专利名称：一种珊瑚草种苗组织培养的繁殖方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种珊瑚草种苗组织培养的繁殖方法。
背景技术：
珊瑚草(Heuchera)又名缠百合，为鸭跖草科植物竹叶吉祥草的花，竹叶吉祥草 (《植物名实图考》)攀援状草本，长0.5 l米，单叶互生，狭披针形，长5 IO厘米，宽 1. 2 1. 5厘米，先端长渐尖，基部阔楔形，全缘；叶柄长3 6毫米，叶鞘抱茎。花紫色，杂 性，为顶生的圆锥花序，雄花多数，生于花序的上部；萼片3，披针状卵形；花瓣线形，与萼等 长；雄蕊6，基部有须毛；雌花少数，生于花序的基部，大于雄花，包藏于佛焰苞状的叶腋内， 有不发育雄蕊3 ;子房圆柱状，花柱圆柱状，柱头3裂。蒴果纸质，椭圆球形3瓣裂。种子5 7粒，近多角形，淡棕色，排成2裂。生长于山坡阴湿处。分布云南、广西和湖南。珊瑚草具 有调和气血，止痛，治疗月经不调，神经性头痛以及便秘，有排毒等功效。以前采用分株进行 繁殖的方法， 一棵珊瑚草一年只能繁殖出6 8棵，因其繁殖系数低，远不能满足市场的需 要。因此，目前珊瑚草的繁殖方法大多采用组织培养法，它是一种利用植物细胞的全能性，
离体培养植物组织小块，进行植物无性快繁的工厂化育苗技术，具体工艺是切下珊瑚草的
幼嫩叶片，先诱导出愈伤组织，再分化出不定芽，再培育成可以移栽驯化的壮苗。 一般情况 下此过程需要四个月以上，而且需要较高的生产成本(包括培养基成本和培养条件耗费)
等，所以现有的珊瑚草种苗繁殖技术仍存在以下缺陷繁殖速度较慢，成本较高。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种繁殖速度快、成本 低的珊瑚草种苗组织培养的繁殖方法。
本发明所采用的技术方案是本发明包括以下步骤 (a)芽的诱导和分化步骤取珊瑚草的嫩叶作为外植体，将所述外植体加入培养 基进行芽分化培养，所述培养基为加有0. 5 1. 5mg/L的6-苄氨基嘌呤(6BA)和0. 05 0. 15mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4_D)的MS培养基，培养温度为24 26度，光照强度为 1800 20001ux，光照时间为每天10 14小时; (b)无菌苗的增殖培养步骤取所述分化芽置于0. 3 lmg/L的6_苄氨基嘌呤 (6BA)，糖为3%的MS培养基中增殖培养，分化出增殖苗，培养温度为24 26度，光照强度 为2000 30001ux，光照时间为每天10 14小时； (c)无菌苗的驯化移栽步骤将所述增殖苗置于培养基中进行生根培养，形成小 植株，可进行移栽驯化，培养基为0. 8 1. 5mg/L的3吲哚丁酸(3IBA)，糖3%的MS培养基， 培养温度为18 28度，弱光条件。 所述外植体来源于开放带菌环境的活体植物，需经消毒处理在作为外植体，消毒 处理是指所述活体植物先用75%的酒精处理，再在0. 1%的升汞溶液中浸泡后取出，然后 用无菌水冲洗。
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所述酒精处理时间为8 12秒，所述升汞溶液浸泡时间为8 12分钟，所述无菌 水冲洗4 5次。 本发明的有益效果是本发明采用加有0. 5 1. 5mg/L的6-苄氨基嘌呤(6BA)和 0.05 0. 15mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4_D)的MS培养基，所以可以有效促进珊瑚草 叶片快速分化出不定芽；又由于本发明采用0. 3 lmg/L的6-苄氨基嘌呤(6BA)，糖为3% 的MS培养基中增殖培养，所以不定芽能旺盛增殖；最后增殖苗置于0. 8 1. 5mg/L的3吲 哚丁酸(3IBA)，糖3X的MS培养基中培养，所以增殖苗四周即可快速生根。本发明通过直 接诱导出分化芽，分化芽又直接快速增殖减少了愈伤组织的诱导这一步骤，简化培养条件 或培养方式等工艺，可以降低生产成本，提高商品化生产的效率和利润，因此本发明珊瑚草 种苗组织培养的繁殖方法繁殖速度快，成本低。
