专利名称：纳米硒枣苗工厂化快速高效育苗技术的制作方法
技术领域：
本发明涉及的是纳米硒功能保健枣苗工厂化快速高效育苗技术。
背景技术：
当前，国际国内果树生产中，为了克服病毒和类菌质体病害对果树生产带来的威胁，对无病毒的培养愈来愈受到重视。特别是在大果型、鲜食型和晚熟耐贮型枣树的快速发展，对具有功能保健枣苗需求量大，供不应求的情况下，利用枣细胞的全能性和再生性，通过组织培养、绿枝扦插等方法快速繁殖，实现工厂化生产更具有特殊应用价值。
生物有机态纳米硒较无机化合硒，具有高生物活性和高安全性特点，将在免疫调节、抗氧化能力、抗癌、防衰及″现代文明病″发挥预防和医疗功能。纳米硒具有促进枣细胞生长，增强抗氧化能力和抗逆性作用。因此，枣是纳米硒的理想生物载体。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用组织培养和绿技扦插相配套的工厂化快速繁殖技术生产无病毒枣苗，以期提高纳米硒功能保健枣的产量和质量，满足因缺硒而引起的各种″现代病″患者的预防和辅助医疗需求。
本发明将提供生产20万株工厂化快速育苗技术，其特征在于包括无病毒组培试管苗与绿枝扦插相配套的快繁育苗技术。
1、组织培养快速育苗的生产流程与技术。
(1)建立优异枣种质采穗圃。是由4个枣树种质所组成，即①枣种质(I)干、鲜兼用种。柱形、平均果重24g，制干率50％，含糖量68％，叶厚，卵园形，抗逆性强；②枣种质(II)晚熟鲜食种。园形，平均果重14.7g，果肉细致，含糖量32.6％，质优。种仁饱满，叶长园，花萼长与宽相近，10月中下旬成熟；③枣种质(III)特大果型鲜食种。椭园形，平均果重36g，叶长卵园形。有效花期70～80天，结果早，精品率高，增产潜力大。36℃高温正常生长，-25℃安全越冬，适应性强；④枣种质(V)制干枣，柱形，果皮厚，深红色，含糖量73％，制干率58％。核内无仁，叶厚，长卵园。抗旱、寒、病虫、裂果，耐瘠薄、贮运。
(2)准备车间①培养基的制备。按每100升培养基可接种继代增殖芽1.2～1.5万计，10万支试管苗需要1800～2000升培养基。
②初代培养。剪取枣头枝顶芽2cm，清水冲洗数小时→无菌水冲洗→70％乙醇灭菌5～10分钟→5％次氯酸纳灭菌10～20分钟→0.1％Hgci2消毒8分钟→无菌冲洗4～5次。在无菌条件下剥取了顶芽茎尖0.1～0.8m.m的生长点，带芽茎尖接种在Ms+6-BA0.5～2.4mg/∠+kT02～1.5mg/∠+纳米Se0.1～1.5mg/∠+抗坏血酸50～100mg/∠+2，4-D0.1～0.8mg/∠诱导培养基。抑制因酚类氧化所造成褐变污染，应及时将培养成活的组织块，移到成份相同的新鲜培养基上成为无菌试管苗，进行初代培养。
(3)继代快繁车间。初期急需扩繁基础芽量。转接在Ms+6-BA0.8～1.9mg/∠+IBA0.2～1.5mg/∠+纳米Se0.1～2.5mg/∠+3％蔗糖种殖培养基，进行从芽增殖，加大增殖系数。继代周期应＜30天，每次继代增殖系数＞5，通常增殖系数掌握在3～8。增殖系数＜3，生产率过低，生产成本提高；增殖系数＞8，增殖芽过多，可生根的壮苗减少，难以获得优质苗，直接影响生根质量和成活率。在继代增殖4～5代后，开始边增殖，边诱导生根。
