专利名称：一种文心兰组培育苗的方法
技术领域：
本发明涉及一种文心兰组培育苗的方法。
背景技术：
文心兰(Oncidium)又名舞女兰、金蝶兰，系兰科文心兰属植物，属热带复茎性陆生兰，全世界原生种多达750种以上，原产南美洲热带地区，种类分布最多的有巴西、美国及秘鲁等，是世界五大切花品种之一。文心兰一年仅繁殖2-3个芽，繁殖系数低，速度慢，难以满足市场的需求，组培育苗是文心兰主要扩繁增殖手段。文心兰组培育苗一般以花梗、茎尖等为外植体先诱导再生芽，再生芽通过丛生芽和原球茎两种途径进行增殖；丛生芽途径具有变异率低，有利于保持母本性状的优点，但繁殖系数低；原球茎途径具有繁殖系数高，有利于工厂化大规模生产的优点，但种苗变异率高；现有大部分的文心兰组培的各阶段的培养基交较复杂，差异性较大，不利于工厂化生产。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有的文心兰组培技术的不足，提供一条繁殖系数高和变异率低的文心兰的组培岳庙方法。本发明的一种文心兰的组培育苗方法，包括外植物体消毒、初诱导培养、继代培养和生根培养，具体步骤如下
(1)外植物体消毒，选用花梗腋芽，用质量分数为0.1%多菌灵溶液浸泡，冲洗干净，然后用抗褐化剂浸泡，再用质量分数为0. 1%升汞常规消毒；
(2)初诱导培养，培养基为l/2MS+10g/L琼脂+25g/L蔗糖+lg/L活性炭+2. 5-3. Omg/ L TDZ+ 0.2-0.4 mg/L NAA，pH 值 5. 8，光照时间为 14 hr/d，光照强度 1500 2000 Lux，温度为 25士2°C ；
(3)将丛生芽分化继代培养，培养基为l/2MS+10g/L琼脂+30g/L蔗糖+lg/L活性炭+Ig亚硫酸钠+2. 8 mg/L TDZ+0. 32mg/L NAA, pH值5. 8，光照时间为14 hr/d，光照强度 1500 2000 Lux，温度为 25士2°C ；
(4)生根培养，培养基为l/2MS+0.2 0. 4mg/L 6-BA+0. 8 1. 6mg/L NAA+lg/L活性炭+20 g/L蔗糖+8 8/1琼脂，？!1值5.8，光照时间为14 hr/d，光照强度1500 2000 Lux，温度为 25 士 2°C。本发明所述的一种文心兰的组培育苗方法，抗褐化剂为质量分数为0. 2%的维生素C蒸馏水溶液。本发明所述的一种文心兰的组培育苗方法，丛生芽分化继代增殖培养可采用固体培养方式进行培养。本发明所述的一种文心兰的组培育苗方法，生根培养基中6-BA浓度为0. 3mg/L ，NAA 浓度为 l.ang/L。
本发明达到的有益效果
(1)外植物体用洲维生素C水溶液浸泡30分钟后再用0.1%升汞常规消毒，可使外植体产生褐化时间从30分钟延缓到180分钟；
(2)初诱导培养中添加抗褐化物质活性炭或亚硫酸钠后，能显著降低外植体褐化率，从而显著提高外植体接种成活率和分化率；
(3)l/2MS+10g/L琼脂+30g/L蔗糖(PH值5.8)为基本培养基，同时添加lg/L活性炭和亚硫酸钠后，采用固体培养方式进行丛生芽增殖效果较好，丛生芽诱导分化率高，为90. 0%， 增殖系数可达6. 0-7. 4，经5-6代继代增殖培养后，丛生芽变异率仅为0. 1%，；
(4)梗初诱导、丛生芽继代增殖配方均相同的1/2MS培养基进行无根丛生芽的生根诱导研究取得较好的效果，单独使用生长素NAA进行生根诱导，芽苗粗壮、矮小，平均每株发根1-2条，根系粗壮，但是培养40天左右黄化严重。使用细胞分裂素6-BA与生长素NAA进行组合后，文心兰丛生芽生根率随生长素浓度增加而逐渐提高，高浓度的细胞分裂素抑制芽苗的生长而促进侧芽及类原球茎的萌蘖，影响芽苗的质量。通过多次重复试验，在1/2MS 培养基中添加0. 3mg/L 6-BA和l.aiig/L NAA为文心兰丛生芽生根诱导培养基的效果好，接种60天后生根率可达100. 0%，芽苗生长整齐，平均高度在3. 0左右，每株长根3-4条，根长 1. 5-3. 5cm,根粗0. 5mm, 60%产生假鳞茎；
(4)初代培养、继代培养和生根培养各个阶段的培养基配方差异较小，初代培养和继代培养的激素组合相同，仅是浓度有细微差异，有利于工厂化组培育苗。
具体实施例方式
