专利名称：一种含有植物源杀菌剂的植物组培抑(杀)菌剂的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域中的植物组织培养应用技术；涉及一种适用于植物组织培养的含有植物源杀菌剂的植物抑(杀)菌剂，可有效减少或防止真菌和细菌污染。它可广泛应用于植物组织培养快速繁殖、转基因及再生植株体系建立等植物生物技术领域。
背景技术：
植物组培苗工厂化生产在我国发展速度很快，组织培养各方面的技术日渐完善。 但在组织培养中常常出现不同程度的污染。据了解，很多学者在初代培养这一阶段，很难得到无菌苗，或者虽然在初代培养得到了无菌苗，但在继代培养时往往出现大量污染甚至全部污染。因此，控制或降低污染率是植物组织培养工厂化生产中不可忽视的关键技术环节， 同时也是衡量组织培养工作效率高低的重要指标之一。从植物组织培养的全过程来看，每一环节都可能出现污染，为了实现低污染率，在组织培养过程中除了加强无菌意识，提高无菌操作各环节的技术规程，注重无菌操作训练，提高操作水平外，同时在培养基中针对性的加入抑(杀)菌剂、抗菌素等，也是减少或防止真菌和细菌污染的重要手段和方法。然而在组织培养过程中由于人们对化学杀菌剂(如升汞)的不合理使用如过度使用，致使化学杀菌剂(如升汞)在使用中产生了环境污染、人畜中毒、残留等问题。随着人们生活质量的提高和环保意识的增强，开发对环境和人畜安全、无污染、低毒、低残留的植物抑(杀)菌剂成为抑(杀)菌剂领域研究的热点。植物源抑(杀)菌剂来源于自然，能在自然界降解，一般不会污染环境及农产品，在环境和人体中积累毒性的可能性不大，对人和牲畜相对安全，对害虫天敌伤害小，具有低毒、低残留的特点，能够保持农产品的高品质，因此植物源抑(杀) 菌剂具有广阔的市场。近几年，对植物源杀虫剂的研究较为深入，包括杀虫植物资源及分布、杀虫有效成分、作用方式、作用机理及商品化等方面；而有关植物源杀菌剂的研究相对薄弱。乳酸链球菌素(Msin)亦称乳链菌肽或音译为尼辛，是某些乳酸链球菌产生的一种多肽物质，由34个氨基酸残基组成，是一种高效、安全、无毒的天然食品防腐剂。Nisin在英国已有40多年的应用历史，在全世界约50个国家和地区得到广泛应用。据国内外相关文献记载及实验，Nisin的耐酸、耐热性能优良，Nisin能有效抑制引起食品腐败的许多革兰氏阳性细菌，如乳杆菌、明串珠菌、小球菌、葡萄球菌、李斯特菌等，特别对产芽孢的细菌如芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌有很强的抑制作用，抑菌效果非常显著且对植物生长几乎无抑制作用。筛选、推广使用新型抑(杀)菌剂，对于减少或防止真菌和细菌污染、降低种苗生产成本，具有十分重要的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种一种含有植物源杀菌剂的植物组培抑 (杀)菌剂，此抑(杀)菌剂对环境和人畜安全、无污染、低毒、低残留、且抑菌谱较广，适用于植物组织培养中减少或防止真菌和细菌污染的抑(杀)菌剂。本发明的技术方案是—种含有植物源杀菌剂的植物组培抑(杀)菌剂，其特征在于其组成成分包括异噻唑啉酮、乳酸链球菌素和中草药诃子、千里光、香薷水提物；其组成成分重量配比为 总体积IOOml的抑菌合剂中含有3. 2g的异噻唑啉酮、11 13. 5g的乳酸链球菌素；香薷、 千里光及诃子三种中草药水提物体积(ml)占该抑菌剂总体积(ml)的12 16% ；香薷、 千里光及诃子三种中草药水提物是香薷、千里光及诃子分别称取5. 