专利名称：一种带目标发病病菌的模拟栽培土及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明属于农业微生物应用技术领域，特别涉及一种带目标发病病菌的模拟栽培土及其制备方法与应用。
背景技术：
烟草黑胫病(tobacco black shank)是世界烟草生产中的主要病害。目前，在实验室、温室有采用平板菌丝块贴接(王革，郑小波，陆家云等.云南省烟草黑胫病菌致病力分化的研究.南京农业大学学报，1997，20(4):30-35)、搅碎菌丝液或游动孢子液灌根等烟草黑胫病菌接种方法。菌丝块通常贴接于根茎部，病菌从根茎交接处的表皮侵染；菌丝液或游动孢子液灌根常常人为造成一些伤口，以便病菌从根部侵染。这两种方法操作复杂、费工费时，一般不适用于大田人工接种。在田间应用较多的是谷物培养物接种，接种后病菌可在未利用的谷物培养基上繁殖、存活一段时间，保障了病菌与烟株根茎部的充分接触，有利于病菌侵染，但也存在较大风险，谷物培养的病菌很容易成为其拮抗菌的诱饵而导致病菌消解， 病菌数量降低，不能有效侵染烟株而发病。因此，有必要制备类似于烟草连作导致黑胫病发生严重的田间土壤来模仿田间自然发病，以便测定烟草品种对黑胫病的抗感性、筛选防治烟草黑胫病的药剂或生防菌、天然产物。
发明内容
本发明的目的在于提供带目标发病病菌的模拟栽培土 ；另一目的在于提供一种该模拟栽培土的制备方法；第三目的在于提供该模拟栽培土的应用。本发明的第一目的是这样实现的，所述的模拟栽培土包括目标病菌培养物、栽培基料与基土，所述的目标病菌培养物、栽培基料与基土的体积比为1:21:41。本发明的另一目的是这样实现的，所述的方法包括培养物准备、栽培基质配制和栽培土配制,具体包括
A、培养物准备，将接种并培养成熟的带烟草黑胫病病菌的培养物捣碎或搅碎成粒径 1^3mm的粗粉状；
B、栽培基质配制，将破碎好培养物颗粒与栽培基料按体积比1:2 4混合，并搅拌混匀制成栽培基质；
C、栽培土配制，将栽培基质与基土按体积比1:2 4混合均匀即制成带烟草黑胫病病菌的栽培土。本发明第三目的是这样实现的，所述的带目标发病病菌的模拟栽培土用于烟草品种对黑胫病的抗感性测定；或筛选防治烟草黑胫病的药剂或生防菌、天然产物。所述的带目标发病病菌的模拟栽培土用作盆栽土；或塘施烟株根系、撒施烟株根茎四周作为人造病菌土供大田栽培用。本发明相对于现有技术，具有以下优点及效果
1、带目标发病病菌的模拟栽培土中病菌数量稳定、侵染更有效。制作形成的带目标发病病菌的模拟栽培土类似于烟草连作自然形成的带烟草黑胫病病菌的植烟土。由于栽培基质经过处理，杂菌量小，而且栽培基质本身有机质含量高，易吸水、持水力强，有利于病菌的存活，同时为病菌的侵染创造了良好的湿度环境，病菌与寄主接触时间长，侵染成功几率更大，侵染更有效；
2、病菌侵染方式更接近自然。带目标发病病菌的模拟栽培土可直接用于盆栽土，病菌可以通过根茎部、根系侵染烟株；也可以在大田塘施烟株根系，即置换原栽培土，形成带烟草黑胫病病菌的客土，病菌可以通过根系侵染烟株；撒施烟株根茎四周，病菌可以通过根茎部侵染烟株；还可以同时塘施烟株根系、撒施烟株根茎四周，病菌可以通过根茎部、根系侵染烟株。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制， 基于本发明教导所作的任何变更或改进，均属于本发明的保护范围。所述的模拟栽培土包括目标病菌培养物、栽培基料与基土，所述的目标病菌培养物、栽培基料与基土的体积比为1:21:41。所述的目标病菌培养物、栽培基料与基土的体积比为1:2. 