蝴蝶兰优质种苗快速繁殖方法

专利名称：蝴蝶兰优质种苗快速繁殖方法
技术领域：
本发明涉及蝴蝶兰的优质种苗快速繁殖方法和所使用的培养基。
背景技术：
蝴蝶兰(Phalaenopsis)又称蝶兰，是兰科植物中栽培最广泛、最普及的种类之一，被誉为“兰花皇后”。本属植物全世界约有40多个原生种，我国有6个原生种，但由于人们对野生资源的的过度采伐，其中大部分野生原生种现在已很难找到，蝴蝶兰原生种也已被世界野生植物保护组织列为世界十大濒危保护植物物种之一。目前，市面上千姿百态、花大色艳的蝴蝶兰观赏种多为杂交种，并且能与其它属杂交形成属间杂交种，如与朵丽兰(Doritis)杂交形成属间杂交种Doritaenopsis(缩写为Dtps.)。由于杂交种花期长，花色艳丽，花姿优雅，生长势强，深受各国人们的喜爱，是一种十分名贵的室内花卉，它既可作切花又可盆栽观赏，近几年在我国十分流行。蝴蝶兰的大规模商品化生产在我国台湾、日本等地相当成功，每年都有成百上千个新品种投入市场并出口。我国大陆蝴蝶兰工业起步较晚，但现在全国各地已有许多生产蝴蝶兰的单位或公司，然而，我国的蝴蝶兰种苗多从台湾或日本等地进口或这些公司在我国大陆生产，我国大陆具有自产知识产权的蝴蝶兰品种较少，生产的蝴蝶兰种苗质量较差。
蝴蝶兰属于单茎性气生兰，侧芽极少发育，分株繁殖系数极低。其主要繁殖方法采用无菌播种和通过原球茎、愈伤组织等再诱导不定芽繁殖。但优质蝴蝶兰杂交种利用无菌播种繁殖时，后代会发生分离，不能保持母体的优良性状和种苗的同一性。而采用原球茎、愈伤组织等再诱导不定芽繁殖种苗时，会增加种苗的变异系数。本发明专利以蝴蝶兰的花梗节段为外植体，利用独特的培养基诱导出花梗苗，再以花梗苗的茎尖或茎段进行丛生芽为增殖，生产出优质的蝴蝶兰种苗，为满足市场的需要提供一条有效的途径。
目前，国内外对蝴蝶兰的无菌播种播种和组织培养进行了较多的研究，但未有通过丛生芽途径进行蝴蝶兰优质种苗快速繁殖和大规模生产的报道。

发明内容
蝴蝶兰的繁殖常采用无菌播种和组织培养，但无菌播种和以原球茎途径进行繁殖时不能保存亲本的优良性状。本发明的目的是通过以蝴蝶兰的花梗节段为外植体，利用独特的培养基诱导出花梗苗，再以花梗苗的茎尖或茎段进行丛生芽为增殖，生产出优质的蝴蝶兰种苗，用丛生芽途径进行蝴蝶兰优良品种的织培养，获得大量性状稳定的试管苗，为满足蝴蝶兰优质种苗市场的需要提供一条有效的途径，本发明还提供多种蝴蝶兰杂种的丛生芽组织培养繁殖方法和所使用的培养基，及对外植体的选择。
本发明所述的蝴蝶兰优质种苗快速繁殖方法包括如下步骤1.材料本发明所用的材料有满天红(Dtps.Queen Beer“Red Sky”、超级红(Phalaenopsis Super-Red)等，材料均取自华南植物园。
2.外植体的消毒取蝴蝶兰花芽的花梗，用自来水冲洗干净后，剪取具有休眠芽的节段2-3厘米，在超净工作台上用70％的酒精浸泡1分钟，再用0.1％升汞溶液灭菌15分钟，无菌水冲洗5次后，用无菌吸水纸吸干，剪去切口两端各0.5厘米，切成长1-2厘米带休眠芽的切段接种在花梗苗诱导培养基上。
3.花梗苗的诱导花梗苗的诱导培养基为VW+6-苄基嘌呤5-20毫克/升+萘乙酸0.5-1.0毫克/升+柠檬酸钠50-200毫克/升，15天左右休眠芽启动生长，在培养温度(20±2)℃时发育成花芽，在培养温度(28±2)℃时多形成带叶的花梗苗。培养基含蔗糖15克/升，pH5.5-5.8，琼脂0.7％。光照度1500～2000lx，光照12小时/天。加入柠檬酸钠能明显抑制褐变，提高花梗苗的生长速度。
