，取出，无菌水清洗后，置于黑暗培养箱中浸泡于无菌水中过夜，黑暗培养箱中温度为
240C ；
52、愈伤组织的诱导:在无菌状态下，将浸泡过夜后的种子置于无菌滤纸上以吸干浸泡过夜后的种子表面水分后，在超净工作台中采用胚切伤略带胚乳法进行取胚，将胚的盾片朝上接种在诱导培养基中培养得到胚性愈伤组织，诱导培养基包括MS培养基、550mg/L酪蛋白、80mg/L 谷氨酰胺、0.15mg/L ΝΑΑ、0.2g/L 肌醇、1.2g/L 脯氨酸、0.4mg/L ΑΒΑ、1.lmg/L2，4- 二氯苯氧乙酸、28g/L蔗糖和9g/L琼脂；
53、分化培养:将胚性愈伤组织置于分化培养基中培养得到再生苗，分化培养基包括MS 培养基、0.05mg/L NAA,0.13g/L 肌醇、0.9g/L 脯氨酸、5mg/L 6_BA、28g/L 蔗糖和 9g/L 琼月旨;
54、生根移栽:将2cm长的再生苗置于生根培养基中进行壮苗生根培养22d后，生根培养基包括1/2 MS培养基、0.5mg/L NAA、28g/L蔗糖和9g/L琼脂，打开瓶口炼苗4d，然后将植株移栽到花盆中培养。
[0018]实施例3
本发明提出的一种组织培养植株再生的方法，包括如下步骤:
51、灭菌与浸种处理:挑选当年籽粒饱满的东农冬麦I号成熟种子，置于75%乙醇溶液进行消毒5min，取出，无菌水清洗后，再置于质量分数为10%的NaClO水溶液中进行灭菌30min，取出，无菌水清洗后，置于黑暗培养箱中浸泡于无菌水中过夜，黑暗培养箱中温度为
250C ；
52、愈伤组织的诱导:在无菌状态下，将浸泡过夜后的种子置于无菌滤纸上以吸干浸泡过夜后的种子表面水分后，在超净工作台中采用胚切伤略带胚乳法进行取胚，将胚的盾片朝上接种在诱导培养基中培养得到胚性愈伤组织，诱导培养基包括MS培养基、500mg/L酪蛋白、100mg/L 谷氨酰胺、0.lmg/L ΝΑΑ、0.3g/L 肌醇、lg/L 脯氨酸、0.5mg/L ABA、lmg/L2，4- 二氯苯氧乙酸、30g/L蔗糖和8g/L琼脂；
53、分化培养:将胚性愈伤组织置于分化培养基中培养得到再生苗，分化培养基包括MS 培养基、0.lmg/L NAA,0.125g/L 肌醇、lg/L 脯氨酸、4mg/L 6_BA、30g/L 蔗糖和 8g/L 琼月旨;
54、生根移栽:将2.5cm长的再生苗置于生根培养基中进行壮苗生根培养20d后，生根培养基包括1/2 MS培养基、0.4mg/L NAA、30g/L蔗糖和8g/L琼脂，打开瓶口炼苗3d，然后将植株移栽到花盆中培养。
[0019]以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种组织培养植株再生的方法，其特征在于，包括如下步骤: 51、灭菌与浸种处理:挑选当年籽粒饱满的成熟种子，置于75%乙醇溶液进行消毒4-6min，取出，无菌水清洗后，再置于质量分数为8-12%的NaClO水溶液中进行灭菌28-32min，取出，无菌水清洗后，置于黑暗培养箱中浸泡于无菌水中过夜； 52、愈伤组织的诱导:在无菌状态下，将浸泡过夜后的种子无菌干燥后，采用胚切伤略带胚乳法进行取胚，将胚的盾片朝上接种在诱导培养基中培养得到胚性愈伤组织； 53、分化培养:将胚性愈伤组织置于分化培养基中培养得到再生苗； 54、生根移栽:将2-3cm长的再生苗置于生根培养基中进行壮苗生根培养18-22d后，打开瓶口炼苗3-5d，然后将植株移栽到花盆中培养。2.根据权利要求1所述组织培养植株再生的方法，其特征在于，SI中，黑暗培养箱中温度为 25±1°C。3.根据权利要求1所述组织培养植株再生的方法，其特征在于，S2中，无菌干燥的具体操作为将浸泡过夜后的种子置于无菌滤纸上以吸干浸泡过夜后的种子表面水分。4.根据权利要求1所述组织培养植株再生的方法，其特征在于，S2中，取胚的过程中在超净工作台中进行。5.根据权利要求1所述组织培养植株再生的方法，其特征在于，S2中，诱导培养基包括MS培养基、450-550mg/L酪蛋白、80-120mg/L谷氨酰胺、0.05-0.15mg/L NAA,0.2-0.4g/L肌醇、0.8-1.2g/L 脯氨酸、0.4-0.6mg/L ΑΒΑ,0.9-1.lmg/L 2，4- 二氯苯氧乙酸、28_32g/L 蔗糖和7-9g/L琼脂。6.根据权利要求1所述组织培养植株再生的方法，其特征在于，S3中，分化培养基包括MS 培养基、0.05-0.15mg/L NAA,0.12-0.13g/L肌醇、0.9_L lg/L 脯氨酸、3_5mg/L 6-BA、28-32g/L蔗糖和7-9g/L琼脂。7.根据权利要求1所述组织培养植株再生的方法，其特征在于，S4中，生根培养基包括1/2 MS 培养基、0.3-0.5mg/L NAA、28_32g/L 蔗糖和 7_9g/L 琼脂。8.—种权利要求1-7所述组织培养植株再生的方法用于东农冬麦I号组织培养植株再生的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种组织培养植株再生的方法，包括：挑选当年籽粒饱满的成熟种子，置于75%乙醇溶液进行消毒4-6min，取出，无菌水清洗后，再置于质量分数为8-12%的NaClO水溶液中进行灭菌28-32min，取出，无菌水清洗后，置于黑暗培养箱中浸泡过夜；在无菌状态下，将浸泡过夜后的种子无菌干燥后，采用胚切伤略带胚乳法进行取胚，将胚的盾片朝上接种在诱导培养基中培养得到胚性愈伤组织；将胚性愈伤组织置于分化培养基中培养得到再生苗；将2-3cm长的再生苗置于生根培养基中进行壮苗生根培养18-22d后，打开瓶口炼苗3-5d，然后将植株移栽到花盆中培养。本发明方法简便，培养基配方简单，提高了分化及再生效率。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105075862
【申请号】CN201510485343
【发明人】苍晶, 于晶, 郑成成, 王军虹, 徐庆华, 曹晶, 张达
【申请人】东北农业大学
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2015年8月10日