专利名称：：利用百合鳞片切片快速诱导小鳞茎的方法
技术领域：
：本发明涉及一种高效生产百合小鳞茎的方法，属于植物培育
技术领域：
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背景技术：
：百合"j7i，矽A)为百合科aW&cesW,合属fZi7j'，;植物，是国际上重要的球根花卉，具有花型美观、花色艳丽、芳香宜人的特点，深受人们的喜爱。但我国目前生产用的种球主要依赖进口，每年需种球1.5亿粒。通过近几年国家和各省在百合种球国产化方面进行立项支持，己有少量的国产种球投放市场，据统计2008年国产种球约2500万粒，这与我国每年百合生产的需求量还有相当大的差距。由于我国种球繁育技术还不成熟，加上百合种球的繁育周期长，而且要经过小鳞茎组培快繁或鳞片扦插、田间种球培育、采后低温破休眠等多个生产环节。目前采用的鳞片扦插生产小鳞茎的技术，每片鳞片只能在基部产出2一3个小鳞茎，且易发生鳞片的腐烂，生产效率较低；采用组培快繁技术生产小鳞茎，则会因种球生长于地下土壤中而使消毒难度增大，进种成功率低，且主要是采用鳞片下半部进行组培，初代诱导增殖率在3倍左右，以基部产生愈伤组织或/和不定芽为主，需经多代转接和调整培养基才能形成小鳞茎，操作繁琐，培养周期长，且培养过程中容易发生变异。因此以常规的扦插或组培方法来满足新品种或脱毒原种的快速生产是远远不够的，生产上急需既可靠，又优质、高效，且快速生产百合小鳞茎的技术。
发明内容针对现有技术中的鳞片扦插繁殖效率低，而组培快繁技术不仅存在进种率低，而且产生小鳞茎部位有限，并以愈伤组织和不定芽为主，形成小鳞茎的过程多、时间长，且易发生变异等问题，本发明提供一种利用百合鳞片切片快速诱导小鳞茎的方法，以快速大量生产出质量优、成本低的百合小鳞茎，满足市场需求。本发明通过下列技术方案完成一种利用百合鳞片切片快速诱导小鳞茎的方法，包括种球低温打破休眠处理，鳞片消毒处理，其特征在于消毒鳞片经过下列步骤处理A、将经过消毒处理的鳞片接种到MS基本培养基中，在温度为25—28°C，光照强度为15002000LX的条件下预培养810天；B、将经过A步骤预培养的鳞片，自基部往上切成0.20.3cm的片段后，接种到下列诱导培养基中MS+0.51.0mg/L的IBA+66.5g/L的琼脂+5080g/L的糖，PH值为5.86.0;在温度为2325'C且黑暗的条件下，诱导培养至切片长出35个小鳞茎；C、将切片上诱导培养出的小鳞茎分割下来，接种在下列培养基中MS+0.51.0mg/L的IBA+6090g/L的糖+66.5g/L的琼脂，PH值5.56.0;在温度为2325。C且黑暗的条件下培养6090天，使小鳞茎的周径达到3.0cm以上；D、取出C步骤培养所得小鳞茎，洗去培养基，经消毒处理后，包埋于泥炭基质中，于3—5。C的低温环境中培养30天以上，即可下地种植，种植后的发芽率达95%以上。所述种球的低温破休眠处理为现有技术的常规方法即将种球采收后用常规方法进行清洗、消毒处理后，用常规泥炭基质包埋，放于24。C的冷库或冰箱中处理4050天。所述鳞片消毒处理为现有技术中的常规方法即将经过低温破休眠处理的种球剥弃最外的23层鳞片后，剥取其余鳞片，用自来水冲洗干净后，再用洗衣粉水洗涤并漂洗干净；将漂洗好的鳞片先在75%的酒精中泡2030秒，再在0.10.15%的升汞溶液中消毒处理2030分钟，然后在2%的次氯酸钠溶液中清毒浸泡20分钟，在消毒过程中要不断摇动瓶子或在转速为200r/min的摇床上摇动，最后用无菌水漂洗3次。本发明与现有技术相比具有下列优点和效果1.与鳞片扦插技术相比，小鳞茎生产率显著提高。