(4)诱导生根车间。采用1/2Ms+纳米Se0.1～6mg/∠+IBA0.2～2.4mg/∠+IAA0.2～1.5mg/∠+3％蔗糖，PH5.8～6.7的生根培养基，生根温度23～26℃。暗培养3～5天，每日13小时，光照强度1200～2600Ix。继代后，所形成能诱导生根的绿茎与继代增殖芽的比例不应少于1∶3，每次继代后，可供生根诱导的至少应有1/3的芽抽生绿茎(大于1～2cm)。丛芽增殖后，必须通过壮苗培养取得更高比例的可诱导生根的绿茎，后期基础芽量出现过剩，应增加可供诱导生根的绿茎比例。诱导生根以20～30天为宜。生根时间长，极易污染培养基，且发根不齐影响枣苗的整齐度，给集中移栽带来困难，发根太少，降低成活率，生根率低，加大经营成本，对规模生产不利。
(5)驯化练苗车间(温室)。试管苗每株已有3～4条根，根长1cm，根系健壮，苗色由浅绿转变成深绿时，应及时转移至冬暖大棚(温室)，锻炼3天后，开瓶取苗，洗净根部琼脂，试管苗由异养转为自养。因此，培育壮苗是工厂化的关键。采取固体壮苗方法。先在10～100mg/∠的IAA液蘸3秒钟，栽入蛭石基质或直接栽植畦面(通透性良好的肥沃壤土)。栽前，用0.3％高锰酸钾液消毒后，浇透水；栽后，用800倍多菌灵喷洒。环境湿度应保持在90％以上，采取微膜复盖+50％遮阳网保湿，移栽初期，每日喷水5～6次，一周后3～4次，每隔3天补充一次1/4Ms营养液，每周喷一次多菌灵液。环境温度控制，掌握日温25℃，夜温12～20℃，光照强度2600lx，每日光照13小时。10～12天撤盖膜，3周撤遮阳网。再用120～300mg/∠GA3喷施幼苗，可缩短缓苗期，提高成活率。
温室练苗应＜40天。2月下旬移植营养钵(塑制8×8CM)或直栽苗圃，3月有新生芽长出便可转栽苗圃，分批移栽驯化至8月。
(6)苗圃培育壮苗。选择地势平坦，灌排方便的肥沃疏松壤土地作苗圃，667M2施优质厩肥5000Kg，精细整地。地温15℃后，将3～4月试管苗按667M2栽植8000株(营养钵)，采取宽窄行种植，株行距因地而异，行向南北，铺地膜增温保墒。追肥3次(萌芽、开花前和幼果膨大)，结合追肥浇水4～5次，根外追肥4次，第一年不追化肥。及时中耕、防治蚜虫等病虫，当年可长到80～100CM，已达商品苗规格。
2、绿枝扦插快繁育苗技术(1)扦插苗床的置备。苗床长25M，宽2M，高25cm。床内铺净河沙15～20cm。上复塑料拱棚。浇透水→曝晒干透→浇透水→喷0.1％高锰酸钾消毒灭菌液。
(2)培育二年生优异种质苗(兼作二级采穗圃)。6月从圃内原种一代或原种二代植株，选取健壮半木质化枣头，截成15cm技段，每段保留2～3片完整叶，上端距顶芽1cm平剪，下剪成马蹄形，速蘸生根液3～5秒钟，立即全光照雾插苗床(深3～5cm)，迅速喷雾3～5秒钟，喷雾时间依温度而定，叶面水膜面积＞1/2～1/3。生根后不再喷雾，练苗1～2周后移栽苗圃，精心管理与苗圃要求相同。
本法可同时生产10～12万个绿枝插穗成苗。实现快速高效繁殖，提供成活率高的无病毒原种枣苗，大幅度降低生产成本。
四、实施范例1、组培试管苗工厂化育苗技术(1)准备车间
①培养基的制备。按每100升培养基可接种继代增殖芽1.2～1.5万个。10万支试管苗需准备1800～2000升培养基。
②从优异枣种质(I)号株，采0.6mm以下茎尖，经严格灭菌消毒后，接种在Ms+6-BA0.5～2.4mg/∠+KT 0.2～1.5mg/∠+纳米Se0.1～1.5mg/∠+抗坏血酸50～100mg/∠+2，4-D0.1～0.8mg/∠+3％蔗糖诱导培养基，经采取防褐变方法后进行初代培育。
