专利名称：一种波士顿蕨类种苗组织培养的繁殖方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种波士顿蕨类种苗组织培养的繁殖方法。
背景技术：
波士屯页蕨，学名N印hral印is exaltata cu. Bastaniensis，英文名Boston fern。原产地美国。肾蕨科，株矮，簇生型。波士顿蕨是碎叶肾蕨的突变种，后来声名却凌 驾于碎叶肾蕨之上。此种蕨类的适应力极强，生长容易，因而大受欢迎。不论庭园造景、居 家绿化还是插花艺术，波士顿蕨都被广泛运用，可谓最生活化的蕨类。以前采用的分株进行 繁殖的方法，一棵波士顿蕨类一年只能繁殖出6 8棵，因其繁殖系数低，远不能满足市场 的需要。或者采用孢子繁殖方法，但因采集孢子困难，造成孢子不纯净，由此所造成的波士 顿蕨类种苗变异高，不整齐等原因，不能满足市场的需要。因此，目前波士顿蕨类的繁殖方 法有些品种就采用组织培养法，它是一种利用植物细胞的全能性，离体培养植物组织小块， 进行植物无性快速繁殖的工厂化育苗技术，具体工艺是切下波士顿蕨类的根须，先诱导出 愈伤组织，再分化出不定芽，再培育成可以移栽驯化的壮苗。 一般情况下此过程需要6 8 个月以上，而且需要较高的生产成本(包括培养基成本和培养条件耗费)等，所以现有的波 士顿蕨类种苗繁殖技术仍存在以下缺陷繁殖速度慢，成本较高。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种繁殖速度快、成本 低的波士顿蕨类种苗组织培养的繁殖方法。
本发明所采用的技术方案是本发明包括以下步骤 (a)芽的诱导和分化步骤取波士顿蕨类的根须作为外植体，将所述外植体放入 加有3%的白糖水的MS培养基中培养，分化出圆球茎，培养温度为24 26度，光照强度为 1800 25001ux，光照时间为每天10 14小时； (b)无菌苗的增殖培养步骤取所述圆球茎放入0. 25 0. 8mg/L的6-苄氨基嘌呤 (6BA)、糖为3%、0. 25 0. 8mg/L激动素(KT)的MS培养基中增殖培养，培养温度为24 28度，光照强度为2000 30001ux，光照时间为每天10 14小时； (c)无菌苗的驯化移栽步骤将所述圆球茎放入0. 5 1. 5mg/L的3_吲哚丁酸 (3IBA)、糖3%的MS培养基中培养，培养成可进行移栽驯化的植株，培养温度为18 28度， 弱光条件。 所述波士顿蕨类的根须作为外植体之前需要经过消毒处理，消毒处理是指将所述 根须先用75 %的酒精处理，再用0. 1 %的升汞溶液浸泡后取出，然后用无菌水冲洗4 5 次。 所述酒精处理时间为8 12秒，所述升汞溶液浸泡时间为8 12分钟。 本发明的有益效果是由于本发明将波士顿蕨类根须放入加有3X的白糖水的MS
培养基中培养，不加琼脂，所以可以有效促进波士顿蕨类根须快速分化出圆球茎；又由于本发明采用0. 25 0. 8mg/L的6-苄氨基嘌呤(BA)，糖为3%，0. 25 0. 8mg/L的激动素(KT) 的MS培养基作为增殖培养基，所以圆球茎能旺盛增殖；最后圆球茎置于0. 5 1. 5mg/L的 3-吲哚丁酸(IBA)，糖3^的MS培养基中培养，圆球茎四周即可快速生根。本发明通过直接 诱导出圆球茎，圆球茎又直接快速增殖减少了愈伤组织的诱导这一步骤，简化培养条件或 培养方式等工艺，可以降低生产成本，提高商品化生产的效率和利润，因此本发明的波士顿 蕨类种苗的繁殖方法繁殖速度快，成本低。
具体实施方式