5^3. 5:5 7。所述的目标病菌培养物为固体培养物或液体培养物；所述的栽培基料为草炭、农家肥或饼肥中的任意一种或一种以上的混合物；所述的基土为腐植土、耕作土或非耕作土中的任意一种或一种以上的混合物。所述的农家肥为人、家禽、牲畜粪便，或农作物秸杆经发酵腐熟处理后制成的农家肥。所述的耕作土为水稻、小麦、豆类、谷类、薯类农作物种植土中的一种或一种以上的混合土。所述的带目标发病病菌的模拟栽培土的方法，所述的方法包括培养物准备、栽培基质配制和栽培土配制，具体包括
所述的培养物准备是将接种并培养成熟的带烟草黑胫病病菌的培养物捣碎或搅碎成粒径l 3mm的粗粉状；
所述的栽培基质配制是将破碎好培养物颗粒与栽培基料按体积比1:2 4混合，并搅拌混匀制成栽培基质；
所述的栽培土配制是将栽培基质与基土按体积比1:2 4混合均匀即制成带烟草黑胫病病菌的栽培土。所述的培养物为液体培养物或固体培养物；所述的栽培基料为经过粉碎处理成粒径f 3_的草炭、腐熟的农家肥或饼肥中任意一种或一种以上的混合物。所述的基土为经5(T60°C高温消毒、杀菌处理且无线虫的腐植土、耕作土或非耕作土中任意一种或一种以上的混合土，基土粉碎成粒径3_的粗粉状。下面以烟草黑胫病病菌模拟栽培土为例进一步说明本发明，其他目标病菌模拟栽培土同样可以采用本发明方法配制。实施例I
将黑胫病病菌固体培养物与人畜粪便发酵后的农家肥与腐殖土按体积比1:2:4的比例配制成模拟栽培土。首先将I份体积的黑胫病病菌固体培养物破碎成广3_粗粉状，加入2份体积5(T55°C高温消毒、杀菌处理后的人畜粪便发酵后的农家肥充分混合、拌匀；再将4份体积经5(T55°C消毒后的腐殖土混匀即得到带黑胫病病菌的模拟栽培土。实施例2
将黑胫病病菌固体培养物与草炭与水稻耕作土按体积比1:4:8的比例配制成模拟栽培土。首先将I份体积的黑胫病病菌固体培养物破碎成f 3_粗粉状，加入4份体积水蒸汽消毒、杀菌处理后的草炭充分混合、拌匀；再将8份体积经55飞(TC消毒后且无线虫的水稻耕作土混匀即得到带黑胫病病菌的模拟栽培土。实施例3
将黑胫病病菌固体培养物与腐熟的饼肥与豆类耕作土按体积比1:3. 5:7的比例配制成模拟栽培土。首先将I份体积的黑胫病病菌固体培养物破碎成广3_粗粉状，加入3. 5 份体积6(T65°C消毒、杀菌处理后的腐熟的饼肥充分混合、拌匀；再将7份体积经5(T55°C消毒后且无线虫的豆类耕作土混匀即得到带黑胫病病菌的模拟栽培土。实施例4
将黑胫病病菌液体培养物、腐熟的农作物秸杆农家肥与非耕作土按体积比1:2. 5:4 的比例配制成模拟栽培土。首先将I份体积的黑胫病病菌固体培养物，加入2. 5份体积 5(T55°C消毒、杀菌处理后的腐熟饼肥(粉碎至粒径f3mm)充分混合、拌匀；再将4份体积经 55飞(TC消毒后且无线虫的非作土混匀即得到带黑胫病病菌的模拟栽培土。实施例5
将黑胫病病菌液体培养物、腐熟的家禽粪便农家肥、非耕作土按体积比1:2. 5:4的比例配制成模拟栽培土。首先将I份体积的黑胫病病菌固体培养物，加入2. 5份体积6(T65°C 消毒、杀菌处理后的腐熟饼肥(粉碎至粒径f 3mm)充分混合、拌匀；再将4份体积经5(T55°C 消毒后且无线虫的非耕作土混匀即得到带黑胫病病菌的模拟栽培土。实施例6
将黑胫病病菌液体培养物、草炭与农家肥组成的复合栽培基料、非耕作土按体积比 1:3:5的比例配制成模拟栽培土。首先将I份体积的黑胫病病菌固体培养物，加入3份体积 5(T55°C消毒、杀菌处理后的上述复合栽培基料(粉碎至粒径f 3mm)充分混合、拌匀；再将5 份体积经5(T55°C消毒后且无线虫的非作土混匀即得到带黑胫病病菌的模拟栽培土。实施例7
