一种红秋葵的组织培养方法
【专利摘要】本发明公开了一种红秋葵的组织培养方法，属于植物生物技术领域。包括外植体的制备和光质处理，选取成熟、饱满的红秋葵种子，先在流水冲洗1.5?2h，用70％酒精消毒30s，0.15％的氯化汞消毒6?8min，无菌水冲洗5?6次，然后在无菌水中浸泡12?24h，然后接入1/2MS中，在白光下培养5?7d，切取带柄子叶为外植体，接入添加了0.05mg/L NAA的MS中培养20d，然后切取两叶一心的顶芽为外植体，接入添加0.10mg/L NAA和0.05mg/L 6?BA的MS中，然后转入蓝红绿组合光3:1:1的发光二极管(LED)光下培养，培养35d。蓝红绿组合光3:1:1的发光二极管(LED)光较适合红秋葵组培苗的生长。本发明具有操作简单、植株生长快速健壮，节省能源环保等优点，将在红秋葵离体快繁或分子育种的研究中发挥重要作用，实际应用价值高。
【专利说明】一种红秋葵的组织培养方法
[0001] -、技术领域 本发明涉及一种红秋葵的组织培养方法，属于植物生物技术领域。
[0002] 二、【背景技术】 红秋葵(Hibiscus coccineus (Medicus) Walt)，是黄秋葵种中的一个果实外皮红色 的品种，为锦葵科秋葵属一年生草本植物。以采食嫩果为主，红秋葵的花、种子均可以入药， 对胃炎、胃溃疡等多种疾病有较好疗效。性喜温暖和强光，耐热，耐旱，对土壤适应性较广。 秋葵的品种选育主要是引种选育和人工制种的方式。近年来，为满足栽培对杂种种苗的需 要，利用离体快速繁殖技术来保存黄秋葵杂种优势资源成为了关注的焦点。在植物离体快 繁中，光对外植体形态建成起重要作用。蓝光、红光、黄光、绿光和远红光之所以能引起植株 的一系列生理反应是通过激发激素信号途径来控制植物的生长和发育。植物离体快繁主要 采用荧光灯（日光灯)作为人工光源，其光谱分布含有不符合植物生长需求的部分，生物能 效极低。近年来随着农业科技化水平的提高和组培大规模的发展，新型节能高效光源调控 措施成为了研究的热点。一种新型高效的节能光源LEDs，因其具有寿命长、体积小、波长具 体、光质和光量可调、耗能低、发热低和可以对植株近距离照射等优点，适合应用于可控环 境的植物培养。
[0003] 本方法探索了红秋葵组织培养的试验，建立了完整可行的试验方法，操作步骤简 单，试验效果稳定、清晰，因此无论是在科研、检测以及学生试验中都能得到很好的应用。
[0004] 三、
【发明内容】
技术问题本发明的目的在于提供一种红秋葵的组织培养方法。
[0005] 技术方案 1、一种红秋葵的组织培养方法，包括以下步骤： 1) 外植体的制备:选取成熟、饱满的红秋葵种子，先在流水中冲洗1.5-2h，然后在超净 工作台中用70%酒精消毒30s，0.15%的氯化汞消毒6-8min，无菌水冲洗5-6次，然后将已经消 毒的种子在无菌水中浸泡12_24h，把消毒浸泡后的种子接入1/2MS培养基中，先在荧灯光下 培养5-7d，待子叶展平后，切取带有1.5-2.0cm下胚轴的带柄子叶为外植体，接入添加了 0.05 mg/L NAA的MS培养基中培养20d，切取由带柄子叶长出的两叶一心的顶芽为外植体； 2) 光质处理:然后切取由带柄子叶长出的两叶一心的顶芽接入添加0.10 mg/L NAA和 0.05 mg/L 6-BA的MS培养基中，转入蓝红绿组合光3:1:1的发光二极管(LED)光下培养，保 持光强为45 μπιο? · m-2 · s-S光周期为12小时，湿度70±5%，培养温度24-26°C，培养时间为 35d； 3) 光源:所述的光照处理的光源是一组T5-28W的发光二极管(LED)灯管，所述的光强是 通过调整灯的数量和灯到植株冠层的距离来控制，所述的光周期采用一个定时装置来控 制。
[0006] 有益效果 本发明提供了一种红秋葵的组织培养方法。本发明的绿秋葵的组织培养方法具有以下 优点：1)操作简单，效果好;2)节省能源环保;3)植株生长快速健壮。本发明方法和结果为开 展与红秋葵快繁有关的生物学研究和开发提供了新的途径和依据。
[0007]
【具体实施方式】