(2)继代快繁车间。茎尖长成幼苗后，转接在Ms+6-BA0.8～1.9mg/∠+IBA0.2～1.5mg/∠+纳米Se 0.1～2.5mg/∠+3％蔗糖增殖培养基，增殖温度26～28℃光照强度1200～2000，每日光照12小时。继代周期应＜30天，增殖系数控制在3～8，在继代4～5代后，采取边增殖边诱导生根。
(3)诱导生根车间。采用1/2Ms+纳米0.1～6mg/∠+IBA 0.2～24mg/∠+IAA0.2～1.5mg/∠+3％蔗糖，PH5.8～6.7生根培养基，生根温度23～26℃，暗培养3～5天，每日13小时，光照强度1200～2600，每次继代后，至少有1/3以上芽已抽生绿茎(＞1～2cm)可供诱导生根，试管苗生根每批需40天左右。
(4)驯化练苗车间(温室)。培育壮苗是试管苗移出后，由异养转换为自养的关键。试管苗生根后，苗叶由浅绿转成深绿色，及时移入温室，经3天练苗后，洗净根部琼脂，先在10～100mg/∠IAA液蘸根3秒钟，随即栽入蛭石基质或直接栽植畦面。栽前，用0.3％高锰酸钾消毒后，浇透水，栽后，再喷800倍多菌灵液。用50％遮阳网+微膜复盖保湿(＞90％)，在日温25℃，夜温在12～20℃，光照强度2600，每日光照13小时，移栽初期，每日喷水5～6次，一周后3～4次，隔3日补一次1/4Ms营养液，每周喷一次多菌灵液，10～12天撤复膜，3周撤遮阳网。条件允许时，加设地热线或用马粪温床，提高地温，诱发新生不定根，再用120～300mg/∠GA3喷洒幼苗，可缩短缓苗期，提高成活率。
温室驯化练苗＜40天。2月下旬移植营养体(塑制8×8cm)，3月有新叶长出便可栽入苗圃，分批移栽练苗至8月。
(5)苗圃培育壮育。667M2施优质厩肥5000Kg，栽8000营养钵苗，采取宽窄行种植，株行距因地制宜，行向南北，铺地膜，追肥3次(萌芽、开花前、幼苗膨大)结合追肥浇水4～5次，喷叶面肥4次，第一年不追化肥。及时防治蚜虫等病虫、中耕。当年可长到80～100cm商品苗。
2、绿枝扦手插速育苗技术(1)扦插苗床的置备。苗床长25M，宽2M，高25cm。床内铺15～20cm净河沙。上复塑料拱棚，浇透水→曝晒干透→浇透水→喷消毒灭菌液。
(2)培育二年生优异种质苗(兼作二级采穗圃)。6月从圃内原种一代或原种二代植株，选取健壮半木质化枣头，截成15cm技段，每段保留2～3片完整叶，上端距顶芽1cm平剪，下剪成马蹄形，速蘸生根液3～5秒钟，立即全光雾插苗床(深3～5cm)，迅速喷雾3～5秒钟，喷雾时间依温度而定，叶面水膜面积＞1/2～1/3。生根后不再喷雾，练苗1～2周后移栽苗圃，精心管理与苗圃要求相同。
本法可同时生产10～12万个绿枝插穗苗。实现快速繁殖，提供成活率高的无病毒原种枣苗，大幅度降低生产成本。
权利要求
1.一种纳米硒枣苗组织培养的工厂化生产技术，其特征是由组织培养试管苗和绿枝扦插相配套的工厂化快凡高效技术，生产无病毒纳米硒枣苗。
2.根据权利要求1所述组织培养工厂化快繁技术，其生产流程的特征是(1)优异枣种质采穗圃。是由4个枣种质所组成，即①枣种质(I)干、鲜兼用种。柱形、平均果重24g，制干率50％，含糖量68％，枣核沟纹深，叶厚，卵园形；②枣种质(II)晚熟鲜食种。园形，平均果重14.7g，果肉细致，含糖量32.6％，质优。枣核沟纹浅，种仁饱满。叶长园，花萼长与宽相近。10月中、下旬成熟；③枣种质(III)鲜食特大果型。椭园形，平均果重36g。叶长卵园。有效花期70-80天，结果早，精品率高，增产潜力大。36℃高温正常生长，-25℃安全越冬，适应性强；④枣种质(V)制干枣。柱形，果皮厚，深红色，含糖量73％，制干率58％。核内无仁。叶厚，长卵园。