植供肺的灌流和保存需要;其次灌流时间较长，在经本发明的肺灌流液6 小时灌流后的供肺仍然能够保有良好的肺顺应性和氧合能力；最后，本发明的制备方法简 单，原材料容易获得且经济实惠，适合在一般的实验室或医院推广应用。
[0045] W上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限 制于W上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和 替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和 修改，都应涵盖在本发明的范围内。
【主权项】
1. 一种用于移植供肺灌流的肺灌流液，其特征在于，所述肺灌流液由纯化水、右旋糖苷 20、氯化钠、氯化钾、硫酸镁、无水磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、葡萄糖、氯化钙、白蛋白、硝酸甘 油、甲强龙、肝素钠、头孢唑啉钠及缓冲剂配置而成。2. 根据权利要求1所述的一种用于移植供肺灌流的肺灌流液，其特征在于，所述肺灌流 液的配制中，以IL纯化水作为溶剂计，内含有40-60g右旋糖苷20、6-10g氯化钠、0.2-0.6g氯 化钾、0 · 09-0 · Ig硫酸镁、0 ·04-0 · 05g无水磷酸氢二钠、0 · 06-0 · 07g磷酸二氢钾、0 · 8-0 · 9g葡 萄糖、0 · 05-0 · 07g氯化钙、30-60g白蛋白、l-4mg硝酸甘油、200-300mg甲强龙、4000-6000U肝 素钠及0.4-0.6g头孢唑啉钠，并使用Tris-HCl缓冲剂调节pH至7.4-7.6。3. 根据权利要求1所述的一种用于移植供肺灌流的肺灌流液，其特征在于，所述肺灌流 液的配制中，以IL纯化水作为溶剂计，内含有50g右旋糖苷20、8g氯化钠、0.4g氯化钾、 0 · 098g硫酸镁、0 · 046g无水磷酸氢二钠、0 · 063g磷酸二氢钾、0 · 9g葡萄糖、0 · 06g氯化H50g 白蛋白、2mg硝酸甘油、250mg甲强龙、5000u肝素钠及0 · 5g头孢唑啉钠，使用Tr i s-HCl缓冲剂 调节pH至7.5。4. 如权利要求1所述的用于移植供肺灌流的肺灌流液的制备方法，其特征在于，包括以 下步骤： 步骤1，基本液的配制 取右旋糖酐加热溶于纯化水中，依次加入氯化钠、氯化钾、硫酸镁、无水磷酸氢二钠、磷 酸二氢钾和葡萄糖，使用Tris-HCl缓冲剂调pH至7.4-7.6，使用细菌滤器过滤，补入纯化水 定容，得到基本液； 步骤2,预灌流液的配制 向步骤1中得到的基本液中依次加入氯化钙、白蛋白及硝酸甘油，使用Tris-HCl缓冲剂 调pH至7.4-7.6，使用细菌滤器过滤，得到预灌流液； 步骤3,制备肺灌流液 向步骤2中得到的预灌流液加入甲强龙、肝素钠及头孢唑啉钠得到用于移植供肺灌流 的肺灌流液。5. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1中基本液的配制为取50g右 旋糖酐20加热溶于纯化水中，依次加入8g氯化钠、0.4g氯化钾、0.098g硫酸镁、0.046g无水 磷酸氢二钠、〇. 〇63g磷酸二氢钾和0.9g葡萄糖，使用Tris-HCl缓冲剂调pH至7.4-7.6，使用 细菌滤器过滤，补入纯化水定容至1000ml，得到基本液。6. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中预灌流液的配制为向所 述步骤1中得到的基本液中依次加入〇.〇68氯化|丐、5(^白蛋白及211^硝酸甘油，使用1'1^-HCl缓冲剂调pH至7.4-7.6，使用细菌滤器过滤，得到预灌流液。7. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3中制备肺灌流液为向所述 步骤2中得到的预灌流液加入250mg甲强龙、5000u肝素钠及0.5g头孢唑啉钠得到用于移植 供肺灌流的肺灌流液。8. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述细菌滤器的孔径为0.22um。
【文档编号】A01N1/02GK105918308SQ201610277886
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年4月28日
【发明人】潘雁, 吴东进, 赵珩, 李欣, 叶波, 孙益峰, 顾畅
【申请人】上海市胸科医院