0g、2. 5g、7. 5g，加入 1000ml水混合均勻后煎至300ml的中药植物水煎液的过滤液；10%的柠檬酸和10%的苯甲酸钠的水溶液分别占该抑菌剂总体积(ml)的1.5% ；其他为无离子水。本含有植物源杀菌剂的植物组培抑(杀)菌剂，应用于植物组织培养时的抑(杀) 菌。本含有植物源杀菌剂的植物组培抑(杀)菌剂使用方法在应用于植物组织培养时的抑(杀)菌时，在培养基中加入该抑(杀)菌剂0. 35 0. 5% ；本含有植物源杀菌剂的植物组培抑(杀)菌剂使用方法应用该抑(杀)菌剂时， 植物组织培养可在无菌或相对较少有菌的室内环境条件下进行实施；其方法一详细过程包括(1)将植物组织培养所用培养基煮沸溶解；(2)以配制IL培养基计算，在培养基中加入该抑(杀)菌剂3. 5 5. 0ml，然后分装于培养容器内；(3)将分装封口后的培养基进行常规的高温高压灭菌(121°C、15 20min)；(4)将高温高压灭菌后的培养基放入操作室冷却，贮存，备用；(5)植物外植体进行简单的常规消毒处理后，在无菌或相对较少有菌的室内环境条件下接种于含有抑菌合剂的培养基中(接种可用、也可不用超净工作台)；(6)在相对较少的有菌条件下，将植物无菌或相对较少有菌组培苗直接接种于含有抑菌合剂的培养基中进行壮苗生根(接种不需超净工作台)。本含有植物源杀菌剂的植物组培抑(杀)菌剂使用方法其方法二详细过程包括(1)将植物组织培养所用培养基煮沸溶解；(2)以配制IL培养基计算，在培养基中加入该抑(杀)菌剂3. 5 5. 0ml，然后分装于已用高锰酸钾或漂白粉水剂消毒处理后的培养容器内，如玻璃瓶、塑料杯(瓶、盒) 等；(3)分装后，用干净的封口膜、聚丙烯膜、玻璃纸或硫酸纸扎紧瓶口 ；(4)将分装封口后的培养基(培养基未经高温高压灭菌)，放入操作室贮存，备用；(5)植物外植体进行简单的常规消毒处理后，在无菌或相对较少有菌的室内环境条件下接种于含有抑(杀)菌剂的培养基中(接种可用、也可不用超净工作台)；(6)在相对较少的有菌条件下，将植物无菌或相对较少有菌组培苗直接接种于含有抑菌合剂的培养基中进行壮苗生根(接种不需超净工作台)；
接种后的日常管理将接种后的培养材料置于满足植物组织培养的温度、光照条件的房间或设施(如温室)内进行培养。本含有植物源杀菌剂的植物组培抑(杀)菌剂使用方法1)在制备培养基前，将各种成分的试剂先溶解成水溶液，再根据不同需要，按照一定的比例混合而成；2)配制培养基时，用量筒将各种母液，按各种成分的先后顺序和需要量依次吸取， 并混合在一起，加蒸馏水并定容至所需体积；3)在不锈钢锅内加入所配溶液、蔗糖、琼脂粉，加温溶解后，用氢氧化钠或盐酸将培养基的PH值调至所需的要求值；4)按照组织培养不同植物和不同阶段，在培养基中需要加入各种不同的植物激素；5)将培养基煮沸、溶解，在培养基中加入该抑(杀)菌剂3. 5 5. 0ml/lL ①将分装封口后的培养基进行常规的高温高压灭菌温度121°C、时间15 20min ； 将高温高压灭菌后的培养基放入操作室冷却，贮存，备用；②将培养基分装于已用高锰酸钾或漂白粉水剂消毒处理后的培养容器内，如玻璃瓶、塑料杯、瓶或盒；分装后，用干净的封口膜、聚丙烯膜、玻璃纸或硫酸纸扎紧瓶口 ；将分装封口后的培养基，培养基是未经高温高压灭菌的，放入操作室贮存，备用；6)植物外植体进行简单的常规消毒处理后，在无菌或相对较少有菌的室内环境条件下接种于含有抑菌合剂的培养基中，接种可用超净工作台、也可不用超净工作台；在相对较少的有菌条件下，将植物无菌或相对较少有菌组培苗直接接种于含有抑(杀)菌剂的培养基中进行壮苗生根；7)接种后的日常管理将接种后的培养材料置于满足植物组织培养的温度、光照条件的房间或设施内进行培养。