专利名称：一种提高真菌菌剂在土壤中生长和繁殖能力的方法
技术领域：
本发明涉及一种提高真菌菌剂在土壤中生长和繁殖能力的方法，属生物农药技术领域。
厚垣轮枝菌Verticillium chlamydosporium是用于防治植物寄生线虫的常用生防菌。目前国内外利用这种真菌开发的生防菌剂在国内外都已经商品化。对于解除土壤抑菌作用这一问题现在普遍采用的方法是将发酵后的菌体及发酵罐中残余的培养基直接用吸附剂吸附后烘干，然后做成产品，达到利用残余培养基中的的营养物质解除土壤抑菌作用的目的。这种方法有以下缺点由于所用的培养基成分经微生物的转化以后，培养基中的营养成分发生变化。这些营养成分虽然可以部份解除土壤抑菌作用，提高菌体的萌发力。但这些营养成分未经过筛选，也可以解除土壤对土壤中植物病原菌的抑制，从而可能加重植物病原菌的危害。此外，残余培养基的直接利用在制剂工业化生产中还会带来很多问题，如需要及时烘干，否则菌剂在保存期处于萌发和生长状态，从而降低产品质量。尽管营养物质能解除土壤抑菌作用，但现在通过加入营养解除抑真菌作用是盲目的，因为现在还没有弄清楚孢子萌发需要些什么特定的营养，解除抑真菌作用又与具体的什么营养有关。一种物质可以消除土壤对特定真菌的抑制作用，但并不适用于所有的真菌。
张克勤以厚垣轮枝菌ZK7菌株作为生防菌株，已经开发出杀线虫商品制剂“线虫必克”，农药登记号为LS 20011571，并且已经申请了专利(CN1297996A)。为了进张克勤以厚垣轮枝菌ZK7菌株作为生防菌株，已经开发出杀线虫商品制剂“线虫必克”，农药登记号为LS 20011571，并且已经申请了专利(CN1297996A)。为了进一步提高这一制剂在田间防治线虫的效果，我们研究了解除土壤抑制该制剂所需的营养物质和相应的使用方法，获得了满意的结果。
本发明通过以下步骤实现先用水将营养物质稀释，稀释倍数从十倍到一百倍，营养物质的成分是以下成分中的一种或是其中任何两种或两种以上成分按任何比例的混合糖蜜，玉米浆，玉米芯，木薯粉，红薯粉，大豆粉，农作物秸杆，葡萄糖，蔗糖，淀粉，棕榈酸、十八烷酸、柠檬酸。将稀释后的营养物质与厚垣轮枝菌菌剂混合，菌剂与稀释液混合的体积比为1∶1-50，混合后在18-30℃下放置20-50小时后施入土壤中。通过这样处理，菌剂的菌体在容器内的萌发率达到80％以上，在土壤中能够正常生长和定殖，从而取得良好的防治效果。
本发明适用于利用厚垣轮枝菌V.chlamydosporium ZK7菌株(于1999年9月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号CGMCC NO.0418)所开发的线虫生防制剂。
使用本发明促进ZK7制剂在土壤中的生长，提高制剂防治植物寄生线虫的实验实验一提高厚垣轮枝菌制剂ZK7菌株在土壤中的生长和繁殖能力的方法(1)取10ml营养物质原液(70％糖蜜，25％红薯粉，2.5％葡萄糖，2.5％蔗糖)于一容器内，用水稀释100倍，再用稀释液与厚垣轮枝菌ZK7制剂按体积比为10∶1的比例混合均匀，在容器上覆盖5层纱布，室温下放置36小时后，取样在光学显微镜下检测，结果菌体萌发率达86％。
(2)将经过上述处理的制剂施入大田土壤中，15天时取土样在半选择性培养基(葡萄糖5g，糖蜜5g，41％的硫苯唑37.5mg，50％的多菌灵25mg，链霉素50mg，孟加拉红琼脂28g，水1000ml，pH6.5-6.8)上回收施入土壤中的菌体，结果是每克土壤中厚垣轮枝菌的菌落数高达4×105，而对照(将菌剂直接施入土壤中)中每克土壤中厚垣轮枝菌的菌落数为1.5×102。实验二提高厚垣轮枝菌制剂在温室中防治烟草根结线虫的方法1.实验材料1.1制剂线虫必克粉剂(云南大学微生物发酵工程重点实验室提供，孢子含量为108/克)1.2营养物质20％糖蜜，15％玉米浆，10％玉米芯，10％红薯粉，5％大豆粉，0.1棕榈酸，0.1％十八烷酸，0.1％柠檬酸，2.5％葡萄糖。
