专利名称：用于农作物病虫害防治的菌剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及农作物病虫害的防治药剂，特别是农作物病虫害防治的菌剂及其制备方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是用于农作物病虫害防治的菌剂，它为含有可由下述方法得到的产物的组合物(A)将枯草芽孢杆菌菌种放在发酵生产培养基上进行培养，检测菌液，当菌液中菌体80～90％形成芽孢时，终止发酵培养，得到枯草芽孢杆菌菌液；通过浓缩或添加填充剂的方式使枯草芽孢杆菌的活芽孢数达到80～100亿/ml；(B)将苏云金杆菌菌种放在发酵生产培养基上进行培养，检测菌液，当菌液中菌体80～90％形成芽孢，同时有5～15％芽孢晶体脱落时，终止发酵培养，得到苏云金杆菌菌液；通过浓缩或添加填充剂的方式使苏云金杆菌的活芽孢数达到80～100亿/ml；将(A)、(B)所得产物混合，制得所述的组合物；(A)、(B)所得产物占组合物总量的体积百分比分别为(A)所得产物5～90％，(B)所得产物5～90％。
用于农作物病虫害防治的菌剂的制备方法步骤(1)将砂土管枯草芽孢杆菌菌种挑入试管钭面培养基上培养，再转入克氏瓶钭面上培养；在三角烧瓶装液体培养基，高压灭菌后接入钭面菌种置于摇瓶培养；将菌种放在发酵生产培养基上进行培养，得到枯草芽孢杆菌菌液；步骤(2)将砂土管苏云金杆菌菌种挑入试管钭面培养基上培养，再转入克氏瓶钭面上培养；在三角烧瓶装液体培养基，高压灭菌后接入钭面菌种置于摇瓶培养；将苏云金杆菌菌种放在发酵生产培养基上进行培养，得到苏云金杆菌菌液；步骤(3)将枯草芽孢杆菌菌液和苏云金杆菌菌液混合；步骤(4)包装，成品。
本发明菌剂是一种复合菌剂，其有效成份含有枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)的芽孢；芽孢具有很强的抗逆性，故贮藏和施到田间效果稳定。由于两菌作用方式不同，所以彼此之间不相互干挠，不用考虑菌来源。其中苏云金杆菌经鳞翅目的害虫食入后，晶体在中肠分解释放出毒蛋白使害虫中毒，同时芽孢萌发侵入血淋巴繁殖，使害虫患“败血症”而死。枯草芽孢杆菌是一种广泛分布在土壤和植物体表的有益菌，它对营养的要求低，将它喷施在果、铃表面后，它会比病原菌繁殖更快，迅速定植，在与有害菌争夺营养和占领生存空间(生态位)中处于优势，同时它分泌的抗菌蛋白对有害菌有很强的拮抗作用，从而能阻止有害菌的繁殖和侵入寄主，减轻危害。使用本发明菌剂后，农作物的病虫害防治率达81％以上，农作物增产8％左右。
本发明菌剂的制备方法简单，加工成本低，成品便于贮运。
本发明将拮抗菌谱广、拮抗力强的枯草芽孢杆菌和杀多种鳞翅目害虫的苏云金杆菌组合在一起，制成混合菌剂，菌剂的有效成分是两种菌的芽孢子和发酵生产中菌的分泌物，枯草芽孢杆菌抗菌蛋白和苏云金杆菌的杀虫晶体蛋白。所以在农作物的蕾、果、铃期喷施，既可防病又能杀虫，能够预防由虫害和病菌侵入引起的棉铃和瓜果的腐烂等农作物病虫害，从而达到保铃、保果的目的，同时又不污染环境和产品。
步骤(2)将砂土管枯草芽孢杆菌菌种挑入试管钭面培养基上培养，再转入克氏瓶钭面上培养；在500ml三角烧瓶装液体培养基150ml，高压灭菌后接入钭面菌种置于转速为220转/分摇瓶培养，上述培养时间为3～4天；将菌种放在发酵生产培养基上，用常规发酵罐发酵装置生产，发酵通气量前期为1∶0.4wm、中期为1∶0.6wm、后期为1∶0.8wm，转速200转/分搅拌，检测菌液，当菌液中菌体80～90％形成芽孢时，终止发酵培养，得到枯草芽孢杆菌菌液。上述培养时的温度应控制在28～30℃之间。
