专利名称：一种白色念珠菌感染模型及其构建方法
技术领域：
本发明涉及微生物领域，特别是用于细菌的致病机理、治疗药物筛选、观察药物的疗效以及疫苗的保护效果评价的细菌感染疾病的动物模型。
背景技术：
近年来，随着广谱抗生素、激素与免疫抑制剂的普遍应用，以及肿瘤病人的放疗、化疗和其它获得性免疫功能低下的患者(如艾滋病等)逐渐增多，而使内脏、皮肤、粘膜被真菌感染者日益增多。白色念珠菌是一种常见的条件致病菌，其深层(系统)感染危及病人生命，在使用抗真菌药物进行治疗的情况下死亡率仍然很高。近数十年来白色念珠菌(Candida albicans)感染一直处于临床真菌感染的第一位。被认为是免疫系统薄弱病人的一个共同致死原因之一。因而对白色念珠菌感染的研究也逐渐增多。
为了研究白色念珠菌的感染机制和预防、治疗方法，人们探讨各种建立白色念珠菌感染动物模型的方法，主要有小鼠、大鼠、家兔等动物模型，使用的方法有腹腔注射、尾静脉注射、口服、阴道内注入、向角膜层间注入白色念珠菌、经皮气管穿刺法接种白念菌菌液、家兔耳缘静脉注射法等。如1王志东.白念珠菌和新生隐球菌系统感染裸小鼠模型的建立[J].上海医学2006.1期。介绍采用对裸小鼠腹部注射白念珠菌悬液的方法，建立了白念珠菌系统感染裸小鼠模型。
2.常山，等.IgY与双歧杆菌防治小鼠白色念珠菌感染的研究[J].第三军医大学学报2003年2月第25卷第4期294-297页。介绍了建立无特殊病原菌(Specific pathogen free，SPF)小鼠烧伤后口服白色念珠菌感染模型。
3.童向东，等.二联活菌洁阴制剂治疗念珠菌性阴道炎动物模型的实验研究[J].中华医院感染学杂志2005年第15卷第10期1110-1112页。将白色念珠菌悬液注入家兔阴道内制造了阴道炎动物模型。
4.刘敬，等.建立兔浅层白色念珠菌性角膜炎模型[J].山西医科大学学报2004年8月，35(4)315-316页。应用角膜表层镜片术，向角膜层间注入白色念珠菌性，建立角膜炎模型模型。
5.李军，等.经皮气管穿刺法建立家兔白色念珠菌肺炎动物模型[J].山东医药2005年第45卷第4期23-24页.经皮气管穿刺法接种白念菌菌液，建立家兔的肺炎动物模型。
6.杨琼，宋祥福，王桂云.系统性白色念珠菌感染小鼠动物模型的研究[J]东北师大学报(自然科学版)2005年02期。介绍了经小鼠尾静脉直接注射白色念珠菌建立稳定的系统性白色念珠菌感染的C57BL/6小鼠模型的方法。
7.陈建魁，等.实验性大鼠念珠菌病的血液学和生物化学指标的观察[J].实验动物科学与管理15(1)19984-7页。将白色念珠菌经尾静脉注入于大鼠体内建立了全身感染动物模型。
但是上述建立白色念珠菌感染的动物模型的方法有不足之处，如上述例1、2中裸鼠和无特殊病原菌小鼠资源短缺，价格较贵，应用起来比较困难；上述例4、5中动物模型的制造需要手术等复杂操作；另外上述动物模型的感染不易观察，需要处死动物进行病理学观察等缺陷。
发明内容
本的目的在于提供一种操作简单，易于观察的建立白色念珠菌感染的动物模型的方法，以克服目前白色念珠菌感染的动物模型所存在的问题。
本发明的白色念珠菌感染的动物模型，是将白色念珠菌注射于家兔(体重2.0～5.0Kg)耳部皮下(避开耳部动、静脉主干)，白色念珠菌浓度为1×105个孢子/ml～1×1010/ml，既可以耳部形成局部脓肿(耳部感染状态局部红肿、温度增高，面积为0.5cm×1cm～5cm×7cm)，又可以通过血液循环感染全身脏器。操作简单，耳部局部脓肿易于观察，两只耳朵可以形成对照，同时，可以检测全身脏器的感染情况，如肾脏、肝脏、肺脏、心脏等(感染状态为脏器粟粒状散在分布的脓肿灶，脏器充血、瘀肿)。为研究白色念珠菌感染的治疗新方法和药物提供了简单、方便的动物模型。
根据以上所述白色念珠菌感染的动物模型，可以是1.以耳部形成局部脓肿感染为主的白色念珠菌感染的动物模型。
2.耳部局部形成脓肿，同时伴有全身脏器感染的白色念珠菌感染的动物模型。
与现有技术相比，本发明具有操作简单，易于观察的特性。下面结合实施例对本发明作进一步说明。
图1为家兔注射白色念珠菌菌液后的局部脓肿图。
图2肾脏感染图，2-1为肾脏感染剖面图，2-2为肾脏感染外部图(白点为脓肿病灶)。
图3肝脏感染图(白点为脓肿病灶)。