本发明的更具体的技术方案1)将异噻唑啉酮、乳酸链球菌素和中草药诃子、千里光、香薷水提物及其他如 10%柠檬酸、10%苯甲酸钠水溶液等按顺序和需要量依次吸取，并混合在一起。2)将上述组合物混勻并用无离子水进行定容；然后装入棕色玻璃瓶中，放入低温箱(4°C)内保存，备用。3)配制培养基时，用量筒将各种母液，按各种成分的先后顺序和需要量依次吸取， 并混合在一起，加蒸馏水并定容至所需体积。4)在不锈钢锅内加入所配溶液、蔗糖、琼脂粉，加温溶解后，用氢氧化钠或盐酸将培养基的PH值调至所需的要求值。5)按照组织培养不同植物和不同阶段，在培养基中需要加入各种不同的植物激
ο6)将培养基煮沸、溶解，在培养基中加入该抑(杀)菌剂3. 5 5. Oml/IL ①将分装封口后的培养基进行常规的高温高压灭菌(121°C、15 20min)；将高温高压灭菌后的培养基放入操作室冷却，贮存，备用。②将培养基分装于已用高锰酸钾或漂白粉水剂消毒处理后的培养容器内，如玻璃瓶、塑料杯(瓶、盒)等；分装后，用干净的封口膜、聚丙烯膜、玻璃纸或硫酸纸扎紧瓶口 ；将分装封口后的培养基(培养基未经高温高压灭菌)，放入操作室贮存，备用。7)植物外植体进行简单的常规消毒处理后，在无菌或相对较少有菌的室内环境条件下接种于含有抑菌合剂的培养基中(接种可用、也可不用超净工作台)；在相对较少的有菌条件下，将植物无菌或相对较少有菌组培苗直接接种于含有抑(杀)菌剂的培养基中进行壮苗生根培养(接种不需超净工作台)。8)接种后的日常管理将接种后的培养材料置于满足植物组织培养的温度、光照条件的房间或设施(如温室)内进行培养；外植体将将会被诱导出愈伤组织或分化出的不定芽与植株；壮苗生根培养后将会得到大量具有根系发达、生长健壮的组培苗植株。本发明具有以下优点和特点本发明提供了一种对环境和人畜安全、无污染、低毒、低残留、且抑菌谱较广，适用于植物组织培养中减少或防止真菌和细菌污染的抑(杀)菌剂，并较好地解决了植物组织培养工厂化、产业化生产中防止植物组织真菌和细菌污染体系建立的难题。在培养基中加入该抑(杀)菌剂，可以有效减少或防止真菌和细菌污染，使植物组织正常生长发育，对植物的生根、生长、分化等无大的不良影响，提高组织培养成功率；应用在植物开放式组织培养中，如植物培养后期的壮苗生根阶段，用玻璃瓶、塑料杯(瓶、盒)作培养容器，可省去培养基高温高压灭菌程序，也不需超净工作台就可接种，在有菌或少菌的室内环境条件下进行接种，脱离了严格的无菌操作环境，简化了植物组织培养育苗环节，提高了工作效率，节约了大量的能源、降低植物组培苗的生产成本，大大地提高了经济效益。该抑(杀)菌剂具有使用方法简单、效果较好，且抑菌谱较广，对环境和人畜安全、无污染、低毒、低残留等优点，有很大的应用推广价值。1.该抑(杀)菌剂是含有植物源杀菌剂的植物组培抑(杀)菌剂，所含组分无污染、低毒、低残留、对环境和人畜安全且抑菌谱较广。2.该抑(杀)菌剂具有耐高温高压、易保存或保存时期较长，不需经常调配、使用方法简单、效果较好等优点，有很大的应用推广价值，使用后可在较短时间内建立试管苗的无菌繁殖体系，将其应用到植物组织培养快速繁殖及再生植株体系建立及转基因研究中， 能有效减少或防止真菌和细菌污染，植物组织生长发育正常，在较短时间内建立试管苗的无菌繁殖体系，从而大大地提高了植物组织培养的成功率，为植物快速繁殖、再生植株体系建立及转基因技术研究提供了物质基础和技术保障，具有很好的应用推广价值。