步骤(3)将砂土管苏云金杆菌菌种挑入试管钭面培养基上培养，再转入克氏瓶钭面上培养；在500ml三角烧瓶装液体培养基150ml，高压灭菌后接入钭面菌种置于转速为220转/分摇瓶培养，上述培养时间为1～2天；将苏云金杆菌菌种放在发酵生产培养基上进行培养(发酵生产同上)，检测菌液，当菌液中菌体80～90％形成芽孢，同时有5～15％芽孢晶体脱落时，终止发酵培养，得到苏云金杆菌菌液；步骤(4)将通过浓缩方式使枯草芽孢杆菌的活芽孢数达到80～100亿/ml，得到A产物；将通过浓缩方式使苏云金杆菌的活芽孢数达到80～100亿/ml，得到B产物；在A、B产物中分别添加防腐剂——NaCl，再将它们混合；步骤(5)检测，添加乳化剂和增稠剂，包装，成品。
所述钭面菌种培养基可为a.蛋白胨1.0％，牛肉膏0.5％，葡萄糖0.5％，琼脂1.5～2.0％，其余为水。
也可为b.酵母浸出液0.5％，牛肉膏0.8％，葡萄糖1.0％，琼脂1.5～2.0％，其余为水。
所述液体菌种培养液可为a.蛋白胨1％，牛肉膏0.5％，葡萄糖0.5％，其余为水。
也可为b.酵母浸出液0.5％，牛肉膏0.8％，葡萄糖1.0％，其余为水。
所述发酵生产培养基可为a.蛋白胨牛肉膏培养液蛋白胨1％，牛肉膏0.5％，葡萄糖0.5％，K2HPO40.4％，MgSO40.2％，其余为水。
也可为b.胡萝卜培养液胡萝卜200g，葡萄糖20g，K2HPO40.4％(枯草芽孢杆菌用)，MgSO40.2％，其余为水。该培养液用于枯草芽孢杆菌的培养，菌数高且价廉。
也可为c.黄豆饼酵母培养液(苏云金杆菌用)黄豆饼粉3％，酵母粉0.3％，蛋白胨0.1％，淀粉0.8％，MgSO40.03％，CaCO30.1％，其余为水。
所述助剂包括a.防腐剂NaCl。用NaCl作为防腐剂，兼有一定的悬浮和防冻作用。
b.乳化剂吐温-80或特立通100号；d.增稠剂羧甲基纤维素(CMC)或聚乙烯醇(PVA)；e.消泡剂泡敌。
各助剂添加量占本发明菌剂体积百分比为防腐剂3～5％；乳化剂2～3％；增稠剂0.5％，消泡剂0.1％。
所述填充剂为轻质碳酸钙粉。
在上述工艺中，要用HCl或草酸调节PH值，菌种及发酵培养基(液)PH值为7.0～7.2，浓缩菌液及悬浮剂PH值为3～4。
用本发明制备方法实施方案1加工本发明菌剂的悬浮剂型，加工的过程中保留了发酵液，从而保留了枯草芽孢杆菌所分泌的抑菌蛋白和起助剂作用的枯草芽孢杆菌肽和枯草菌素，减少了助剂的用量，有增效的作用，而且减少了加工中过滤和干燥等程序，节省能源，增强了杀菌活性又降低了加工成本。
用本发明制备方法实施方案1制备的本发明菌剂的各组分占组合物总量的体积百分比分别为1、A产物5％，B产物90％，助剂5％；或2、A产物90％，B产物5％，助剂5％；或3、A产物45％，B产物45％，助剂10％。
如图2所示的本发明制备方法实施方案2，它生产的是本发明菌剂的可湿性粉型，其制备步骤为其步骤(1)、(2)、(3)与实施方案1的步骤(1)、(2)、(3)相同。
步骤(4)将枯草芽孢杆菌菌液用板框法过滤，添加填充剂，使枯草芽孢杆菌的活芽孢数达到80～100亿/ml，得到A产物；将苏云金杆菌菌液用板框法过滤，添加填充剂，使苏云金杆菌的活芽孢数达到80～100亿/ml，得到B产物；分别向A产物和B产物添加分别占A、B产物体积百分比为5～10％各种助剂(与实施方案1的助剂相同)、干燥至含水量5％以下、粉碎，再将它们按体积1∶1的比例混合。