现有的扦插繁殖每个鳞片只产生23个小鳞茎，每个种球产生3040个小鳞茎；而本发明每个鳞片可产生2030个小鳞茎，每个种球可产生的小鳞茎在3004个以上。2.与常规鳞片组培生产的小鳞茎技术相比，本发明每个鳞片可切成8个切片以上，且80%以上的切片会产生小鳞茎，大大增加了材料量和小鳞茎产生量；同时，本发明直接诱导培养即可形成小鳞茎，减少了现有技术组培中产生的愈伤组织和不定丛芽还要经过至少2次继代转接才能形成小鳞茎的过程及时间，同时也避免了从愈伤组织诱导小鳞茎会发生的变异。3.本发明通过对切片产生小鳞茎的分切和培养，可快速生产小籽球，不仅能快速高效、高产生产小籽球，而且是直接形成单个小鳞茎，不会产生从不定丛芽诱导小籽球的多蕊问题。4.本发明的小鳞茎诱导和培养均在黑暗条件下进行，可以有效的节约能源。具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步描述。实施例11.种球的低温破休眠处理将百合东方系品种"西伯利亚"和OT系品种"黄天霸"种球采收后用水清洗干净，并用600倍百菌清+500倍代森锌+500倍五氯硝基苯磷浸泡处理20分钟后，用市售的泥炭为基质包埋后放于冰箱4。C的冷藏室中，45天时取出种球；2.鳞片清洗和消毒将种球的鳞片逐层剥去，将最外的第1、2层的鳞片弃之不用；取第3层以后的鳞片，用自来水冲洗干净后，再用适量浓度的洗衣粉水洗涤并漂洗干净；将鳞片放入浓度为75%的酒精中泡20秒，再放入浓度为0.15%的升汞溶液中，在摇床上振动25分钟，之后在浓度为2%的次氯酸钠溶液中浸泡20分钟，最后用无菌水漂洗3次备用；3.鳞片预培养将消毒后的鳞片接种到MS基本培养基中，每瓶接种4片，在25'C温度，2000LX光照强度的培养室中预培养8天；4.鳞片切片将步骤3预培养的无菌鳞片在超净工作台上逐片依次从基部向上横切成0.2cm的片段，鳞片顶部的0.30.5cm的鳞片梢除去不用；5.小鳞茎的诱导培养将切下的鳞片，接种到MS+IBA0.5mg/L+琼脂6.5g/L+糖60g/L的鳞茎诱导培养基中，接种时要将切片靠鳞片基部的一面朝下，培养基的PH值为5.8，接种后放到温度为25'C，无光照的黑暗培养箱中进行培养；培养20天，40天和60天的分化情况统计见表l:可以看出黄天霸与西伯利亚相比，诱导时间稍短，诱导度稍高；表11=1叩种数切片数(片)20天40天60天产生突起(%)产生小鳞茎产生小鳞茎(平均鳞錢(cm)西伯利亚1512114.945.582.63.661.08黄天霸1714315.950.684.63.981.126.小鳞茎的培养将步骤5获得的1.0cin以上的小鳞茎分割下来，接种在PH值5.5的MS+IBA1.0mg/L+糖90g/L+琼脂6g/L的培养基，在温度为23t:且黑暗的条件下培养60天，80.2%上的小鳞茎周径达到3.0cm以上；7.小鳞茎的出瓶前处理和定植将周径达到3.0cm以上的小鳞茎从瓶内取出，洗去培养基，并用0.3%的多菌灵消毒处理后，用市购的泥炭基质包埋后，放在4。C的冰箱中处理30天后，即可进行定植。种植后的发芽率达到95.9%。实施例21.种球的低温破休眠处理品种和处理方法同实施例1;2.鳞片清洗和消毒操作同实施例1，消毒处理时用0.15%的升汞摇洗20分钟，即在转速为200r/min的摇床上摇动，之后在2%的次氯酸钠溶液中泡20分钟，最后用无菌水漂洗3次；63.鳞片预培养将经过消毒处理的鳞片接种到MS基本培养基中，在温度为28°C，光照强度为1500LX的条件下预培养10天；4.鳞片切片操作同实施例1;5.