将黑胫病病菌液体培养物、草炭与饼肥组成的复合栽培基料、非耕作土按体积比1:3:6 的比例配制成模拟栽培土。首先将I份体积的黑胫病病菌固体培养物，加入3份体积 5(T55°C消毒、杀菌处理后的上述复合栽培基料(粉碎至粒径f 3mm)充分混合、拌匀；再将6 份体积经5(T55°C消毒后且无线虫的薯类耕作土混匀即得到带黑胫病病菌的模拟栽培土。
权利要求
1.一种带目标发病病菌的模拟栽培土，包括目标病菌培养物、栽培基料与基土，其特性在于所述的目标病菌培养物、栽培基料与基土的体积比为1:21:41。
2.根据权利要求I所述的带目标发病病菌的模拟栽培土，其特性在于所述的目标病菌培养物、栽培基料与基土的体积比为1:2. 5^3. 5:5 7。
3.根据权利要求I或2所述的带目标发病病菌的模拟栽培土，其特性在于所述的目标病菌培养物为固体培养物或液体培养物；所述的栽培基料为草炭、农家肥或饼肥中的任意一种或一种以上的混合物；所述的基土为腐殖土、耕作土或非耕作土中的任意一种或一种以上的混合物。
4.根据权利要求I或2所述的带目标发病病菌的模拟栽培土，其特性在于所述的农家肥为人、家禽、牲畜粪便，农作物秸杆经发酵腐熟处理后制成的农家肥。
5.根据权利要求I或2所述的带目标发病病菌的模拟栽培土，其特性在于所述的耕作土为水稻、小麦、豆类、谷类、薯类农作物种植土中的一种或一种以上的混合土。
6.一种制备权利要求广5中任意一项所述的带目标发病病菌的模拟栽培土的方法，包括培养物准备、栽培基质配制和栽培土配制，其特性在于具体包括A、培养物准备，将接种并培养成熟的带烟草黑胫病病菌的培养物捣碎或搅碎成粒径f 3mm的粗粉状；B、栽培基质配制，将破碎好培养物颗粒与经50°C以上高温消毒、杀菌处理后的栽培基料按体积比1:2 4混合，并搅拌混匀制成栽培基质；C、栽培土配制，将栽培基质与基土按体积比1:2 4混合均匀即制成带烟草黑胫病病菌的栽培土。
7.根据权利要求6所述的带目标发病病菌的模拟栽培土制备方法，其特征在于所述的培养物为固体培养物或液体培养物；所述的栽培基料为经过粉碎处理成粒径f 3_的草炭、腐熟的农家肥或饼肥中的任意一种或一种以上的混合物。
8.根据权利要求6所述的带目标发病病菌的模拟栽培土制备方法，其特征在于所述的基土为经5(T60°C高温消毒、杀菌处理且无线虫的腐殖土、耕作土或非耕作土中任意一种或一种以上的混合土，基土粉碎成粒径广3_的粗粉状。
9.一种权利要求广5中任意一项所述的带目标发病病菌的模拟栽培土用于烟草品种对黑胫病的抗感性测定；或筛选防治烟草黑胫病的药剂或生防菌、天然产物。
10.一种权利要求广5中任意一项所述的带目标发病病菌的模拟栽培土用作盆栽土 ； 或塘施烟株根系、撒施烟株根茎四周作为人造病菌土供大田栽培用。
全文摘要
本发明公开了一种带目标发病病菌的模拟栽培土及其制备方法与应用，该法制备的栽培土可以用来测定烟草品种对黑胫病的抗感性、筛选防治烟草黑胫病的药剂或生防菌、天然产物。其制备步骤包括(A)病菌固体培养物的破碎；(B)与栽培基料混匀；(C)与基土混匀。本发明的带病菌栽培土中病菌接种体质量稳定、数量可控，可用于盆栽，也可塘施、撒施烟株根茎四周作为人造病菌土供大田栽培用。应用本发明病菌栽培土比其他方式接种更简便、病菌存活时间更长、感染烟株更有效。
文档编号A01G1/00GK102577790SQ20121002160
公开日2012年7月18日 申请日期2012年1月31日 优先权日2012年1月31日
发明者卢秀萍, 方敦煌, 殷端, 肖炳光 申请人:云南省烟草农业科学研究院