专利名称：大菱鲆口服免疫增强剂及配制方法
技术领域：
本发明属于海水鱼类配合饲料添加剂的配制技术，是提高大菱鲆抗病力的一种免疫增强剂配制方法。
大菱鲆(Scophthalmus maximus)原产于欧洲，1992年引进我国。目前工厂化养殖大菱鲆已成为我国海水养殖的重要产业。我国大菱鲆疾病的预防主要有药物预防和生态预防，前者存在诸如耐药性、药物残留、环境污染等问题，而后者在集约化程度较高的条件下往往难以达到预期效果。应用免疫增强剂可以提高鱼体非特异性防御机制，而不是特异性免疫反应，从而增强鱼体的抗病力。对于消费者和环境都没有负面影响，是有效的疾病预防方式。
已有的免疫增强剂，主要是灭活的细菌及细菌多肽、左旋咪唑、几丁质、多糖以及一些微量营养物质和激素等。作用的途径主要为浸泡、注射和口服。Villamil等(西班牙海洋调查研究所，2003)注射一种抗菌肽nisin，Santarem等(西班牙海洋调查研究所，1997)注射β-葡聚糖发现可以提高大菱鲆的抗病力。注射免疫增强剂多是利用它作为疫苗的佐剂，操作过程复杂，容易损伤鱼体、产生应激反应。未见利用营养元素和免疫物质相配合，作为大菱鲆饲料添加剂的报道。
本发明是按照以下操作方法完成的口服免疫增强剂的配料种类维生素E、亚硒酸钠与甲壳胺口服免疫增强剂的适宜用量维生素E为80～300mg/kg，亚硒酸钠为3～6.67mg/kg，甲壳胺为0.1～1g/kg在饲料配制过程中，首先要注意大菱鲆配合饲料的基料主配方，应该营养平衡，饲料配比合理及饲料原料优质、稳定，能够满足大菱鲆的营养需求。主配方为鱼粉40％、豆粕20％、花生粕10％、次粉20％、酵母5％、胆碱0.5％、卵磷脂0.5％、磷酸二氢钙2％、维生素预混料(不含VE)1％、矿物质预混料(不含硒)1％。各种原料按用量充分混匀后，加入VE80～300mg/kg，亚硒酸钠为3～6.67mg/kg，甲壳胺0.1～1g/kg，再次混匀，变异系数≤10％，再加入60g/kg的鱼油，充分混匀，以2％的褐藻酸钠做粘合剂，制粒后饲喂大菱鲆。
本发明技术与已有技术对比具有如下特点1.口服免疫增强剂的使用可以减少抗生素的应用，既提高了鱼类的非特异性防御机制，又减轻了对环境的污染。将微量营养素与免疫添加物相配合，比单独使用免疫添加物具有更长期的免疫效果，不容易出现免疫“疲劳”现象。
2.将配制的口服免疫增强剂应用到配合饲料中，大菱鲆的免疫力和抗病力都有所提高，生长速度比对照组提高25％，成活率提高30％。
最佳实施配方的配制过程首先对不同免疫增强剂的配伍及用量进行筛选，通过比较非特异性免疫指标、生长率、成活率以及感染实验的结果，进行综合评定，认为VE300mg/kg、亚硒酸钠6.67mg/kg和甲壳胺1g/kg相配合，效果最佳，其次为VE 80mg/kg、亚硒酸钠6.67mg/kg和甲壳胺0.5g/kg。
为了保证免疫增强剂的效果，必须确保饲料基料配比合理及饲料原料优质、稳定，所用饲料新鲜、无霉变、结块、虫害等，鱼粉为优质鱼粉，鱼油无酸败和氧化气味。所有饲料原料95％通过0.25mm孔试验筛。饲料配制过程中，各种原料按如下比例进行称量，鱼粉40％、花生粕10％、豆粕20％、次粉20％、酵母5％、胆碱0.5％、卵磷脂0.5％、磷酸二氢钙2％、维生素预混料1％(不含VE)、矿物质预混料1％(不含硒)，充分混匀，加入VE300mg/kg、亚硒酸钠6.67mg/kg和甲壳胺1g/kg，再次混匀，变异系数≤10％，再加入60g/kg的鱼油，充分混匀，以2％的褐藻酸钠做粘合剂，制粒后饲喂大菱鲆。
完成上述配制过程具体操作如下1、口服免疫增强剂配方的筛选本试验采用6种不同配方的免疫增强剂，所用配合饲料基料相同，进行了3个月的喂养试验，每隔30天对大菱鲆的非特异性免疫指标、增重率、成活率指标进行测定，投喂试验结束后，进行细菌感染实验。