[0008] 下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，所述百分含量如无特别说明 均为体积百分含量。
[0009] 1.实施材料： ①红秋葵种子:常规品种。
[0010]②光源:发光二极管(LED)灯管。
[0011] 2.实施方法： ① 外植体制备:选取成熟、饱满的红秋葵种子，先在流水中冲洗1.5-2h，然后在超净工 作台中用70%酒精消毒30s，0.15%的氯化汞消毒6-8min，无菌水冲洗5-6次，然后将已经消毒 的种子在无菌水中浸泡12_24h，把消毒浸泡后的种子接入1/2MS培养基中，先在荧灯光下培 养5-7d，待子叶展平后，切取带有1.5-2.0cm下胚轴的带柄子叶为外植体，接入添加了0.05 mg/L NAA的MS培养基中培养20d，切取由带柄子叶长出的两叶一心的顶芽为外植体； ② 光照处理:然后切取由带柄子叶长出的两叶一心的顶芽接入添加0.10 mg/L NAA和 0.05 mg/L 6-BA的MS培养基中，然后转入蓝红绿组合光3:1:1的发光二极管(LED)光下培 养； ③ 条件控制:光照处理阶段保持光强为45 μπιο? · m-2 · s-1，光周期为12小时，湿度70土 5%，培养温度24-26 °C，培养时间为35d; ④ 控制方法：由T5-28W的发光二极管(LED)灯管提供光源，通过调整灯的数量和灯到植 株冠层的距离来控制光强，一个定时装置来控制光周期。
[0012] 3.处理效果： 3.1不同光质对红秋葵组培苗生长 表1显示，各光质处理下红秋葵组培苗的生长变化趋势较一致，鲜重、干重、根长与株高 均以蓝红绿组合处理最高。可见，与对照相比，蓝红绿组合光3:1:1能显著促进红秋葵组培 苗的生物量的积累。
[0013] 3.2不同光质对红秋葵组培苗根系活力的影响
[0014] 根系活力一定程度上可以反映组培苗的生长状况。蓝红绿组合光3:1:1处理下红 秋葵组培苗的根系活力最大(表2)。可见，蓝红绿组合光3:1:1处理均显著提高了红秋葵组 培苗的根系活力。 3.3不同光质对红秋葵组培苗色素含量的影响 植物叶片中的光合色素是进行光合作用的物质基础，其含量和组成通过直接影响叶片 的光合速率来影响植株的生长。如表3显示，红秋葵组培苗叶片中叶绿素 a、叶绿素 b、叶绿素 总量和类胡萝卜素的含量均以蓝红绿组合3:1:1下最大。可见，蓝红绿组合光3:1:1显著提高 了红秋葵组培苗叶片光合色素的含量，为促进植株生长奠定了基础。
[0015] 表1
【主权项】
1. 一种红秋葵的组织培养方法，包括以下步骤： 1) 外植体的制备:选取成熟、饱满的红秋葵种子，先在流水中冲洗1.5-2h，然后在超净 工作台中用70%酒精消毒30s，0.15%的氯化汞消毒6-8min，无菌水冲洗5-6次，然后将已经消 毒的种子在无菌水中浸泡12_24h，把消毒浸泡后的种子接入1/2MS培养基中，先在荧灯光下 培养5-7d，待子叶展平后，切取带有1.5-2.0cm下胚轴的带柄子叶为外植体，接入添加了 0.05 mg/L NAA的MS培养基中培养20d，切取由带柄子叶长出的两叶一心的顶芽为外植体； 2) 光质处理:然后切取由带柄子叶长出的两叶一心的顶芽接入添加0.10 mg/L NAA和 0.05 mg/L 6-BA的MS培养基中，转入蓝红绿组合光3:1:1的发光二极管(LED)光下培养，保 持光强为45 μπιο? · m-2 · s-S光周期为12小时，湿度70±5%，培养温度24-26°C，培养时间为 35d； 3) 光源:所述的光照处理的光源是一组T5-28W的发光二极管(LED)灯管，所述的光强是 通过调整灯的数量和灯到植株冠层的距离来控制，所述的光周期采用一个定时装置来控 制。2. 根据权利要求1所述的一种红秋葵的组织培养的方法，其特征在于:所述红秋葵为常 规品种。
【文档编号】A01H4/00GK105830919SQ201610189907
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年3月30日
【发明人】李慧敏, 周玉丽, 陈杰
【申请人】安徽科技学院