抗寒、旱、病虫、裂果，耐瘠薄、贮运。(2)准备车间。剥取0.1-1.5mm枣头茎尖，经严格消毒后，接种在MS+6-BA0.5～2.4mg/L+KT0.2～1.5mg/L+纳米se0.1～1.5mg/4+2，4-D0.1～0.8mg/L+抗坏血酸50～100mg/L。抑制因酚类氧化所造成褐变污染，进行初代培养。(3)继代快繁车间初期，急需扩繁基础芽量，转接MS+6-BA0.8～1.9mg/L+IBA0.2～1.5mg/L+纳米se0.1～2.5mg/L+3％蔗糖的增殖培养基。继代周期＜30天，增殖系数3-8，继代增殖4-5代后，边增殖，边诱导生根。(4)诱导生根车间。采取1/2MS+纳米se0.1～6mg/L+IBA0.2～2.4mg/L+IAA0.2～1.5mg/L+3％蔗糖，PH5.8～6.7的生根培养基.培养温度23～26％℃，暗培养3～5天，每日13小时，光照强度1200～2600lx(勒克司)。每次继代后，可供诱导生根至少应有1/3芽抽出绿茎(＞1～2cm)。(5)驯化练苗车间(温室)。试管苗已有3～4条根，根茎1cm，根健壮，叶色由浅绿色转为深绿色时，应移入温室锻练3天。培育壮苗是工厂化关键。根洗净后，先在10～100mg/LIAA液蘸根3秒钟，移入蛭石基质，或直接畦面栽植，微膜复盖+50％遮阳网，保湿(＞90％)，在日温25℃，夜温12～20℃每日13小时，光强2600lx。(6)苗圃培育壮苗。667m2优质厩肥5000kg，栽8000营养钵苗，采取宽窄行种植，株行距因地制宣。铺地膜，追肥3次(萌芽、开花前和幼果膨大)结合追肥浇水4-5次。喷叶面肥4次(第一年不宜追化肥)。行向南北，加强肥水管理，及时中耕、防治蚜虫等病虫。当年可长成80～100cm商品苗。
3.根据权利要求1所述，绿枝扦插快繁育苗技术，其特征是(1)扦插苗床置备。苗床长25m，宽2m，高25cm。床内铺15～20cm净河沙，浇透水后曝晒，干透后再浇透水，用0.1％高锰酸钾液消毒再喷800倍多菌液。(2)培育二年生优异种质枣树(兼作二级采穗圃)。6月从圃中原种一代或二代植株，选取健壮半木质化枣头，剪掉二次枝，截成15cm枝段，每段留2～3叶，上端距顶芽1cm，下端剪成马蹄形，蘸生根液(IAA800～1500mg/∠+NAA1500～2000mg/∠3～5秒钟，立即全光雾插(深3～5cm)后，喷雾(3～5秒钟)，叶面水膜面积应＞1/2～1/3，生根后停止喷雾，练苗1～2周后，转到苗圃，精心管理。本法可同时生产绿枝插穗苗10～12万株。
全文摘要
本发明涉及一种果树的组织培养快繁育苗技术，尤其是涉及保健枣苗的组织培养和绿枝扦插相配套的工厂化快繁高效技术。根据生物工程原理，建立优异种质采穗圃，通过改良培养基的配制，经茎尖初代培养，继代快速增殖、诱导生根、驯化练苗和培育壮苗等生产流程，结合运用优异枣种质的二年生原种一代或二代植株，进行绿枝扦插，实现产业化工厂快速高效育苗。本发明的工厂化快速育苗技术，具有科技含量高，培养基配方科学，生产流程先进，繁殖效率高，经济效益好的特点。是优良果树高速育苗的首选，可为大规模保健枣基地建设，年提供10万株脱毒优质商品苗和10－12万株无病毒健壮绿枝扦插枣苗。生产纳米硒功能保健枣，将会在抗癌、防衰及因缺硒而导致的各种“现代病”发挥预防和辅助医疗功效。
文档编号A01H4/00GK1689401SQ20041001917
公开日2005年11月2日 申请日期2004年5月1日 优先权日2004年5月1日
发明者余华盛 申请人:余华盛