3.将该抑(杀)菌剂应用在植物开放式组织培养中，如植物培养后期的壮苗生根阶段，可用玻璃瓶、塑料杯(瓶、盒)作培养容器，省去培养基高温高压灭菌程序，也不需超净工作台就可接种，在有菌或少菌的室内环境条件下进行接种，脱离了严格的无菌操作环境，简化了植物组织培养育苗环节，提高了工作效率，节约了大量的能源、降低植物组培苗的生产成本，大大地提高了经济效益。应用该抑(杀)菌剂，与目前国内大多数人所采用的在培养基中加入抗生素的传统方法相比，可以较好地解决了一旦不再添加抗生素后真菌和细菌污染就会复发的问题。 该抑(杀)菌剂具有耐高温高压、易保存或保存时期较长，不需经常调配、使用方法简单、效果较好及无污染、低毒、低残留、对环境和人畜安全且抑菌谱较广等优点。利用该抑(杀) 菌剂，能有效减少或防止真菌和细菌污染，使植物组织正常生长发育，并且对植物的生根、 生长、分化等几乎无大的不良影响，在较短时间内建立试管苗的无菌繁殖体系，获得大量再生植株，从而大大地提高了植物组织培养的成功率。可有效地减少或防止培养物真菌和细菌的污染，并对植物生长无不良影响，从而提高了植物组织培养的成功率。同时它也可应用在植物开放式培养中，如植物培养后期的壮苗生根阶段，直接在培养基中加入该抑(杀)菌剂，培养基不经过高压灭菌程序，也无需超净工作台，就可在有菌或少菌的室内环境条件下进行接种，简化了植物组织培养育苗环节，提高了工作效率，节约了大量的能源、降低植物组培苗的生产成本，大大地提高了经济效益。
图1植株组织培养抑(杀)菌剂的配制和应用路线图
具体实施例方式针对植物组织培养过程中非常容易出现污染而造成重大损失的问题，本发明人之一曾经进行了大量的研究工作，筛选出一种适用于植物组织培养的新型抑菌剂组合物 TJ801(含有ε-聚赖氨酸、异噻唑啉酮；诃子、千里光及香薷中草药水提物和大蒜浸提液等)。在组织培养过程中，在培养基中加入该抑菌剂，可减少了或抑制真菌和细菌污染。但是，该抑菌剂有些成分不耐高温高压，使用时虽可省去培养基高温高压灭菌程序，但一旦培养基经高温高压灭菌，也可能降低其抑制真菌和细菌污染的能力和效果；此外，该抑菌剂不易保存或保存时期短，需经常调配。本作者又经过大量的的研究工作，现筛选出了这种对环境和人畜安全、无污染、低毒、低残留、且抑菌谱较广，适用于植物组织培养中减少或防止真菌和细菌污染的抑(杀)菌剂。该抑(杀)菌剂具有耐高温高压、易保存或保存时期较长，不需经常调配、使用方法简单、效果较好等优点，有很大的应用推广价值，使用后可在较短时间内建立试管苗的无菌繁殖体系，从而大大地提高了植物组织培养的成功率，为植物快速繁殖、再生植株体系建立及转基因技术研究提供了物质基础和技术保障。同时，将该抑菌剂应用在植物开放式组织培养中，如植物培养后期的壮苗生根阶段，用玻璃瓶、塑料杯 (瓶、盒)作培养容器，可省去培养基高温高压灭菌程序，也不需超净工作台就可接种，在有菌或少菌的室内环境条件下进行接种，脱离了严格的无菌操作环境，简化了植物组织培养育苗环节，提高了工作效率，节约了大量的能源、降低植物组培苗的生产成本，大大地提高了经济效益。一种含有植物源杀菌剂的植物组培抑(杀)菌剂，其组成成分及配比为包括异噻唑啉酮、乳酸链球菌素和中草药诃子、千里光、香薷水提物等，其组成成分重量配比为总体积IOOml的抑菌合剂中含有3. 2g的异噻唑啉酮、11 13. 5g的乳酸链球菌素；香薷、千里光及诃子三种中草药水提物体积(ml)占该抑菌剂总体积(ml)的12 16% ；香薷、千里光及诃子三种中草药水提物是香薷、千里光及诃子分别称取5. 0g、2. 