步骤(5)磨细至粉末细度为100μm以下，检测，包装，成品。
本发明菌剂的可湿性粉剂型便于贮运。
本发明菌剂生产和使用注意事项1、生产中注意防噬菌体污染；2、菌种经常复壮和选育；3、本菌剂含有苏云金杆菌，故不能在养蚕区使用；4、本菌剂属芽孢杆菌制剂，故不能与杀菌农药混用。
权利要求
1.用于农作物病虫害防治的菌剂，其特征在于它为含有可由下述方法得到的产物的组合物(A)将枯草芽孢杆菌菌种放在发酵生产培养基上进行培养，检测菌液，当菌液中菌体80～90％形成芽孢时，终止发酵培养，得到枯草芽孢杆菌菌液；通过浓缩或添加填充剂的方式使枯草芽孢杆菌的活芽孢数达到80～100亿/ml；(B)将苏云金杆菌菌种放在发酵生产培养基上进行培养，检测菌液，当菌液中菌体80～90％形成芽孢，同时有5～15％芽孢晶体脱落时，终止发酵培养，得到苏云金杆菌菌液；通过浓缩或添加填充剂的方式使苏云金杆菌的活芽孢数达到80～100亿/ml；将(A)、(B)所得产物混合，制得所述的组合物；(A)、(B)所得产物占组合物总量的体积百分比分别为(A)所得产物5～90％，(B)所得产物5～90％。
2.如权利要求1所述的菌剂，其特征在于它还含有助剂，助剂占组合物总量的体积百分比为5～10％。
3.如权利要求2所述的菌剂，其特征在于助剂为防腐剂或乳化剂或增稠剂或消泡剂或它们之间的组合。
4.用于农作物病虫害防治的菌剂的制备方法，其特征在于步骤(1)将砂土管枯草芽孢杆菌菌种挑入试管钭面培养基上培养，再转入克氏瓶钭面上培养；在三角烧瓶装液体培养基，高压灭菌后接入钭面菌种置于摇瓶培养；将菌种放在发酵生产培养基上进行培养，得到枯草芽孢杆菌菌液；步骤(2)将砂土管苏云金杆菌菌种挑入试管钭面培养基上培养，再转入克氏瓶钭面上培养；在三角烧瓶装液体培养基，高压灭菌后接入钭面菌种置于摇瓶培养；将苏云金杆菌菌种放在发酵生产培养基上进行培养，得到苏云金杆菌菌液；步骤(3)将枯草芽孢杆菌菌液和苏云金杆菌菌液混合；步骤(4)包装，成品。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于枯草芽孢杆菌菌液和苏云金杆菌菌液分别经过浓缩、添加助剂后再混合。
6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于枯草芽孢杆菌菌液和苏云金杆菌菌液分别经过过滤、添加助剂、干燥、粉碎后再混合。
全文摘要
本发明涉及用于农作物病虫害防治的菌剂及其制备方法，其中菌剂的有效成份含有枯草芽孢杆菌和苏云金杆菌的芽孢；芽孢具有很强的抗逆性，故贮藏和施到田间效果稳定。由于两菌作用方式不同，所以彼此之间不相互干挠，不用考虑菌来源。其中苏云金杆菌经鳞翅目的害虫食入后，使害虫患“败血症”而死。枯草芽孢杆菌是一种广泛分布在土壤和植物体表的有益菌，它会比病原菌繁殖更快，迅速定植，在与有害菌争夺营养和占领生存空间(生态位)中处于优势，同时它分泌的抗菌蛋白对有害菌有很强的拮抗作用，从而能阻止有害菌的繁殖和侵入寄主，减轻危害，同时又不污染环境和产品。本发明菌剂的制备方法简单，加工成本低，成品便于贮运。
文档编号A01N63/00GK1473472SQ0312523
公开日2004年2月11日 申请日期2003年8月6日 优先权日2003年8月6日
发明者吴大椿, 别墅, 刘章勇 申请人:湖北省农业科学院, 湖北农学院