实施例一( — )芽的诱导和分化步骤取波士顿蕨类植物的根须作为外植体；将所述根须先 用75%的酒精处理8秒，再在0. 1 %的升汞溶液中浸泡8分钟取出，然后用无菌水冲洗4次； 取经升汞溶液消毒后的所述根须切成lcm的小段，放入加有3%的白糖水的MS培养基中培 养，不加琼脂；培养温度为24 26度，光照18001ux，光照时间每天10小时，培养6周后， 可见根须两端分化出圆球茎。
(二)无菌苗的增殖培养取所述圆球茎切碎后撒铺于加有0. 25mg/L的6_苄氨基嘌呤(BA)，糖为3 %， 0. 25mg/L的激动素(KT)的MS培养基中，培养六周后，每个圆球茎可多分化出5个新的圆球 茎；培养温度要求24 28度，光照20001ux，每天光照10小时。
(三)无菌苗的驯化移栽 再取所述圆球茎切碎后撒铺于0. 5mg/L的3_吲哚丁酸(IBA)，糖3 %的MS培养基 中培养八周后，无菌苗长成lcm的植株，可进行移栽驯化；栽前3天打开瓶盖使无菌苗逐步 适应外界条件；洗净所述无菌苗根部培养基并移栽入泥炭土和珍珠岩比例为4:l的基质 内；保持温度为18 28度，弱光条件，移栽后的第一周用无纺布覆盖，控制湿度85 95% ， 保持叶表面水雾不干。所述MS培养基组成元素包括大量元素、微量元素、有机成分。大量元 素NH4N03 1650mg/L、KN03 1900mg/L、CaC12 *2H20 440mg/L、MgS04 7H20370mg/L、KH2P04 1700mg/L。微量元素KI 0. 83mg/L、H3B03 6. 2mg/L、MnS04 4H20 22. 3mg/L、ZnS04 7H20 8. 6mg/L、 Na2Mn04 2H20 0. 25mg/L、 CuS04 5H20 0. 025mg/L、 CoC12 6H20 0.025mg/L、 F eS04 *7H20(27. 8)+Na2_EDTA *2H20(37. 3)mg/L。有机成分肌醇100mg/L、烟酸0. 5mg/L、盐 酸吡眵醇(维生素B6)0. 5mg/L、盐酸硫胺素(维生素Bl)O. 5mg/L、甘氨酸2mg/L。
实施例二( — )芽的诱导和分化步骤取波士顿蕨类植物的根须作为外植体；将所述根须先 用75%的酒精处理12秒，再在0. 1%的升汞溶液中浸泡12分钟取出，然后用无菌水冲洗5 次；取经升汞溶液消毒后的所述根须切成lcm的小段，放入加有3%的白糖水的MS培养基 中培养，不加琼脂；培养温度为24 26度，光照25001ux，光照时间每天14小时，培养6周 后，可见根须两端分化出圆球茎。
(二)无菌苗的增殖培养 取所述圆球茎切碎后撒铺于加有0.8mg/L的6-苄氨基嘌呤(BA)，糖为3%， 0.8mg/L的激动素(KT)的MS培养基中，培养六周后，每个圆球茎可多分化出6个新的圆球 茎；培养温度要求24 28度，光照30001ux，每天光照14小时。
(三)无菌苗的驯化移栽 再取所述圆球茎切碎后撒铺于1. 5mg/L的3_吲哚丁酸(IBA)，糖3%的MS培养 基中培养八周后，无菌苗长成1. 5cm的植株，可进行移栽驯化；栽前4天打开瓶盖使无菌苗 逐步适应外界条件；洗净所述无菌苗根部培养基并移栽入泥炭土和珍珠岩比例为4 : l的 基质内；保持温度为18 28度，弱光条件，移栽后的第一周用无纺布覆盖，控制湿度85 95%，保持叶表面水雾不干。MS培养基的组成元素与实施例一相同。
实施例三( — )芽的诱导和分化步骤取波士顿蕨类植物的根须作为外植体；将所述根须先 用75%的酒精处理IO秒，再在0. 1%的升汞溶液中浸泡10分钟取出，然后用无菌水冲洗4 次；取经升汞溶液消毒后的所述根须切成lcm的小段，放入加有3%的白糖水的MS培养基 中培养，不加琼脂；培养温度为24 26度，光照20001ux，光照时间每天12小时，培养6周 后，可见根须两端分化出圆球茎。