5g、7. 5g，加入1000ml水混合均勻后煎至300ml的中药植物水煎液的过滤液；10%的柠檬酸和10%的苯甲酸钠的水溶液分别占该抑菌剂总体积(ml)的1.5% ；其他为无离子水。应用于植物组织培养时，在培养基中加入该抑(杀)菌剂0. 35 0. 5%，可有效地减少或防止培养物真菌和细菌的污染，并对植物生长无不良影响，从而提高了植物组织培养的成功率。同时它也可应用在植物开放式培养中，如植物培养后期的壮苗生根阶段，直接在培养基中加入该抑(杀)菌剂，培
8养基不经过高压灭菌程序，也无需超净工作台，就可在有菌或少菌的室内环境条件下进行接种，简化了植物组织培养育苗环节，提高了工作效率，节约了大量的能源、降低植物组培苗的生产成本，大大地提高了经济效益。植物组织培养可在无菌或相对较少有菌条件下实施；其过程包括将异噻唑啉酮、乳酸链球菌素和中草药诃子、千里光、香薷水提物及其他如10%柠檬酸、10%苯甲酸钠水溶液等按顺序和需要量依次吸取，混合均勻，用无离子水进行定容， 装入棕色玻璃瓶中，低温(4°c)内保存，备用；配培养基时，用量筒将各种母液，按成分的先后顺序和需要量依次吸取，混勻，蒸馏水并定容至所需体积，在不锈钢锅内加入所配溶液、 蔗糖、琼脂粉，加温溶解，用氢氧化钠或盐酸将培养基的PH值调至所需的要求值，加入各种不同的植物激素和该抑(杀)菌剂；(方法1)培养基进行常规的高温高压灭菌(121°C、 15 20min)，灭菌后的培养基放入操作室冷却，贮存，备用。(方法2)将培养基分装于已用高锰酸钾或漂白粉水剂消毒处理后的培养容器内，如玻璃瓶、塑料杯(瓶、盒)等；分装后，用干净的封口膜、聚丙烯膜、玻璃纸或硫酸纸扎紧瓶口 ；将分装封口后的培养基(培养基未经高温高压灭菌)，放入操作室贮存，备用。植物外植体进行简单的常规消毒处理后，在无菌或相对较少有菌的室内环境条件下接种于含有抑菌合剂的培养基中(接种可用、也可不用超净工作台)；在相对较少的有菌条件下，将植物无菌或相对较少有菌组培苗直接接种于含有抑(杀)菌剂的培养基中进行壮苗生根培养(接种不需超净工作台)。接种后的日常管理将接种后的培养材料置于满足植物组织培养的温度、光照条件的房间或设施(如温室)内进行培养；外植体将将会被诱导出愈伤组织或分化出的不定芽与植株；壮苗生根培养后将会得到大量具有根系发达、生长健壮的组培苗植株。本发明提供了一种对环境和人畜安全、无污染、低毒、低残留、抑菌谱较广，适用于植物组织培养中减少或防止真菌和细菌污染的抑(杀)菌剂，并较好地解决了植物组织培养工厂化、产业化生产中防止植物组织真菌和细菌污染体系建立的难题。在培养基中加入该抑(杀)菌剂，可以有效减少或防止真菌和细菌污染，使植物组织正常生长发育，对植物的生根、生长、分化等无大的不良影响，提高组织培养成功率；应用在植物开放式组织培养中，如植物培养后期的壮苗生根阶段，用玻璃瓶、塑料杯(瓶、盒)作培养容器，可省去培养基高温高压灭菌程序，也不需超净工作台就可接种，在有菌或少菌的室内环境条件下进行接种，脱离了严格的无菌操作环境，简化了植物组织培养育苗环节，提高了工作效率，节约了大量的能源、降低植物组培苗的生产成本，大大地提高了经济效益。该抑(杀)菌剂具有使用方法简单、效果较好，对环境和人畜安全、无污染、低毒、低残留且抑菌谱较广等优点， 有很大的应用推广价值。下面通过具体实施例，进一步详细介绍本发明实施例1 ‘青苹果’竹芋茎尖丛生芽的诱导(一 )丛生芽的诱导(实施例1中本步骤是在无菌条件下实施的)(1)取‘青苹果’竹芋植株的幼嫩侧芽或顶芽作为外植体；(2)将侧芽或顶芽先用洗衣粉液浸泡lOmin，用流水冲洗20min ；(3)在超净工作台上可先用本发明的抑(杀)菌剂10%浸泡lOmin，再用75%酒精处理15s、0. 升汞处理7 Smin取出，用无菌水冲洗5次后浸入无菌水中备用；