免疫增强剂的6种试验组配方配方1维生素E为80mg/kg，亚硒酸钠为3.0mg/kg，甲壳胺为0.5g/kg配方2维生素E为80mg/kg，亚硒酸钠为3.0mg/kg，甲壳胺为1.0g/kg配方3维生素E为300mg/kg，亚硒酸钠为3.0mg/kg，甲壳胺为1g/kg配方4维生素E为80mg/kg，亚硒酸钠为6.67mg/kg，甲壳胺为0.5g/kg配方5维生素E为300mg/kg，亚硒酸钠为3.0mg/kg，甲壳胺为0.5g/kg配方6维生素E为300mg/kg，亚硒酸钠为6.67mg/kg，甲壳胺为1g/kg(1)、对大菱鲆的非特异性免疫指标测定从表1可看出大菱鲆饲料中添加免疫增强剂与对照组(未添加免疫增强剂)相比血清溶菌酶活性均有提高，在前2个月内随着时间的推移，添加免疫增强剂组的血清溶菌酶活性有增加的趋势，但到第三个月第2组、第3组及第5组的溶菌酶活性有下降趋势，出现所谓的“疲劳”现象。从血液白细胞总数来看，添加免疫增强剂组与对照组相比均有提高，而且随着时间的推移白细胞总数有增加的趋势。试验组白细胞吞噬率均有提高，在前2个月内随着时间的推移，添加免疫增强剂组的白细胞吞噬率有增加的趋势，但到第三个月添加免疫增强剂的实验组白细胞吞噬率大多呈下降趋势，出现“疲劳”现象，这与其它鱼种获得的结果有相似之处，只有第6组继续保持增长的趋势。试验期间大菱鲆饲料中添加免疫增强剂，其血清补体活性与对照组相比均有提高，在前2个月内随着时间的推移，添加免疫增强剂组血清补体活性明显增加，第3个月除第3组外，其它实验组血清补体活性有明显增加。
表1口服免疫增强剂对大菱鲆免疫指标的影响 (2)、对大菱鲆增重率和成活率指标测定试验期间大菱鲆增重率和成活率如表2所示，实验组增量率明显优于对照组，说明所用免疫增强剂对大菱鲆增重同样有促进作用。试验后期增重率降低可能是温度降低所致。试验期间试验组和对照组的大菱鲆成活率较相似，故使用免疫增强剂对大菱鲆成活率无不良影响。
表2免疫增强剂对大菱鲆增重率和成活率的影响
(3)、免疫增强剂对抵抗细菌感染的观察试验表3免疫增强剂对抵抗细菌感染的观察试验
免疫增强剂对抵抗细菌感染的观察试验结果表明(表3)，未投喂免疫增强剂的大菱鲆在注射细菌51.5小时内全部死亡，而投喂免疫增强剂的各组都显示出推迟死亡的现象，投喂免疫增强剂第4和第6两组在感染87小时后，仍有17％的成活率。由此可以看出，该免疫增强剂对抵抗细菌感染有较好效果。
综上所述，试验组6的效果最好，它的配方组成为VE300mg/kg、亚硒酸钠6.67mg/kg和甲壳胺1g/kg相配合对大菱鲆血清溶菌酶活性、血清补体活性、血液白细胞总数、白细胞吞噬率、增重率均有提高，也对大菱鲆抵抗细菌感染、提高成活率有较好效果。2、口服免疫增强剂的配制及应用效果在大菱鲆配合饲料的基料主原料中加入300mg/kgVE、亚硒酸钠6.67mg/kg和1g/kg甲壳胺，逐级扩散、充分混合均匀，变异系数≤10％，再加入60g/kg的鱼油，充分混匀，以2％的褐藻酸钠做粘合剂，制粒后饲喂大菱鲆。在荣成好当家养殖场进行应用试验，试验用大菱鲆4000尾，平均体重20g左右，养殖密度为70～20尾/m2，进行充气流水养殖，日换水量为300％，试验期间DO＞6.0mg/L、pH＝7.8～8.1、T＝16～20℃。每日投饵2次，测量水温2次，吸残污1次。经过一个养殖周期，可使大菱鲆的增重率提高25％，存活率提高30％。
权利要求
1.一种大菱鲆口服免疫增强剂，其特征在于它的配料种类是由维生素E、亚硒酸钠和甲壳胺组成，它的配料配比是维生素E为80-300mg/kg、亚硒酸钠为3-6.67mg/kg、甲壳胺为0.1-1g/kg。
2.一种大菱鲆口服免疫增强剂配制方法，它是由大菱鲆配合饲料基料和口服免疫增强剂混合而成，其特征在于它的配制方法是配合饲料的基料按用量充分混匀后，加入维生素E 80-300mg/kg、亚硒酸钠为3-6.67g/kg、甲壳胺为0.1-1g/kg，予以混匀，变异系数≤10％；再加入60g/kg的鱼油，再次充分混匀，以2％的褐藻酸钠做粘和剂，制粒后饲喂大菱鲆。
全文摘要
一种大菱鲆口服免疫增强剂及配制方法，配料种类和配比维生素E80～300mg/kg，亚硒酸钠3～6.67mg/kg和甲壳胺0.1～1g/kg。配制方法是将各种配料按用量充分混匀，然后按配方加入维生素E、亚硒酸钠和甲壳胺，再次混匀，变异系数≤10％，再加入60g/kg的鱼油，充分混匀，以2％的褐藻酸钠做粘合剂，制粒后饲喂大菱鲆。经生产性试验，大菱鲆的免疫力和抗病力都有所提高，生长速度比对照组提高25％，成活率提高30％。口服免疫增强剂的使用可以减少抗生素的应用，既提高了鱼类的非特异性防御机制，又减轻了对环境的污染，适宜大菱鲆大规模实际养殖生产应用。
文档编号A23K1/16GK1473489SQ0313882
公开日2004年2月11日 申请日期2003年7月18日 优先权日2003年7月18日
发明者常青, 梁萌青, 王印庚, 常 青 申请人:中国水产科学研究院黄海水产研究所