西南远志的组织培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物组织培养领域，主要涉及的是西南远志的组织培养方法。
【背景技术】
[0002] 西南远志(Polygala crotalarioides Buch.Ham.)，又名西藏远志，别名：娘母良、 丫磨娘，系远志科远志属植物。是云南佤族民间的一种珍奇中草药，生长在"稀树高草群落" 和灌丛草坡，为多年生宿根铺散草本，有增进食欲、强筋健骨和性功能亢进之功。长期服用 能使眉须秀长，有颜容光泽和痣斑消褪之效。"斗牛竞赛"，丫磨娘可用作"发力药"喂饲斗 牛，使膂力倍增，斗志昂扬。本品性温，味辛甘苦；归入心、肺、肾、肝诸经。具有补肾助阳、养 心安神、祛痰解痉的功效。主治瘰疬痨伤、风湿麻木、顺气化痰、补心安神、活血止痛诸症。临 床应用于肾虚阳萎、早泄等性功能减退症以及心悸怔忡，肾虚咳喘，宫寒带下等证。药理实 验的结果表明，西南远志还具有明显的抗疲劳、抗缺氧作用，能提高机体的抗应激能力，增 强体力并使机体适应各种不良刺激的影响。目前从本属植物中分离得到的主要成分为三萜 皂苷类化合物、咕吨酮苷类化合物、寡糖脂类化合物、生物碱及其他有机成分和无机物。作 为远志属植物的主要化学成分之一的三萜皂苷类化合物，根据张平夫李明炬孙学惠的《佤 族草药"丫磨娘"强壮作用的药理研究》证明其具有明显促进幼龄雄性小鼠的睾丸发育和去 势雄性大鼠已萎缩之副性腺器官的生长，能够显著增强小鼠游泳耐力、常压耐缺氧以及抗 低温能力。"丫磨娘'能够提高机体的抗应激能力，并具有雄性激素样作用。
[0003] 由于药效卓著，人们争相采挖，已经造成原产地资源的严重枯竭，己濒临绝迹。因 此，为保护这一珍稀中药品种，对西南远志进行快速繁殖技术的研究是亟待解决的重要课 题。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种操作简单、成本低廉、成活率 高、生根率高的西南远志的组织培养方法。
[0005] 本发明所述的西南远志的组织培养方法由以下步骤组成：
[0006] -、外植体的选择:选择健壮的野生西南远志，用其种子作为外植体；
[0007] 二、外植体的消毒:先用自来水冲洗外植体8~12min，然后采用无萊消毒法用60~ 75%的乙醇溶液消毒30~60秒，用无菌水冲洗3~5遍，按重量比例1:2~2.5将高锰酸钾和 甲醛溶液放入玻璃干燥器的底层，随即把外植体放入玻璃干燥器隔层瓷板上，盖好盖子熏 消毒1~2小时，再用浓度为3~6%的次氯酸钠消毒10~15min，消毒完成后，再用无菌水冲 洗4~6遍；
[0008] 三、初始诱导培养:把外植体接种于下列经改良的无菌诱导培养基中，所述的改良 的无菌诱导培养基为:在每升KC培养基中加入KT1.0~1.5mg、NAA0.4~0.8mg、VB25~20mg、 活性炭1~1.5g、重量百分比浓度为10~15%的马铃薯汁100~150g，在温度25~28°C、光照 强度1000~15001x、光照时间为10~12个小时的条件下，培养55~65天，形成圆球茎；
[0009] 四、原球茎增殖培养:将上述的生长良好的圆球茎转接入下列增殖培养基中，所述 的培养基为：在每升KC培养基中加入NAA1.5~2.0mg、KT0.5~0.8mg、VC10~30mg、VB 25~ 2〇mg、重量百分比浓度为10~15%的马铃薯汁100~150g、蔗糖30g、活性炭3~5g、琼脂6~ 8g，在pH值为5~7.0条件下培养，培养周期：55~65天，培养温度:25~28°C，光照时间：10~ 24小时/天，光照强度1000~15001x;
[0010] 五、原球茎分化培养:将步骤四所述的圆球茎转入下列分化培养基中，所述的分化 培养基为：在每升KC培养基中加入ΝΑΑ0.8~1.0mg、KT0.1~0.5mg、VC10~30mg、VB 25~ 20mg、活性炭3~5g、重量百分比浓度为10~15%的香蕉汁100~150g、琼脂6~8g，在温度25 ~28°C、光照强度1000~15001x、光照时间10~12小时条件下培养55~65天，得到分化苗；