(二)无菌苗的增殖培养 取所述圆球茎切碎后撒铺于加有0.5mg/L的6-苄氨基嘌呤(BA)，糖为3%， 0.5mg/L的激动素(KT)的MS培养基中，培养六周后，每个圆球茎可多分化出5个新的圆球 茎；培养温度要求24 28度，光照25001ux，每天光照12小时。
(三)无菌苗的驯化移栽 再取所述圆球茎切碎后撒铺于1. Omg/L的3_吲哚丁酸(IBA)，糖3 %的MS培养基 中培养八周后，无菌苗长成lcm的植株，可进行移栽驯化；栽前4天打开瓶盖使无菌苗逐步 适应外界条件；洗净所述无菌苗根部培养基并移栽入泥炭土和珍珠岩比例为4:l的基质 内；保持温度为18 28度，弱光条件，移栽后的第一周用无纺布覆盖，控制湿度85 95% ， 保持叶表面水雾不干。MS培养基的组成元素与实施例一相同。
权利要求
一种波士顿蕨类种苗组织培养的繁殖方法，其特征在于该繁殖方法包括以下步骤(a)芽的诱导和分化步骤取波士顿蕨类的根须作为外植体，将所述外植体放入加有3％的白糖水的MS培养基中培养，分化出圆球茎，培养温度为24～26度，光照强度为1800～2500lux，光照时间为每天10～14小时，培养4～6周后，可见根须两端切分化出圆球茎；(b)无菌苗的增殖培养步骤取所述圆球茎放入0.25～0.8mg/L的6-苄氨基嘌呤(6BA)、糖为3％、0.25～0.8mg/L激动素(KT)的MS培养基中增殖培养，培养温度为24～28度，光照强度为2000～3000lux，光照时间为每天10～14小时，培养六周后，每个所述圆球茎可多分化出5～6个新的圆球茎；(c)无菌苗的驯化移栽步骤将所述圆球茎放入0.5～1.5mg/L的3-吲哚丁酸(3IBA)、糖3％的MS培养基中培养，培养成可进行移栽驯化的植株，培养温度为18～28度，弱光条件。
2. 根据权利要求1所述的一种波士顿蕨类种苗组织培养的繁殖方法，其特征在于所 述波士顿蕨类的根须作为外植体之前需要经过消毒处理，消毒处理是指将所述根须先用 75%的酒精处理，再用0. 1%的升汞溶液浸泡后取出，然后用无菌水冲洗4 5次。
3. 根据权利要求2所述的一种波士顿蕨类种苗组织培养的繁殖方法，其特征在于所 述酒精处理时间为8 12秒，所述升汞溶液浸泡时间为8 12分钟。
全文摘要
本发明公开了一种波士顿蕨类种苗组织培养的繁殖方法，旨在提供一种繁殖速度快、成本低的波士顿蕨类种苗组织培养的繁殖方法。该繁殖方法包括(a)芽的诱导和分化步骤；(b)无菌苗的增殖培养步骤；(c)无菌苗的驯化移栽步骤。本发明将波士顿蕨类根须放入加有3％的白糖水的MS培养基中培养，不加琼脂，所以可以有效促进波士顿蕨类根须快速分化出圆球茎；又由于本发明采用0.25～0.8mg/L的6-苄氨基嘌呤(BA)，糖为3％，0.25～0.8mg/L的激动素(KT)的MS培养基作为增殖培养基，所以圆球茎能旺盛增殖；最后圆球茎置于0.5～1.5mg/L的3-吲哚丁酸(IBA)，糖3％的MS培养基中培养，圆球茎四周即可快速生根。本发明可广泛应用于波士顿蕨类种苗组织培养领域。
文档编号A01H4/00GK101702999SQ200910192720
公开日2010年5月12日 申请日期2009年9月25日 优先权日2009年9月25日
发明者姚慧芬, 巫仕荣, 徐红, 文方德, 金剑平, 黄皑冰 申请人:珠海市园艺研究所;珠海诺德生物科技有限公司