图4心脏感染图(白点为脓肿病灶)。
具体实施例方式
实施例一将白色念珠菌(Candida albicans)菌株接种于沙氏固体培养基(Sabouraud’sbroth)上(成分葡萄糖40g，蛋白胨10g，琼脂20g，溶于1000ml蒸馏水)，接种后37℃培养48小时，无菌条件下将无菌生理盐水加入培养基表面，无菌白金耳挑取菌落，使之与无菌生理盐水形成混悬液，离心，以细胞计数器计数法用无菌生理盐水配制成1×105个孢子/ml菌液，雄兔重3.75kg，双侧耳部备皮，左耳(避开耳部动、静脉主干)2％碘酒、75％酒精消毒，无菌注射1.0ml，24h后出现2cm×3cm的局部脓肿感染。
实施例二同实施例一的方法将白色念珠菌菌株接种、培养、与无菌生理盐水形成混悬液，离心，用无菌生理盐水配制成1×105.5个孢子/ml菌液，在重4.05kg雄兔左耳注射1.0ml，24h后出现2.5cm×3cm的局部脓肿感染。
实施例三同实施例一的方法将白色念珠菌菌株接种、培养、与无菌生理盐水形成混悬液，离心，用无菌生理盐水配制成1×106个孢子/ml菌液，在重3.75kg雄兔左耳注射1.0ml，24h后出现3cm×4cm的局部脓肿感染。
实施例四同实施例一的方法将白色念珠菌菌株接种、培养、与无菌生理盐水形成混悬液，离心，用无菌生理盐水配制成1×106.5个孢子/ml菌液，在重3.75kg雄兔左耳注射1.0ml，24h后出现3.5cm×4cm的局部脓肿感染。
实施例五同实施例一的方法将白色念珠菌菌株接种、培养、与无菌生理盐水形成混悬液，离心，用无菌生理盐水配制成1×107个孢子/ml菌液，在重3.75kg雄兔左耳注射1.0ml，24h后出现3.5cm×5cm的局部脓肿感染，一周后处死家兔，进行病理解剖，发现肾脏出现脓肿感染。此时，形成以耳部局部形成脓肿，同时伴有肾脏感染为主的全身脏器感染的动物模型。
实施例六同实施例一的方法将白色念珠菌菌株接种、培养、与无菌生理盐水形成混悬液，离心，用无菌生理盐水配制成1×108个孢子/ml菌液，在重3.75kg雄兔左耳注射1.0ml，24h后出现3.5cm×5cm的局部脓肿感染，一周后处死家兔，进行病理解剖，发现肾脏、肝脏出现脓肿感染。此时，形成以耳部局部形成脓肿，同时伴有肾脏、肝脏等全身脏器感染的动物模型。
实施例七同实施例一的方法将白色念珠菌菌株接种、培养、与无菌生理盐水形成混悬液，离心，用无菌生理盐水配制成1×109个孢子/ml菌液，在重3.75kg雄兔左耳注射1.0ml，24h后出现3.5cm×5cm的局部脓肿感染，一周后处死家兔，进行病理解剖，发现肾脏、肝脏出现脓肿感染。此时，形成以耳部局部形成脓肿，同时伴有肾脏、肝脏、肺脏等全身脏器感染的动物模型。
实施例八同实施例一的方法将白色念珠菌菌株接种、培养、与无菌生理盐水形成混悬液，离心，用无菌生理盐水配制成1×1010个孢子/ml菌液，在重3.75kg雄兔左耳注射1.0ml，24h后出现3.5cm×5cm的局部脓肿感染，一周后处死家兔，进行病理解剖，发现肾脏、肝脏出现脓肿感染。此时，形成以耳部局部形成脓肿，同时伴有肾脏、肝脏、肺脏、心脏等全身脏器感染的动物模型。
权利要求
1.一种白色念珠菌感染模型，其特征在于以家兔白色念珠菌感染的动物模型。
2.根据权利要求1所述一种白色念珠菌感染模型，其特征在于以家兔耳部局部形成脓肿为主的白色念珠菌感染的动物模型。
3.根据权利要求1所述一种白色念珠菌感染模型，其特征在于以家兔耳部局部形成脓肿，同时伴有全身脏器感染的白色念珠菌感染的动物模型。
4.根据权利要求3所述一种白色念珠菌感染模型，其特征在于所述伴有全身脏器感染包括肾脏、肝脏、心脏、肺脏。
5.一种白色念珠菌感染模型的构建方法，其特征在于是将白色念珠菌注射于家兔耳部皮下，白色念珠菌浓度为1×105/ml～1×1010/ml。
全文摘要
白色念珠菌感染的动物模型，以耳部形成局部脓肿感染为主的白色念珠菌感染的动物模型，以及同时伴有全身脏器感染的白色念珠菌感染的动物模型。是将白色念珠菌注射于家兔耳部皮下，白色念珠菌浓度为1×10
文档编号A01K67/027GK101078011SQ20071001034
公开日2007年11月28日 申请日期2007年2月5日 优先权日2007年2月5日
发明者刘为国 申请人:大连大学