2.方法将营养物质稀释50倍，取100毫升稀释液与200克制剂混合均匀，25℃下放置12h，将此处理过的菌剂与土壤按1∶20(V∶V)的比例混合，每个花钵(直径20厘米，深25厘米)装土200毫升，栽上番茄幼苗，每钵番茄土中接种花生根结线虫(Meloidogyne arenaria)二龄幼虫5000条，在温度为25℃的温室中培养，定期浇水。设置2组对照菌剂和土壤混合的对照(CK1)，不施菌剂的对照(CK2)。每处理设5个重复。
3.调查每月用平板记数法测定个处理中ZK7的CFU(每克土壤中的菌落数)；5个月后调查番茄感染根结线虫的病情指数，土壤中的幼虫数，平均每克根系的卵粒数，雌虫数。防治效果＝(对照线虫数-处理线虫数)/对照线虫数×100％，线虫数＝幼虫+雌虫。
4.实验结果(见表1)表1制剂对线虫的防治效果
表2实验中ZK7在土壤中的CFU
从表1可以看到使用菌剂对防治花生根结线虫都有明显的防治效果，与对照相比较能显著降低土壤中的线虫数量，根结线虫造成的危害明显比对照减轻。制剂未用营养物质处理的防治效果为46.6％，制剂用营养物质处理的防治效果为84.2％。此结果说明制剂经过营养物质的处理可以提高对根结线虫的防治效果。
从表2可以看出在施用制剂时是否用营养物质处理可以影响到制剂在田间的种群数量。未经营养物质处理的制剂在土壤中的CFU前90天处于102水平，之后降低，到150天后每克土壤中仅能分离到30个菌落。说明孢子在土壤中受到土壤的抑菌作用，只有少数孢子能够生长繁殖。而经过营养物质处理过的菌剂在土壤中一直保持较高的CFU数量，在104-105之间。说明该营养物质能较好地促进ZK7制剂在土壤中的生长繁殖。
本发明工艺简单，成本低，效率高。利用此方法可以大大提高这种常规生防制剂的菌体在大田土壤中的生长和繁殖能力，从而提高厚垣轮枝菌制剂对植物病原线虫的田间防效。
将营养物质(50％糖蜜，25％葡萄糖，25％红薯粉)从10倍到100倍稀释，将厚垣轮枝菌的菌剂分别稀释后的营养物质按1∶10的体积比混合，然后按
权利要求
1.一种提高真菌菌剂在土壤中生长和繁殖能力的方法，其特征在于在制剂施入土壤中之前，先用营养物质稀释液与菌剂混合，混合物在18-30℃下放置20-50小时后施入土壤中，其中1.1营养物质的成分是以下成分中的一种或是其中任何两种或两种以上成分按任何比例的混合糖蜜，玉米浆，玉米芯，木薯粉，红薯粉，大豆粉，农作物秸杆，葡萄糖，蔗糖，淀粉，棕榈酸、十八烷酸、柠檬酸；1.2水与营养物质的稀释倍数从十倍到一百倍，菌剂与稀释液营养物质混合的体积比为1∶1-50。
全文摘要
本发明涉及一种提高真菌菌剂在土壤中生长和繁殖能力的方法，属生物农药技术领域。本发明先用水将营养物质稀释，稀释倍数十倍到一百倍，营养物质的成分是以下成分中的一种或其中任何两种或两种以上成分按任何比例的混合糖蜜，玉米浆，玉米芯，木薯粉，红薯粉，大豆粉，农作物秸秆，葡萄糖，蔗糖，淀粉，棕榈酸、十八烷酸、柠檬酸。将稀释后的营养物质与厚垣轮枝菌制剂按1－50∶1的体积比混合，之后在18－30℃下放置20－50小时后施入土壤。本发明工艺简单，成本低，效率高，利用此方法可以提高生防制剂的菌体在大田土壤中的生长和繁殖能力，从而提高厚垣轮枝菌制剂对植物病原线虫的田间防效。
文档编号A01N63/04GK1473475SQ03117929
公开日2004年2月11日 申请日期2003年5月21日 优先权日2003年5月21日
发明者莫明和, 张克勤, 周薇 申请人:云南大学