4.丛生芽增殖培养40天时，花梗苗高1-2厘米，剪去部分叶片转移到丛生芽增殖培养基MS+6-苄基嘌呤5-20毫克/升+萘乙酸0.5-1.0毫克/升+柠檬酸钠50-200毫克/升+15％椰子水+蔗糖30克/升培养基上能诱导丛生芽形成，椰子水由新鲜上市的椰子中的汁水经过滤而来，加入椰子汁能明显提高丛生芽的出芽和增殖速度。诱导出的不定芽丛分割成单个芽或几个芽一丛，接种在相同培养基上增殖。增殖过程中如果有原球茎形成，需降低6-苄基嘌呤的浓度。
5.生根培养丛生芽增殖多代后，可将丛生芽切割成单个芽，接种在含花宝一号(Hyponex 1)3克/升+蔗糖15克/升+香蕉汁100克/升+马铃蓍50-100克/升+活性碳2克/升的生根培养基上进行生根培养。40天左右能形成株高3-4厘米的完整植株。加入活性炭有利于植株生长粗壮并能防止褐变。
6.试管苗移栽春季与秋季为移栽的适宜季节。试管苗移栽时，将蝴蝶兰小苗从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，在0.1％的高锰酸钾溶液中浸泡5分钟后凉干，以小塑料盆为栽培容器，以浸泡过的新鲜水藓为栽培基质，保持适当通风和足够的湿度，移栽的成活率均可达98％-100％。
本发明生产出的蝴蝶兰种苗具有遗传稳定性高，出苗快，苗壮，种苗品质好、抗性强、生长良好等优势。本发明利用蝴蝶兰的花梗为外植体，采用独特的培养基进行丛生芽增殖并获得优质种苗的方法，技术简单实惠，切实可行，应用价值高。蝴蝶兰是兰科植物中栽培最广泛、最普及的种类之一，被誉为“兰花皇后”。其杂交种具有花期长，花色艳丽，花姿优雅，生长势强等特征，深受各国人们的喜爱，是一种十分名贵的室内花卉，它既可作切花又可盆栽观赏，近几年在我国十分流行，种植量大。我国大陆具有自产知识产权的蝴蝶兰品种较少，生产的蝴蝶兰种苗质量较差。如果生产出优质的蝴蝶兰种苗，市场前景广阔。
具体实施例方式
实施例11.取材蝴蝶兰品种夕阳红(Phalaenopsis Taida Salu″夕阳红”)2.外植体的消毒取满天红花芽的花梗，用自来水冲洗干净后，剪取具有休眠芽的节段2-3厘米，在超净工作台上用70％的酒精浸泡1分钟，再用0.1％(重量百分比)升汞溶液灭菌15分钟，无菌水冲洗5次后，用无菌吸水纸吸干，剪去切口两端各0.5厘米，切成长1-2厘米带休眠芽的切段接种在花梗苗诱导培养基上。
3.花梗苗的诱导花梗苗的诱导培养基为VW+6-苄基嘌呤10毫克/升+萘乙酸0.5毫克/升+柠檬酸钠150毫克/升，15天休眠芽启动生长，在培养温度(28±2)℃时多形成带叶的花梗苗。
4.丛生芽增殖培养40天时，花梗苗高1-2厘米，剪去部分叶片转移到丛生芽增殖培养基MS+6-苄基嘌呤10毫克/升+萘乙酸0.5毫克/升+150柠檬酸钠+15％椰子水+蔗糖30克/升培养基上能诱导丛生芽形成。诱导出的不定芽丛分割成单个芽或几个芽一丛，接种在相同培养基上增殖。
5.生根培养丛生芽增殖多代后，可将丛生芽切割成单个芽，接种在含花宝一号(Hyponex 1)3克/升+蔗糖15克/升+香蕉汁100克/升+马铃蓍100克/升+活性碳2克/升的生根培养基上进行生根培养。40天左右能形成株高3-4厘米的完整植株。
6.试管苗移栽春季与秋季为移栽的适宜季节。试管苗移栽时，将蝴蝶兰小苗从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，在0.1％的高锰酸钾溶液中浸泡5分钟后凉干，以小塑料盆为栽培容器，以浸泡过的新鲜水藓为栽培基质，保持适当通风和足够的湿度，移栽的成活率均可达98％-100％。
取自主育成的观赏价值高的蝴蝶兰品种超级红(Dtps Super-Red)为外植体。基本操作方法同实施例1一致。但培养基成分略有不同。其花梗苗的诱导培养基为VW+6-苄基嘌呤15毫克/升+萘乙酸1.0毫克/升+柠檬酸钠100毫克/升。丛生芽增殖培养基为MS+6苄基嘌呤15毫克/升+萘乙酸0毫克/升+柠檬酸钠100毫克/升+15％椰子水+蔗糖30克/升。试管苗移栽的成活率可达100％。