[0011] 六、壮苗和生根培养:将分化苗转入下列生根壮苗培养基中，所述的生根壮苗培养 基为：在每升1/2KC培养基中加入NAA0.8~1.0mg、VC10~30mg、VB 25~20mg、活性炭3~5g、 重量百分比浓度为10~15%的香蕉汁100~150g、琼脂6~8g，在温度25-28°C、光照时间10 ~12小时、光照强度1000~15001x条件下培养55~65天，得到生根苗。
[0012] 本发明针对现有的技术问题，提出一种西南远志的组织培养方法，用少量的种子 作为外植体，快速大量的培育出西南远志种苗。采用无汞消毒法对西南远志外植体进行灭 菌处理，即保证了外植体无菌污染，提高其培养成活率，又可以避免汞污染;在培养基中加 入维生素 C(VC)、核黄素(VB2)为抗氧化剂，减轻了外植体的褐化和玻璃化，提高了外植体的 成活率。本发明操作简单，成本低廉，成活率高、生根率高。
[0013] 本发明的组织培养方法能够保持原品种的优良性状，为良种繁育和产业化生产奠 定基础。
【具体实施方式】
[0014] 下面结合实施例对本发明作进一步的描述，实施例只用于对本发明更详细的说 明，而不用于限制本发明。
[0015] 实施例1:
[0016] 外植体的选择:选择健壮的野生西南远志，用其种子作为外植体。外植体的消毒： 先用自来水冲洗外植体l〇min，然后采用无汞消毒法用75%的乙醇溶液消毒30秒，用无菌水 冲洗3遍，按重量比例1: 2将高锰酸钾和甲醛溶液直接放入玻璃干燥器的底层，随即放入外 植体于玻璃干燥器的隔层瓷板上，盖好盖子熏消毒2小时。这一切均可在常温下进行，对温 度无特殊要求。这样做可以比较有效除去外植体中的内外生菌。再用浓度为5%的次氯酸钠 消毒15min，对外植体进行再次消毒。消毒完成后，再用无菌水冲洗5遍。所述的采用无汞消 毒法就是不采用常规的氯化汞消毒方法。所述的乙醇溶液和次氯酸钠的浓度均为现有技 术，即体积百分浓度。
[0017] 初始诱导培养:把外植体接种于下列经改良的无菌诱导培养基中，所述的改良的 无菌诱导培养基为:在每升KC培养基中加入KT1.2mg、NAAO. 6mg、VB220mg、活性炭1.5g、重量 百分比浓度为12%的马铃薯汁120g，在温度25~28°C、光照强度1000~15001x、光照时间为 10~12个小时的条件下，培养55~65天，形成圆球莖。
[0018] 原球茎增殖培养:将上述的生长良好的圆球茎转接入下列增殖培养基中，所述的 培养基为:在每升KC培养基中加入NAA1 · Omg、KT0 · 6mg、VC20mg、VB21 Omg、重量百分比浓度为 12%的马铃薯汁120g、蔗糖30g、活性炭3g、琼脂8g，在pH值为6.0条件下培养，培养周期：55 ~65天，培养温度:25~28°C，光照时间：12小时/天，光照强度1000~15001x。
[0019] 原球茎分化培养:将步骤四所述的圆球茎转入下列分化培养基中，所述的分化培 养基为：在每升KC培养基中加入NAAO · 8mg、KTO · 5mg、VC20mg、VB21 Omg、活性炭3g、重量百分 比浓度为12%的香蕉汁120g、琼脂8g，在温度25~28°C、光照强度1000~15001x、光照时间 10~12小时条件下培养55~65天，得到分化苗。
[0020] 壮苗和生根培养:将分化苗转入下列生根壮苗培养基中，所述的生根壮苗培养基 为：在每升1/2KC培养基中加入熟42.〇11^、￥02〇11^、￥8 21〇11^、活性炭38、重量百分比浓度为 15%的香蕉汁150g、琼脂8g，在温度25-28°C、光照时间10~12小时、光照强度1000~15001x 条件下培养55~65天，得到生根苗。
[0021 ]即可出瓶炼苗、移栽，成活率为93 %。