切片诱导培养将切下的鳞片，逐片接种到MS+NAA0.5mg/L+琼脂66.5g/L+糖70g/L的鳞茎诱导培养基中，接种时要将切片靠鳞片基部的一面朝下，培养基的PH值为5.8，接种后放到温度为23'C，无光照条件的暗培养箱中进行培养；培养20天，40天和60天的分化情况统计见表2:可以看出黄天霸与西伯利亚相比，诱导率稍高，但总的诱导情况较方案一稍差；表2<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>6.小鳞茎的培养将步骤5获得的l.Ocm以上的小鳞茎分割下来，接种在TO值6.0的MS+IBA0.5mg/L+糖90g/L+琼脂6.5g/L的培养基中，在温度为25。C且黑暗的条件下培养90天，78.5%以上的小鳞茎周径达到3.0cm以上；7.小鳞茎的出瓶前处理和定植同实施例1。种植后的平均发芽率达到95.6%。权利要求1、一种利用百合鳞片切片快速诱导小鳞茎的方法，包括种球低温打破休眠处理，鳞片消毒处理，其特征在于消毒鳞片经过下列步骤处理A、将经过消毒处理的鳞片接种到MS基本培养基中，在温度为25-28℃，光照强度为1500～2000LX的条件下预培养8～10天；B、将经过A步骤预培养的鳞片，自基部往上切成0.2～0.3cm的片段后，接种到下列诱导培养基中MS+0.5～1.0mg/L的IBA+6～6.5g/L的琼脂+50～80g/L的糖，PH值为5.8～6.0；在温度为23～25℃且黑暗的条件下，诱导培养至切片长出3～5个小鳞茎；C、将切片上诱导培养出的小鳞茎分割下来，接种在下列培养基中MS+0.5～1.0mg/L的IBA+60～90g/L的糖+6～6.5g/L的琼脂，PH值5.5～6.0；在温度为23～25℃且黑暗的条件下培养60～90天，使小鳞茎的周径达到3.0cm以上；D、取出C步骤培养所得小鳞茎，洗去培养基，经消毒处理后，包埋于泥炭基质中，于3-5℃的低温环境中培养30天以上，即可下地种植，种植后的发芽率达95％以上。2、如权利要求1所述的利用百合鳞片切片快速诱导小鳞茎的方法，其特征在于所述种球的低温破休眠处理为现有技术的常规方法即将种球采收后用常规方法进行清洗、消毒处理后，用常规泥炭基质包埋，放于24""C的冷库或冰箱中处理4050天。3、如权利要求1所述的利用百合鳞片切片快速诱导小鳞茎的方法，其特征在于所述鳞片消毒处理为现有技术中的常规方法即将经过低温破休眠处理的种球剥弃最外的23层鳞片后，剥取其余鳞片，用自来水冲洗干净后，再用洗衣粉水洗涤并漂洗干净；将漂洗好的鳞片先在75%的酒精中泡2030秒，再在0.10.15%的升汞溶液中消毒处理2030分钟，然后在2%的次氯酸钠溶液中清毒浸泡20分钟，在消毒过程中要不断摇动瓶子或在转速为200r/min的摇床上摇动，最后用无菌水漂洗3次。全文摘要本发明提供一种利用百合鳞片切片快速诱导小鳞茎的方法，包括种球低温打破休眠处理，鳞片消毒处理，其特征在于消毒鳞片经过下列处理鳞片预培养、鳞片切片、小鳞茎的诱导培养、小鳞茎的培养、小鳞茎出瓶前的处理和定植。本发明每个鳞片可产生20～30个小鳞茎，每个种球可产生的小鳞茎在300个以上，不仅能快速高效、高产生产小籽球，而且是直接形成单个小鳞茎，不会产生从不定丛芽诱导小籽球的多蕊问题，本发明直接诱导培养即可形成小鳞茎，减少了现有技术组培中产生的愈伤组织和不定丛芽还要经过至少2次继代转接才能形成小鳞茎的过程及时间，同时也避免了从愈伤组织诱导小鳞茎会发生的变异。本发明的小鳞茎诱导和培养均在黑暗条件下进行，可以有效的节约能源。文档编号A01H4/00GK101554138SQ200910094350公开日2009年10月14日申请日期2009年4月15日优先权日2009年4月15日发明者吴丽芳,吴学尉,葵和,崔光芬,康超勇,张艺萍,汪国仙,王继华申请人:云南省农业科学院花卉研究所