一种组织培养植株再生的方法及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物组织培养技术领域，涉及一种组织培养植株再生方法，具体涉及一种东农冬麦I号的组织培养及植株再生方法。
【背景技术】
[0002]小麦分为春小麦和冬小麦，在我国，由于气候的影响，南方主要以种植冬小麦为主，而北方则以种植春小麦为主。世界范围内冬小麦的种植范围及品质要明显好于春小麦。冬小麦要具有非常强的抗寒性，经历一个寒冷而漫长的冬季，幼苗才能在春天返青，分蘖恢复生长。黑龙江省地处中国东北部，属北温带季风气候，冬季寒冷而且漫长，冬季温度极低，，风大且田间存雪量少，易使冬小麦幼苗暴露在寒冷的温度下，幼苗不能顺利过冬，是冬小麦的种植禁区，所以黑龙江省一直以种植春小麦为主。春季干旱、洪涝等环境因素对春小麦的种植严重制约，导致其产量不稳，如果能在黑龙江省种植冬小麦即可解决制约春小麦产量的问题。东农冬麦I号的育成使得北方地区能够进行冬小麦的种植，该品种是目前黑龙江省高寒地区首例可以安全越冬的冬小麦品种(返青率在85%左右)，可耐受-30°c低温。利用植物基因工程技术对小麦进行品质和抗性的改良，而研究小麦离体组织培养体系，也成为小麦遗传转化能否成功的基础。
[0003]目前，小麦组织培养多采用幼胚和幼穗作为外植体，幼胚和幼穗虽然再生频率较高但其取材受季节限制，材料重复性差；而小麦成熟胚培养则可规避季节限制，常年进行试验。因此以东农冬麦I号成熟胚为外植体，建立高效稳定的组织培养植株再生体系尚无相关报道，因此急需对东农冬麦I号组织培养植株再生技术进行研究，建立高效稳定的成熟胚组织培养植株再生体系。
【发明内容】
[0004]基于【背景技术】存在的技术问题，本发明提出了一种组织培养植株再生的方法及其应用，使用的培养基配方简单、培养流程简便，提高了植株的分化及再生效率，能稳定高效的获得再生苗。
[0005]本发明提出的一种组织培养植株再生的方法，包括如下步骤:
51、灭菌与浸种处理:挑选当年籽粒饱满的成熟种子，置于75%乙醇溶液进行消毒4-6min，取出，无菌水清洗后，再置于质量分数为8-12%的NaClO水溶液中进行灭菌28-32min，取出，无菌水清洗后，置于黑暗培养箱中浸泡于无菌水中过夜；
52、愈伤组织的诱导:在无菌状态下，将浸泡过夜后的种子无菌干燥后，采用胚切伤略带胚乳法进行取胚，将胚的盾片朝上接种在诱导培养基中培养得到胚性愈伤组织；
53、分化培养:将胚性愈伤组织置于分化培养基中培养得到再生苗；
54、生根移栽:将2-3cm长的再生苗置于生根培养基中进行壮苗生根培养18-22d后，打开瓶口炼苗3-5d，然后将植株移栽到花盆中培养。
[0006]优选地，SI中，黑暗培养箱中温度为25± 1°C。
[0007]优选地，S2中，无菌干燥的具体操作为将浸泡过夜后的种子置于无菌滤纸上以吸干浸泡过夜后的种子表面水分。
[0008]优选地，S2中，取胚的过程中在超净工作台中进行。
[0009]优选地，S2中，诱导培养基包括MS培养基、450-550mg/L酪蛋白、80-120mg/L谷氨酰胺、0.05-0.15mg/L NAA,0.2-0.4g/L 肌醇、0.8-1.2g/L 脯氨酸、0.4-0.6mg/L ABA、0.9-1.lmg/L 2, 4- 二氯苯氧乙酸、28_32g/L 鹿糖和 7_9g/L 琼脂。
[0010]优选地，S3中，分化培养基包括MS培养基、0.05-0.15mg/L NAA,0.12-0.13g/L肌醇、0.9-1.lg/L 脯氨酸、3-5mg/L 6-BA、28_32g/L 蔗糖和 7_9g/L 琼脂。
[0011]优选地，S4中，生根培养基包括1/2 MS培养基、0.3-0.5mg/L NAA、28_32g/L蔗糖和7-9g/L琼脂。
[0012]本发明还提出的上述组织培养植株再生的方法用于东农冬麦I号组织培养植株再生的应用。
[0013]上述“胚切伤略带胚乳法”具体操作为:在胚部横纵各切几刀，切伤胚再取出，取胚时略带一部分胚乳。
[0014]本发明具有以下有益效果:本发明建立了东农冬麦I号成熟胚组织培养植株再生体系，使用的培养基配方简单、培养流程简便，提高了植株的分化及再生效率，能稳定高效的获得再生苗。
【具体实施方式】
[0015]下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
[0016]实施例1
本发明提出的一种组织培养植株再生的方法，包括如下步骤:
51、灭菌与浸种处理:挑选当年籽粒饱满的东农冬麦I号成熟种子，置于75%乙醇溶液进行消毒4min，取出，无菌水清洗后，再置于质量分数为12%的NaClO水溶液中进行灭菌28min，取出，无菌水清洗后，置于黑暗培养箱中浸泡于无菌水中过夜，黑暗培养箱中温度为26 0C ；
52、愈伤组织的诱导:在无菌状态下，将浸泡过夜后的种子置于无菌滤纸上以吸干浸泡过夜后的种子表面水分后，在超净工作台中采用胚切伤略带胚乳法进行取胚，将胚的盾片朝上接种在诱导培养基中培养得到胚性愈伤组织，诱导培养基包括MS培养基、450mg/L酪蛋白、120mg/L 谷氨酰胺、0.05mg/L ΝΑΑ、0.4g/L 肌醇、0.8g/L 脯氨酸、0.6mg/L ΑΒΑ、0.9mg/L 2，4- 二氯苯氧乙酸、32g/L蔗糖和7g/L琼脂；
53、分化培养:将胚性愈伤组织置于分化培养基中培养得到再生苗，分化培养基包括MS 培养基、0.15mg/L NAA,0.12g/L 肌醇、1.lg/L 脯氨酸、3mg/L 6_BA、32g/L 蔗糖和 7g/L 琼月旨;
54、生根移栽:将3cm长的再生苗置于生根培养基中进行壮苗生根培养18d后，生根培养基包括1/2 MS培养基、0.3mg/L NAA、32g/L蔗糖和7g/L琼脂，打开瓶口炼苗5d，然后将植株移栽到花盆中培养。
[0017]实施例2
本发明提出的一种组织培养植株再生的方法，包括如下步骤: 51、灭菌与浸种处理:挑选当年籽粒饱满的东农冬麦I号成熟种子，置于75%乙醇溶液进行消毒6min，取出，无菌水清洗后，再置于质量分数为8%的NaClO水溶液中进行灭菌32min