具体实施方式
实施例一( — )芽的诱导和分化步骤取珊瑚草刚展开一天的嫩叶作为外植体；将所述叶片 先用75 %的酒精处理8秒，再在0. 1 %的升汞溶液中浸泡8分钟取出，然后用无菌水冲洗 4 5次；取经升汞消毒后的所述叶片切成lcm的小块，放入加有0. 5mg/L的6苄氨基嘌呤 (6BA)和0. 05mg/L的2， 4- 二氯苯氧乙酸(2，4_D)的MS培养基中，所述叶片放入培养基中 时保持叶片切块的叶面向上；培养温度为24 26度，光照18001ux，光照时间每天10小时， 培养6周后，可见叶片切口处分化出不定芽。 (二)无菌苗的增殖培养取分化芽置于0.3mg/L的6苄氨基嘌呤(6BA)，糖为 3X的MS培养基中，培养四周后，每个分化芽可多分化出3 4个新的植株；培养温度要求 24 26度，光照20001ux，每天光照10小时。(三)无菌苗的驯化移栽所述增殖苗置于0.8mg/L的3吲哚丁酸(3IBA)，糖 3X的MS培养基中培养四周后，无菌苗长出1.5cm的根后，可进行移栽驯化；栽前4天打 开瓶盖使无菌苗逐步适应外界条件；洗净所述无菌苗根部培养基并移栽入泥炭土和珍珠 岩比例为4 : 1的基质内；保持温度为18 28度，弱光条件，移栽后的第一周用无纺布 覆盖，控制湿度85 95%，保持叶表面水雾不干。MS培养基组成元素包括大量元素、微 量元素、有机成分，大量元素NH4N03 1650mg/L、 KN03 1900mg/L、 CaC12 2H20 440mg/L、 MgS04 7H20370mg/L、KH2P04 1700mg/L。 微量元素KI 0. 83mg/L、 H3B03 6. 2mg/L、 MnS04 4H20 22. 3mg/L、 ZnS04 7H20 8. 6mg/L、Na2Mn04 2H20 0. 25mg/L、CuS04 5H20 0. 025mg/L、CoC12 6H20 0. 025mg/L、Fe S04 7H20(27. 8)+Na2-EDTA 2H20 (37. 3)mg/L。有机成分肌醇100mg/L、烟酸0. 5mg/L、盐酸吡哆醇(维生素B6) 0. 5mg/L、盐酸硫 胺素(维生素Bl)O. 5mg/L、甘氨酸2mg/L。
实施例二( — )芽的诱导和分化步骤取珊瑚草刚展开两天的嫩叶作为外植体；将所述叶片 先用75%的酒精处理IO秒，再在O. 1%的升汞溶液中浸泡IO分钟取出，然后用无菌水冲 洗4 5次；取经升汞消毒后的所述叶片切成lcm的小块，放入加有lmg/L的6苄氨基嘌呤 (6BA)和O. lmg/L的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4_D)的MS培养基中，所述叶片放入培养基中时保持叶片切块的叶面向上；培养温度为24 26度，光照20001ux，光照时间每天12小时， 培养4周后，可见叶片切口处分化出不定芽。 ( 二 )无菌苗的增殖培养取分化芽置于lmg/L的6苄氨基嘌呤(6BA)，糖为3%的 MS培养基中，培养四周后，每个分化芽可多分化出3 4个新的植株；培养温度要求24 26度，光照30001ux，每天光照10小时。(三)无菌苗的驯化移栽所述增殖苗置于lmg/L的3吲哚丁酸(3IBA)，糖3X的 MS培养基中培养四周后，无菌苗长出1. 5cm的根后，可进行移栽驯化；栽前4天打开瓶盖 使无菌苗逐步适应外界条件；洗净所述无菌苗根部培养基并移栽入泥炭土和珍珠岩比例为 4 : 1的基质内；保持温度为18 28度，弱光条件，移栽后的第一周用无纺布覆盖，控制湿 度85 95%，保持叶表面水雾不干。MS培养基组成元素与实施例一相同。