权利要求
1.一种蝴蝶兰优质种苗快速繁殖方法，其特征在于以蝴蝶兰的花梗节段为外植体，利用独特的培养基诱导出花梗苗，再以花梗苗的茎尖或茎段进行丛生芽为增殖，具体步骤包括如下1)、外植体的消毒取蝴蝶兰花芽的花梗，用自来水冲洗干净后，剪取具有休眠芽的节段2-3厘米，在超净工作台上用70％的酒精浸泡1分钟，再用重量百分比0.1％升汞溶液灭菌15分钟，无菌水冲洗5次后，用无菌吸水纸吸干，剪去切口两端各0.5厘米，切成长1-2厘米带休眠芽的切段接种在花梗苗诱导培养基上；2)、花梗苗的诱导花梗苗在诱导培养基上，15天左右休眠芽启动生长，在培养温度20±2℃时发育成花芽，在培养温度28±2℃时多形成带叶的花梗苗，光照度1500～2000lx，光照12小时/天，加入柠檬酸钠；3)、丛生芽增殖培养40天时，花梗苗高1-2厘米，剪去部分叶片转移到丛生芽增殖培养基上，能诱导丛生芽形成，诱导出的不定芽丛分割成单个芽或几个芽一丛，接种在相同培养基上增殖；4)、生根培养丛生芽增殖多代后，可将丛生芽切割成单个芽，接种在生根培养基上进行生根培养，40天能形成株高3-4厘米的完整植株；5)、试管苗移栽试管苗移栽时，将蝴蝶兰小苗从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，在0.1％的高锰酸钾溶液中浸泡5分钟后凉干，以小塑料盆为栽培容器，以浸泡过的新鲜水藓为栽培基质，保持适当通风和足够的湿度。
2.根据权利要求1中所述的蝴蝶兰优质种苗快速繁殖方法，其特征在于2)中所述花梗苗的诱导培养基为VW+6-苄基嘌呤5-20毫克/升+萘乙酸0.5-1.0毫克/升+柠檬酸钠50-200毫克/升，培养基含蔗糖15克/升，pH5.5-5.8，琼脂0.7％。
3.根据权利要求1中所述的蝴蝶兰优质种苗快速繁殖方法，其特征在于3)中所述丛生芽增殖培养基为MS+6-苄基嘌呤5-20毫克/升+萘乙酸0.5-1.0毫克/升+柠檬酸钠50-200毫克/升+15％椰子水+蔗糖30克/升。
4.根据权利要求3中所述的蝴蝶兰优质种苗快速繁殖方法，其特征在于所述椰子水由新鲜的椰子中的汁水经过滤而来。
5.根据权利要求1中所述的蝴蝶兰优质种苗快速繁殖方法，其特征在于4)中所述生根培养基为含花宝一号3克/升+蔗糖15克/升+香蕉汁100克/升+马铃蓍50-100克/升+活性碳2克/升。
6.根据权利要求1中所述的蝴蝶兰优质种苗快速繁殖方法，其特征在于5)中所述试管苗移植在春季与秋季为移栽的适宜季节。
7.根据权利要求1中所述的蝴蝶兰优质种苗快速繁殖方法，其特征在于所述蝴蝶兰的品种为满天红、超级红。
全文摘要
本发明涉及蝴蝶兰的优质种苗快速繁殖方法和所使用的培养基。蝴蝶兰(Phalaenopsis)又称蝶兰，是兰科植物中栽培最广泛、最普及的种类之一，被誉为“兰花皇后”。是一种十分名贵的室内花卉，我国大陆具有自产知识产权的蝴蝶兰品种较少，生产的蝴蝶兰种苗质量较差。蝴蝶兰目前的主要繁殖方法，后代会发生分离，不能保持母体的优良性状和种苗的同一性，或会增加种苗的变异系数。本发明以蝴蝶兰的花梗节段为外植体，利用独特的培养基诱导出花梗苗，再以花梗苗的茎尖或茎段进行丛生芽为增殖，生产出优质的蝴蝶兰种苗，该方法技术简单实惠，切实可行，应用价值高，为满足市场的需要提供一条有效的途径。
文档编号A01H4/00GK1586165SQ20041005090
公开日2005年3月2日 申请日期2004年7月30日 优先权日2004年7月30日
发明者曾宋君, 陈之林, 段俊, 陈建通 申请人:中国科学院华南植物园