(4)将预处理后的侧芽或顶芽用已消毒的手术刀切去多余苞片，只剩下较小的茎尖和芽尖，将其接种于含有抑菌剂的诱导培养基上进行培养，接种时保持所述茎尖和芽尖向上； (5)培养温度为23 27°C，先在连续黑暗条件下诱导20d，随后逐渐增加光照再生长30 60d，即可诱导出不定芽；(二)不定芽的增殖培养(1)将上面诱导出的不定芽置于含有抑菌剂的增殖培养基上继续培养，可以增殖出大量的不定芽。(2)培养温度为23 27°C、光照为每天12h ；(三)无菌不定芽的壮苗生根培养(无菌培养)将上面增殖培养出的不定芽置于含有抑菌剂的增殖培养基上增殖培养出生根的无菌苗。实施例2青苹果’竹芋丛生芽的壮苗生根培养实施例2是在相对较少有菌条件下实施。本步骤用玻璃瓶、塑料杯(瓶、盒)作培养容器，培养基可省去高压灭菌程序，接种可不需超净工作台，脱离严格无菌的操作环境， 简化了植物组织培养育苗环节，提高了工作效率，大大降低了育苗成本。(1)制备含有抑菌剂的壮苗生根培养基培养基煮沸溶解后，在培养基中加入植物壮苗生根的激素和抑菌剂物2. 0ml/lL，然后分装于已洗净并晾干的培养容内(如玻璃瓶、塑料杯、塑料瓶、塑料盒等)；用封口膜封口。(2)在较为洁净的植物组培操作室内，将诱导出的不定芽置于含有抑菌剂的壮苗生根培养培养基上培养；(3)培养温度为23 27°C、光照为每天12h ；(4)培养20 30d，即可获得根系发育良好，生长健壮的植株；(5)当苗长至株高2 ^m、最大叶宽0. 7 0. 9cm且带有2 3条粗壮根时即可进行移栽驯化。
权利要求
1.一种含有植物源杀菌剂的植物组培抑(杀)菌剂，其特征在于其组成成分包括异噻唑啉酮、乳酸链球菌素和中草药香薷、千里光及诃子水提物；其组成成分重量配比为总体积IOOml的抑菌合剂中含有3. 2g的异噻唑啉酮、11 13. 5g的乳酸链球菌素；香薷、千里光及诃子三种中草药水提物体积(ml)占该抑菌剂总体积(ml)的12 16% ；香薷、千里光及诃子三种中草药水提物是香薷、千里光及诃子分别称取5. 0g、2. 5g、 7. 5g，加入1000ml水混合均勻后煎至300ml的中药植物水煎液的过滤液；10%的柠檬酸和10%的苯甲酸钠的水溶液分别占该抑菌剂总体积(ml)的1.5% ；其他为无离子水。
2.根据权利要求1所述的一种含有植物源杀菌剂的植物组培抑(杀)菌剂，应用于植物组织培养时的抑(杀)菌。
3.根据权利要求2所述的一种含有植物源杀菌剂的植物组培抑(杀)菌剂使用方法 在应用于植物组织培养时的抑(杀)菌时，在培养基中加入该抑(杀)菌剂0. 35 0.5%。
4.根据权利要求3所述的一种含有植物源杀菌剂的植物组培抑(杀)菌剂使用方法应用该抑(杀)菌剂时，植物组织培养可在无菌或相对较少有菌的室内环境条件下进行实施；其详细过程包括(1)将植物组织培养所用培养基煮沸溶解；(2)以配制IL培养基计算，在培养基中加入该抑(杀)菌剂3.5 5. 0ml，然后分装于培养容器内；(3)将分装封口后的培养基进行常规的高温高压灭菌(121°C、15 20min)；(4)将高温高压灭菌后的培养基放入操作室冷却，贮存，备用；(5)植物外植体进行简单的常规消毒处理后，在无菌或相对较少有菌的室内环境条件下接种于含有抑菌合剂的培养基中(接种可用、也可不用超净工作台)；(6)在相对较少的有菌条件下，将植物无菌或相对较少有菌组培苗直接接种于含有抑菌合剂的培养基中进行壮苗生根(接种不需超净工作台)。