实施例三( — )芽的诱导和分化步骤取珊瑚草刚展开两天的嫩叶作为外植体；将所述叶片 先用75%的酒精处理12秒，再在0. 1%的升汞溶液中浸泡12分钟取出，然后用无菌水冲洗 5次；取经升汞消毒后的所述叶片切成lcm的小块，放入加有l. 5mg/L的6苄氨基嘌呤(6BA) 和O. 15mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4_D)的MS培养基中，所述叶片放入培养基中时保持 叶片切块的叶面向上；培养温度为24 26度，光照20001ux，光照时间每天14小时，培养4 周后，可见叶片切口处分化出不定芽。 ( 二 )无菌苗的增殖培养取分化芽置于lmg/L的6苄氨基嘌呤(6BA)，糖为3%的 MS培养基中，培养四周后，每个分化芽可多分化出3 4个新的植株；培养温度要求24 26度，光照30001ux，每天光照14小时。(三)无菌苗的别l化移栽所述增殖苗置于1. 5mg/L的3吲哚丁酸(3IBA)，糖3X 的MS培养基中培养四周后，无菌苗长出1. 5cm的根后，可进行移栽驯化；栽前4天打开瓶盖 使无菌苗逐步适应外界条件；洗净所述无菌苗根部培养基并移栽入泥炭土和珍珠岩比例为 4 : l的基质内；保持温度为18 28度，弱光条件，移栽后的第一周用无纺布覆盖，控制湿 度85 95% 保持叶表面水雾不干。MS培养基组成元素与实施例一相同。
权利要求
一种珊瑚草种苗组织培养的繁殖方法，其特征在于该繁殖方法包括以下步骤(a)芽的诱导和分化步骤取珊瑚草的嫩叶作为外植体，将所述外植体加入培养基进行芽分化培养，所述培养基为加有0.5～1.5mg/L的6-苄氨基嘌呤(6BA)和0.05～0.15mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)的MS培养基，培养温度为24～26度，光照强度为1800～2000lux，光照时间为每天10～14小时，培养4～6周后，可见叶片切口处分化出不定芽；(b)无菌苗的增殖培养步骤取所述分化芽置于0.3～1mg/L的6-苄氨基嘌呤(6BA)，糖为3％的MS培养基中增殖培养，分化出增殖苗，培养温度为24～26度，光照强度为2000～3000lux，光照时间为每天10～14小时；(c)无菌苗的驯化移栽步骤将所述增殖苗置于培养基中进行生根培养，形成小植株，可进行移栽驯化，培养基为0.8～1.5mg/L的3吲哚丁酸(3IBA)，糖3％的MS培养基，培养温度为18～28度，弱光条件。
2. 根据权利要求1所述的一种珊瑚草种苗组织培养的繁殖方法，其特征在于所述外 植体来源于开放带菌环境的活体植物，需经消毒处理在作为外植体，消毒处理是指所述活 体植物先用75%的酒精处理，再在0. 1%的升汞溶液中浸泡后取出，然后用无菌水冲洗。
3. 根据权利要求2所述的一种珊瑚草种苗组织培养的繁殖方法，其特征在于所述酒 精处理时间为8 12秒，所述升汞溶液浸泡时间为8 12分钟，所述无菌水冲洗4 5次。
全文摘要
本发明公开了一种珊瑚草种苗组织培养的繁殖方法，旨在提供一种繁殖速度快、成本低的珊瑚草种苗组织培养的繁殖方法。该繁殖方法包括以下步骤(a)芽的诱导和分化步骤；(b)无菌苗的增殖培养步骤；(c)无菌苗的驯化移栽步骤，本发明采用加有0.5～1.5mg/L的6-苄氨基嘌呤(6BA)和0.05～0.15mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)的MS培养基，可以有效促进珊瑚草叶片快速分化出不定芽；采用0.3～1mg/L的6-苄氨基嘌呤(6BA)，糖为3％的MS培养基中增殖培养，不定芽能旺盛增殖；最后增殖苗置于0.8～1.5mg/L的3吲哚丁酸(3IBA)，糖3％的MS培养基中培养，增殖苗四周即可快速生根。本发明可广泛应用于珊瑚草种苗组织培养领域。
文档编号A01H4/00GK101702998SQ200910192719
公开日2010年5月12日 申请日期2009年9月25日 优先权日2009年9月25日
发明者姚慧芬, 巫仕荣, 徐红, 文方德, 金剑平, 黄皑冰 申请人:珠海市园艺研究所;珠海诺德生物科技有限公司