取文心兰品种‘南茜’ 9-10月初带腋芽花梗茎段为外植体。修剪掉较老的组织，在自来水下冲洗干净，用0. 1%多菌灵+0. 2%洗洁净水溶液浸泡30分钟，冲洗干净；然后用抗褐化剂m维生素c蒸馏水溶液浸泡30分钟，用ο. 1%升汞常规消毒10分钟，最后在超净工作台上剪切外植体。以处理好的带腋芽花梗茎段为外植体，初诱导培养基配方为l/2MS+10g/ L 琼脂 +25g/L 蔗糖 +lg/L 活性炭 +3. Omg/L TDZ+0. 4 mg/L NAA, PH 值为 5. 8，光照时间 14 hr/d，光照强度20001UX，培养温度为25 士 2°C，成活率为86. 3%，分化率可达到53. 5% ；将再生芽在超净工作台上用手术刀切割成带1叶芽段，长1cm，在l/2MS+10g/L琼脂+30g/L蔗糖+lg/L活性炭+Ig亚硫酸钠+2. 8 mg/L TDZ+0. 32mg/L NAA培养基中培养，培养条件为 PH值为5. 8，光照时间14hr/d，光照强度20001ux，培养温度为25 士 2°C，丛生芽诱导分化率， 为90. 0%，增殖系数为6. 0-7. 4，经5-6代继代增殖培养后，丛生芽变异率仅为0. 1% ；生根诱导培养基为l/2MS+0. 3mg/L 6-BA+l. 2mg/LNAA+lg/L 活性炭+20 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂，PH 值为5. 8，光照时间14hr/d，光照强度20001UX，培养温度为25士 2°C，丛生芽接种60天后生根率达100. 0%，芽苗生长整齐，平均高度在3. 0左右，每株长根3-4条，根长1. 5-3. 5cm,根粗0. 5_，60%产生假鳞茎。
权利要求
1.一种文心兰的组培育苗方法，包括外植物体消毒、初诱导培养、继代培养、生根培养， 其特征在于(1)外植物体消毒，选用花梗腋芽，用质量分数为0.1%多菌灵溶液浸泡，冲洗干净，再用抗褐化剂溶液浸泡，最后用质量分数为0. 1%升汞常规消毒；(2)初诱导培养，培养基为l/2MS+10g/L琼脂+25g/L蔗糖+lg/L活性炭+2. 5-3. Omg/ L TDZ+ 0.2-0.4 mg/L NAA，pH 值 5. 8，光照时间为 14 hr/d，光照强度 1500 2000 Lux，温度为 25士2°C ；(3)将丛生芽分化继代培养，培养基为l/2MS+10g/L琼脂+30g/L蔗糖+lg/L活性炭+Ig亚硫酸钠+2. 8 mg/L TDZ+0. 32mg/L NAA, pH值5. 8，光照时间为14 hr/d，光照强度 1500 2000 Lux，温度为 25士2°C ；(4)生根培养，培养基为l/2MS+0.2 0. 4mg/L 6-BA+0. 8 1. 6mg/L NAA+lg/L活性炭+20 g/L蔗糖+8 8/1琼脂，？!1值5.8，光照时间为14 hr/d，光照强度1500 2000 Lux，温度为 25 士 2°C。
2.根据权利要求1所述的一种文心兰的组培育苗方法，其特征在于抗褐化剂溶液为质量分数为0. 2%的维生素C蒸馏水溶液。
3.根据权利要求1所述的一种文心兰的组培育苗方法，其特征在于丛生芽分化继代增殖培养可采用固体培养方式进行培养。
4.根据权利要求1所述的一种文心兰的组培育苗方法，其特征在于生根培养基中 6-BA 浓度为 0. 3mg/L，NAA 为浓度 1. 2mg/L。
全文摘要
本发明的一种文心兰的组培育苗方法，包括外植物体消毒、初诱导培养、继代培养、生根培养，外植物体选用花梗腋芽，用多菌灵溶液浸泡，用抗褐化剂浸泡，再用汞常规消毒；初诱导培养基为1/2MS+琼脂+蔗糖+活性炭+TDZ+NAA，继代培养基为1/2MS+琼脂+蔗糖+活性炭+亚硫酸钠+TDZ+NAA，生根诱导培养基为1/2MS+6-BA+NAA+活性炭+蔗糖+琼脂。本发明的文心兰的组培育苗方法具有繁殖系数高、变异率低，各阶段培养基差异性小，经5-6代继代增殖培养后，丛生芽变异率仅为0.1%，增殖系数为6.0-7.4。
文档编号A01H4/00GK102318560SQ201110257550
公开日2012年1月18日 申请日期2011年9月1日 优先权日2011年9月1日
发明者刘燕, 向立荣, 王济红, 祁翔 申请人:贵州省生物研究所