5.根据权利要求3所述的一种含有植物源杀菌剂的植物组培抑(杀)菌剂使用方法 其详细过程包括(1)将植物组织培养所用培养基煮沸溶解；(2)以配制IL培养基计算，在培养基中加入该抑(杀)菌剂3.5 5. 0ml，然后分装于已用高锰酸钾或漂白粉水剂消毒处理后的培养容器内，如玻璃瓶、塑料杯(瓶、盒)等；(3)分装后，用干净的封口膜、聚丙烯膜、玻璃纸或硫酸纸扎紧瓶口；(4)将分装封口后的培养基(培养基未经高温高压灭菌)，放入操作室贮存，备用；(5)植物外植体进行简单的常规消毒处理后，在无菌或相对较少有菌的室内环境条件下接种于含有抑(杀)菌剂的培养基中(接种可用、也可不用超净工作台)；(6)在相对较少的有菌条件下，将植物无菌或相对较少有菌组培苗直接接种于含有抑菌合剂的培养基中进行壮苗生根(接种不需超净工作台)；接种后的日常管理将接种后的培养材料置于满足植物组织培养的温度、光照条件的房间或设施(如温室)内进行培养；
6.根据权利要求3所述的一种含有植物源杀菌剂的植物组培抑(杀)菌剂使用方法 1)在制备培养基前，将各种成分的试剂先溶解成水溶液，再根据不同需要，按照一定的比例混合而成；2)配制培养基时，用量筒将各种母液，按各种成分的先后顺序和需要量依次吸取，并混合在一起，加蒸馏水并定容至所需体积；3)在不锈钢锅内加入所配溶液、蔗糖、琼脂粉，加温溶解后，用氢氧化钠或盐酸将培养基的PH值调至所需的要求值；4)按照组织培养不同植物和不同阶段，在培养基中需要加入各种不同的植物激素；5)将培养基煮沸、溶解，在培养基中加入该抑(杀)菌剂3.5 5. 0ml/lL ①将分装封口后的培养基进行常规的高温高压灭菌温度121°C、时间15 20min;将高温高压灭菌后的培养基放入操作室冷却，贮存，备用；②将培养基分装于已用高锰酸钾或漂白粉水剂消毒处理后的培养容器内，如玻璃瓶、 塑料杯、瓶或盒；分装后，用干净的封口膜、聚丙烯膜、玻璃纸或硫酸纸扎紧瓶口 ；将分装封口后的培养基，培养基是未经高温高压灭菌的，放入操作室贮存，备用；6)植物外植体进行简单的常规消毒处理后，在无菌或相对较少有菌的室内环境条件下接种于含有抑菌合剂的培养基中，接种可用超净工作台、也可不用超净工作台；在相对较少的有菌条件下，将植物无菌或相对较少有菌组培苗直接接种于含有抑(杀)菌剂的培养基中进行壮苗生根；7)接种后的日常管理将接种后的培养材料置于满足植物组织培养的温度、光照条件的房间或设施内进行培养。
全文摘要
一种含有植物源杀菌剂的植物组培抑(杀)菌剂，其组成成分包括异噻唑啉酮、乳酸链球菌素和中草药诃子、千里光、香薷水提物；应用于植物组织培养时，在培养基中加入该抑(杀)菌剂0.35～0.5％，可有效地减少或防止培养物真菌和细菌的污染，并对植物生长无大的不良影响，从而提高了植物组织培养的成功率；也可应用在植物开放式培养中，如植物培养后期的壮苗生根阶段，直接在培养基中加入该抑(杀)菌剂，培养基不经过高压灭菌程序，也无需超净工作台，就可在有菌或少菌的室内环境条件下进行接种，简化了植物组织培养育苗环节，提高了工作效率，节约了大量的能源、降低植物组培苗的生产成本，具有十分重要的实际应用价值。
文档编号A01N65/08GK102308750SQ20111021024
公开日2012年1月11日 申请日期2011年7月26日 优先权日2011年7月26日
发明者吴金凤, 夏时云, 宫宇, 张友强, 李楠, 李雁鹏, 邢洁 申请人:天津滨城龙达集团有限公司