[0022] 上面所述的KC是通用培养基，其配方为：
[0023] KC(Kundson C)培养基配方
[0024]
[0025] 所述的1/2KC培养基是指在上述配方中，大量元素的成分均为1/2。
[0026]上面所述的KT是氯吡苯脲(CPPU))，所述的NAA是萘乙酸，所述的VB2是核黄素，所 述的VC是维生素 C。
【主权项】
1. 一种西南远志的组织培养方法，其特征在于由以下步骤组成： 一、 外植体的选择:选择健壮的野生西南远志，用其种子作为外植体； 二、 外植体的消毒:先用自来水冲洗外植体8~12min，然后采用无萊消毒法用60~75 % 的乙醇溶液消毒30~60秒，用无菌水冲洗3~5遍，按重量比例1:2~2.5将高锰酸钾和甲醛 溶液放入玻璃干燥器的底层，随即把外植体放入玻璃干燥器隔层瓷板上，盖好盖子熏消毒1 ~2小时，再用浓度为3~6 %的次氯酸钠消毒10~15min，消毒完成后，再用无菌水冲洗4~6 遍； 三、 初始诱导培养:把外植体接种于下列经改良的无菌诱导培养基中，所述的改良的无 菌诱导培养基为：在每升KC培养基中加入KT 1.0~1.5mg、NAA 0.4~0.8mg、VB2 5~20mg、 活性炭1~1.5g、重量百分比浓度为10~15%的马铃薯汁100~150g，在温度25~28°C、光照 强度1000~15001x、光照时间为10~12个小时的条件下，培养55~65天，形成圆球茎； 四、 原球茎增殖培养:将上述的生长良好的圆球茎转接入下列增殖培养基中，所述的培 养基为：在每升KC培养基中加入NAA 1.5~2.0mg、KT 0.5~0.8mg、VC 10~30mg、VB2 5~ 2〇mg、重量百分比浓度为10~15%的马铃薯汁100~150g、蔗糖30g、活性炭3~5g、琼脂6~ 8g，在pH值为5~7.0条件下培养，培养周期：55~65天，培养温度:25~28°C，光照时间：10~ 24小时/天，光照强度1000~15001x; 五、 原球茎分化培养:将步骤四所述的圆球茎转入下列分化培养基中，所述的分化培养 基为：在每升KC培养基中加入NAA 0.8~1.0mg、KT 0.1~0.5mg、VC 10~30mg、VB2 5~ 20mg、活性炭3~5g、重量百分比浓度为10~15%的香蕉汁100~150g、琼脂6~8g，在温度25 ~28°C、光照强度1000~15001x、光照时间10~12小时条件下培养55~65天，得到分化苗； 六、 壮苗和生根培养:将分化苗转入下列生根壮苗培养基中，所述的生根壮苗培养基 为：在每升1/2KC培养基中加入NAA 0.8~1.0mg、VC 10~30mg、VB2 5~20mg、活性炭3~5g、 重量百分比浓度为10~15%的香蕉汁100~150g、琼脂6~8g，在温度25-28°C、光照时间10 ~12小时、光照强度1000~15001x条件下培养55~65天，得到生根苗。
【专利摘要】本发明涉及植物组织培养领域，主要涉及的是西南远志的组织培养方法。本发明所述的西南远志的组织培养方法由以下步骤组成：一、外植体的选择；二、外植体的消毒；三、初始诱导培养；四、原球茎增殖培养；五、原球茎分化培养；六、壮苗和生根培养。本发明用少量的种子作为外植体，快速大量的培育出西南远志种苗。采用无汞消毒法进行灭菌处理，即保证了外植体无菌污染，提高其培养成活率，又可以避免汞污染；在培养基中加入维生素C、核黄素为抗氧化剂，减轻了外植体的褐化和玻璃化，提高了外植体的成活率。本发明操作简单，成本低廉，成活率高、生根率高。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105532458
【申请号】CN201511015513
【发明人】李永华, 李聪颖
【申请人】李永华
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2015年12月29日